2018高考生物大二輪復習 第01部分 專題07 現(xiàn)代生物科技專題 整合考點21 基因工程和細胞工程學案

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1、 整合考點21　基因工程和細胞工程 考綱 要求 考頻(全國卷) 1.基因工程的誕生 Ⅰ 5年0考 2.基因工程的原理及技術(含PCR) Ⅱ 5年7考 3.基因工程的應用 Ⅱ 5年4考 4.蛋白質(zhì)工程 Ⅰ 5年1考 5.植物的組織培養(yǎng) Ⅱ 5年4考 6.動物的細胞培養(yǎng)與體細胞克隆 Ⅰ 5年6考 7.細胞融合與單克隆抗體 Ⅱ 5年5考 8.動物胚胎發(fā)育的基本過程與胚胎工程的理論基礎 Ⅰ 5年4考 9.胚胎干細胞的移植 Ⅰ 5年3考 10.胚胎工程的應用 Ⅱ 5年4考 11.簡述生態(tài)工程的原理 Ⅱ 5年1考 12.生態(tài)工

2、程的實例 Ⅰ 5年0考 1．理清基因工程3種操作工具的作用與特點 限制酶 