2019-2020學(xué)年高中生物 第1章 基本工程 第1節(jié) 基因工程概述 第1課時(shí) 基因工程的發(fā)展歷程和工具學(xué)案 蘇教版選修3

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1、第1課時(shí) 基因工程的發(fā)展歷程和工具 1.簡(jiǎn)述基因工程的發(fā)展歷程。 2.掌握限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶的作用、特點(diǎn)。(重、難點(diǎn)) 3.掌握質(zhì)粒的含義、特性及其在基因工程中的作用。(重、難點(diǎn)) 知識(shí)點(diǎn)一| 基因工程的發(fā)展歷程和概念 1.理論與技術(shù)基礎(chǔ)的發(fā)展 1953年:沃森和克里克建立了DNA分子雙螺旋結(jié)構(gòu)模型。  ↓ 1957年:科恩伯格等首次發(fā)現(xiàn)DNA聚合酶。  ↓ 1958年:梅塞爾森和斯塔爾發(fā)現(xiàn)DNA半保留復(fù)制的機(jī)理。克里克提出中心法則。  ↓ 1961~1966年:尼倫伯格等破譯遺傳密碼。  ↓ 1967年:羅思和赫林斯基發(fā)現(xiàn)運(yùn)轉(zhuǎn)工具質(zhì)粒。同年

2、,科學(xué)家在大腸桿菌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)DNA連接酶。  ↓ 1970年:特明和巴爾的摩各自在RNA病毒中發(fā)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄酶。史密斯等人分離到限制性核酸內(nèi)切酶。  ↓ 1977年:桑格首次完整基因組的測(cè)序工作。 2.重組DNA技術(shù)的發(fā)展 (1)1972年科學(xué)家伯格等實(shí)驗(yàn)。 ①過(guò)程: ②成就:世界上首次DNA分子體外重組。 (2)1973年科學(xué)家科恩等實(shí)驗(yàn)。 重組DNA分子大腸桿菌―→子代大腸桿菌(雙重抗性) (3)不同物種間DNA重組實(shí)驗(yàn)。 ①過(guò)程:非洲爪蟾核糖體蛋白基因的DNA片段+大腸桿菌質(zhì)?!亟MDNA→轉(zhuǎn)入大腸桿菌→轉(zhuǎn)錄出相應(yīng) mRNA。 ②成就:打破了傳統(tǒng)的種間遺傳物

3、質(zhì)不能交換的重重壁壘,開(kāi)創(chuàng)了基因工程。 3.基因工程的概念 方法 在體外通過(guò)人工“剪切”和“拼接”等方法 原理 對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合 操作水平 基因水平 目的 產(chǎn)生人類需要的基因產(chǎn)物 使大米擁有某些細(xì)菌才具有的抗蟲(chóng)基因能夠減少化學(xué)殺蟲(chóng)劑的使用量,既高產(chǎn)又環(huán)保。 請(qǐng)你結(jié)合以上內(nèi)容探究下列問(wèn)題。 探討:你知道擁有某些細(xì)菌抗蟲(chóng)基因的大米是通過(guò)何種技術(shù)培育出來(lái)的嗎? 提示:基因工程。 探討:通過(guò)分析基因工程的概念,討論基因工程的原理是什么?與有性雜交育種有何區(qū)別? 提示:原理:基因重組。 區(qū)別:打破物種限制,實(shí)現(xiàn)不同物種間的基因交流。 探討:將人

4、的胰島素基因?qū)氪竽c桿菌體內(nèi),通過(guò)大腸桿菌能大量生產(chǎn)人胰島素。請(qǐng)分析人胰島素基因能在大腸桿菌體內(nèi)表達(dá)的理論基礎(chǔ)是什么? 提示:生物共用一套遺傳密碼。 1.基因重組的三種主要類型 (1)交叉互換:減數(shù)第一次分裂四分體時(shí)期,同源染色體上的非姐妹染色單體間的交叉互換。 (2)自由組合:減數(shù)第一次分裂后期,非同源染色體上的非等位基因隨著非同源染色體的自由組合而組合。 (3)基因工程:轉(zhuǎn)基因生物因外源基因?qū)攵@得的新性狀是可以遺傳的。 2.基因工程的理論基礎(chǔ) (1)拼接的基礎(chǔ): ①基本組成單位相同:不同生物的DNA分子都是由脫氧核苷酸構(gòu)成的。 ②空間結(jié)構(gòu)相同:不同生物的DNA分子

5、一般都是由兩條反向平行的脫氧核苷酸長(zhǎng)鏈形成的規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)。 ③堿基配對(duì)方式相同:不同生物的DNA分子中兩條鏈之間的堿基配對(duì)方式均是A與T配對(duì),G與C配對(duì)。 (2)表達(dá)的基礎(chǔ):生物界共用一套遺傳密碼,相同的遺傳信息在不同生物體內(nèi)可表達(dá)出相同的蛋白質(zhì)。 1.干擾素是治療癌癥的重要藥物,它必須從血液中提取,每升人血中只能提取0.5 μg,所以價(jià)格昂貴。美國(guó)加利福尼亞的某生物制品公司用如下方法生產(chǎn)干擾素。如圖所示,可以看出該公司生產(chǎn)干擾素運(yùn)用的方法是(  ) A.個(gè)體間的雜交  B.基因工程 C.細(xì)胞融合 D.器官移植 【解析】 從圖中可以看出整個(gè)過(guò)程為將人的淋巴細(xì)胞中控制干擾

6、素合成的基因與質(zhì)粒結(jié)合后導(dǎo)入酵母菌,并從酵母菌產(chǎn)物中提取干擾素,這項(xiàng)技術(shù)為基因工程。 【答案】 B 2.下列對(duì)基因工程的理解,正確的是(  ) ①它是一種按照人們的意愿,定向改造生物遺傳特性的工程?、诳蓪?duì)基因隨意進(jìn)行人為改造?、凼求w外進(jìn)行的人為的基因重組?、茉趯?shí)驗(yàn)室內(nèi),利用相關(guān)的酶和原料合成DNA ⑤主要技術(shù)為體外DNA重組技術(shù)和轉(zhuǎn)基因技術(shù)?、拊贒NA分子水平上進(jìn)行操作 ⑦一旦成功,便可遺傳 A.①②③④⑤⑥ B.①③④⑤⑥⑦ C.①③⑤⑥⑦ D.①②③⑤⑥⑦ 【解析】 基因工程可以對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合,然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無(wú)性繁殖,使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá),產(chǎn)生出

7、人類所需要的基因產(chǎn)物,而不是對(duì)基因進(jìn)行人為改造。 【答案】 C 知識(shí)點(diǎn)二| 基因工程的工具——酶與載體 1.限制性核酸內(nèi)切酶(也稱“限制酶”) (1)來(lái)源:主要來(lái)自于原核生物。 (2)特點(diǎn):具有專一性。 ①識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的脫氧核苷酸序列。 ②切割特定脫氧核苷酸序列中的特定位點(diǎn)。 (3)作用:斷開(kāi)每一條鏈中特定部位的兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。 (4)結(jié)果:產(chǎn)生黏性末端或平口末端。 2.DNA連接酶——“分子針線” (1)作用:將雙鏈DNA片段“縫合”,恢復(fù)被限制性核酸內(nèi)切酶切開(kāi)的兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。 (2)結(jié)果:形成重組DNA分子。

8、3.載體——運(yùn)載工具 (1)功能:將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞。 (2)種類:質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物以及一些動(dòng)、植物病毒。 (3)質(zhì)粒 ①本質(zhì):來(lái)自細(xì)菌細(xì)胞中的一種很小的環(huán)狀DNA分子,是最早應(yīng)用的載體。 ②組成:最簡(jiǎn)單的質(zhì)粒載體必須包括復(fù)制區(qū)、標(biāo)記基因、目的基因插入位點(diǎn)。 我國(guó)科學(xué)家已成功將與植物花青素代謝有關(guān)的基因?qū)牖ɑ苤参锇珷颗V?,轉(zhuǎn)基因矮牽牛呈現(xiàn)出自然界沒(méi)有的顏色變異,大大提高了花卉的觀賞價(jià)值。 請(qǐng)你依據(jù)以上材料探究下列問(wèn)題: 探討:科學(xué)家進(jìn)行轉(zhuǎn)基因技術(shù)操作時(shí),需要用到哪些基本的工具? 提示:限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和載體。 探討:結(jié)合DNA復(fù)制的過(guò)程分析

9、,限制性核酸內(nèi)切酶和DNA解旋酶的作用部位有何不同? 提示:限制性核酸內(nèi)切酶作用于磷酸和脫氧核糖之間的磷酸二酯鍵,DNA解旋酶作用于堿基對(duì)之間的氫鍵。 探討:下圖所示過(guò)程是哪類酶作用的結(jié)果?該酶識(shí)別的堿基序列及切點(diǎn)是什么?這體現(xiàn)了該類酶具有什么特性? 提示:限制性核酸內(nèi)切酶。識(shí)別的堿基序列為GAATTC,切點(diǎn)在G和A之間。特異性。 探討:質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)是什么?來(lái)源于何類生物? 提示:化學(xué)本質(zhì):環(huán)狀DNA分子。來(lái)源:細(xì)菌、酵母菌。 1.限制性核酸內(nèi)切酶與DNA連接酶的比較 (1)區(qū)別: 作用 應(yīng)用 限制性核酸內(nèi)切酶 使特定部位的磷酸二酯鍵斷開(kāi) 用于提取目的基因

10、和切割載體 DNA連接酶 在DNA片段之間重新形成磷酸二酯鍵 用于基因表達(dá)載體的構(gòu)建 (2)兩者的關(guān)系可表示為: 2.DNA連接酶與DNA聚合酶的比較 項(xiàng)目 DNA連接酶 DNA聚合酶 相同點(diǎn) 催化兩個(gè)脫氧核苷酸之間形成磷酸二酯鍵 不同點(diǎn) 模板 不需要模板 需要DNA的一條鏈為模板 作用對(duì)象 游離的DNA片段 單個(gè)的脫氧核苷酸 作用結(jié)果 形成完整的DNA分子 形成DNA的一條鏈 用途 基因工程 DNA復(fù)制 [特別提醒] (1)不同DNA分子用同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割形成的黏性末端都相同;同一個(gè)DNA分子用不同的限制性核酸內(nèi)切酶切割,產(chǎn)生的

11、黏性末端一般不相同。 (2)DNA連接酶無(wú)識(shí)別的特異性,DNA連接酶對(duì)于黏性末端或平口末端都能催化其“縫合”,重新形成DNA分子。 3.載體的作用、條件、種類及質(zhì)粒的相關(guān)知識(shí) 作用 將外源基因送入受體細(xì)胞 條件 ①能在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并穩(wěn)定地保存 ②具有多個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶切點(diǎn) ③具有某些標(biāo)記基因 種類 常用的載體有質(zhì)粒、λ噬菌體、動(dòng)植物病毒 質(zhì)粒 ①質(zhì)粒是最早應(yīng)用的載體 ②結(jié)構(gòu):細(xì)菌細(xì)胞中的很小的環(huán)狀DNA分子 ③特性:質(zhì)粒的存在對(duì)宿主細(xì)胞無(wú)影響 ④重組質(zhì)粒的形成:用同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割質(zhì)粒和外源DNA分子,并通過(guò)DNA連接酶的連接,就能將質(zhì)粒和外源DNA分

12、子組成一個(gè)重組質(zhì)粒(重組DNA分子) [特別提醒] (1)一般來(lái)說(shuō),天然載體往往不能滿足人類的所有要求,因此人們常根據(jù)不同的目的和需要,對(duì)某些天然的載體進(jìn)行人工改造。 (2)常見(jiàn)的標(biāo)記基因有抗生素抗性基因、產(chǎn)生特定顏色的表達(dá)產(chǎn)物基因、發(fā)光基因等。 (3)注意與細(xì)胞膜上載體的區(qū)別,兩者的化學(xué)本質(zhì)和作用都不相同。 (4)質(zhì)粒能自我復(fù)制,其復(fù)制場(chǎng)所既可是自身細(xì)胞、受體細(xì)胞內(nèi),也可以是體外。 1.基因的運(yùn)輸工具——載體,必須具備的條件之一及理由是(  ) A.能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定地保存下來(lái)并大量復(fù)制,以便提供大量的目的基因 B.具有多個(gè)限制酶切點(diǎn),以便于目的基因的表達(dá) C.具有某

13、些標(biāo)記基因,以便為目的基因的表達(dá)提供條件 D.能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存,以便于進(jìn)行篩選 【解析】 載體作為目的基因的運(yùn)輸工具,能將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。作為載體必須具備三個(gè)條件:①能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定地保存,并能夠復(fù)制,以便提供大量的目的基因;②有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn),便于與外源基因結(jié)合;③具有標(biāo)記基因,便于進(jìn)行檢測(cè)和篩選。 【答案】 A 2.目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒,pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體,其主要結(jié)構(gòu)如下圖所示。 (1)構(gòu)建人工質(zhì)粒時(shí)要有抗性基因,以便于_________________。 (2)

14、 pBR322質(zhì)粒中有單個(gè)EcoR Ⅰ限制酶作用位點(diǎn),EcoR Ⅰ只能識(shí)別序列—GAATTC—,并只能在G和A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoR Ⅰ的切點(diǎn),請(qǐng)畫(huà)出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoR Ⅰ切割后所形成的黏性末端:__________________________。 (3)pBR322質(zhì)粒中另有單個(gè)的Bam HⅠ 限制酶作用位點(diǎn),現(xiàn)將經(jīng)Bam HⅠ 處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶Bgl Ⅱ處理得到的目的基因,通過(guò)DNA連接酶作用恢復(fù)________鍵,成功獲得了重組質(zhì)粒,說(shuō)明__________________________。 (4)為了檢測(cè)上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無(wú)am

15、pR和tetR的大腸桿菌,將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng),得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上,使絨布面沾上菌落,然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng),得到如圖三的結(jié)果(空圈表示與圖二對(duì)照無(wú)菌落的位置),與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是___________________________________,圖三結(jié)果顯示,多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是______________________________________。 【解析】 (1)質(zhì)粒作為基因表達(dá)載體的條件之一是要有抗性基因,以便于鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞或篩選導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞。 (2)同一限制酶切割DNA

16、分子產(chǎn)生的黏性末端相同,根據(jù)題意可知:該目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端為: 目的基因 —G    AATTC—……—G   AATTC— —CTTAA    G—……—CTTAA   G— (3)DNA連接酶催化兩個(gè)DNA片段形成磷酸二酯鍵;而通過(guò)DNA連接酶作用能將兩個(gè)DNA分子片段連接,表明經(jīng)兩種限制酶(BamH Ⅰ和Bgl Ⅱ)切割得到的DNA片段,其黏性末端相同。 (4)由題意知:由于與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的大腸桿菌能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng),而不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng),故可推知與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落能抗氨芐青霉素,但不能抗四環(huán)素。由圖二、圖三

17、結(jié)果顯示,多數(shù)大腸桿菌都能抗氨芐青霉素,而經(jīng)限制酶BamH Ⅰ 作用后,標(biāo)記基因tetR被破壞,故導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌不能抗四環(huán)素,即多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是pBR322質(zhì)粒。 【答案】 (1)鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞或篩選導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞 (2)如下所示: 目的基因 —G    AATTC—……—G   AATTC— —CTTAA    G—……—CTTAA   G— (3)磷酸二酯 兩種限制酶(BamH Ⅰ和Bgl Ⅱ)切割得到的黏性末端相同 (4)能抗氨芐青霉素,但不能抗四環(huán)素 pBR322質(zhì)粒 [課堂小結(jié)] 知識(shí)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 核心語(yǔ)句歸納 1.基因工程

18、是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,又叫做DNA重組技術(shù)。 2.基因工程的原理是基因重組,處理對(duì)象是DNA或基因。 3.限制性核酸內(nèi)切酶是能夠識(shí)別和切割DNA分子的酶,又叫限制酶。DNA連接酶能將被限制性核酸內(nèi)切酶切開(kāi)的磷酸二酯鍵重新形成。 4.載體的作用是與含有外源基因(目的基因)的DNA片段結(jié)合,將外源基因送入受體細(xì)胞中。 1.基因工程是一種新興生物技術(shù),實(shí)施該工程的最終目的是(  ) A.定向提取生物體DNA分子 B.定向?qū)NA分子進(jìn)行人工“剪切” C.在生物體外對(duì)DNA分子進(jìn)行改造 D.定向改造生物的遺傳性狀 【解析】 基因工程也稱DNA重組技術(shù),它是按照人類

19、的意愿,將某種基因有計(jì)劃地轉(zhuǎn)移到另一種生物中的新技術(shù),故實(shí)施該工程的最終目的是定向改造生物的遺傳性狀。 【答案】 D 2.限制性內(nèi)切酶的作用實(shí)際上就是把DNA上某些化學(xué)鍵打斷,一種能對(duì)GAATTC專一識(shí)別的限制酶,打斷的化學(xué)鍵是(  ) A.G與A之間的鍵 B.G與C之間的鍵 C.A與T之間的鍵 D.磷酸與脫氧核糖之間的鍵 【解析】 限制酶主要從原核生物中分離、純化出來(lái),它能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。限制酶的作用部位是磷酸和脫氧核糖之間的磷酸二酯鍵,而一條鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間的化學(xué)鍵為—脫氧核糖—磷酸—脫氧

20、核糖—。 【答案】 D 3.如下圖,兩個(gè)核酸片段在適宜條件下,經(jīng)X酶的催化作用,發(fā)生下述變化,則X酶是(  ) A.DNA連接酶 B.RNA聚合酶 C.DNA聚合酶 D.限制性核酸內(nèi)切酶 【解析】 DNA連接酶的作用是將兩個(gè)黏性末端的磷酸和脫氧核糖連接在一起;RNA聚合酶是在RNA復(fù)制或轉(zhuǎn)錄過(guò)程中,把核糖核苷酸連接在一起;DNA聚合酶是在DNA復(fù)制過(guò)程催化脫氧核苷酸的聚合反應(yīng);限制性核酸內(nèi)切酶是在獲取目的基因時(shí)識(shí)別特定的堿基序列,切出黏性末端或平口末端。圖示為將兩個(gè)黏性末端的磷酸和脫氧核糖連接在一起。 【答案】 A 4.下列四條DNA片段,可能是由同一種限制酶切割而成的是(  ) A.①② B.②③ C.③④ D.②④ 【解析】 只有②和④的黏性末端的堿基都是互補(bǔ)的,它們可能是由同一種限制酶切割而成的。 【答案】 D 5.下列關(guān)于限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別序列和切開(kāi)部位的特點(diǎn)的敘述,錯(cuò)誤的是(  ) A.所識(shí)別的序列都可以找到一條中軸線 B.中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列 C.只識(shí)別和切斷特定的脫氧核苷酸序列的 D.在任何部位都能將DNA切開(kāi) 【解析】 一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的脫氧核苷酸序列,并且能在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子。 【答案】 D - 10 -

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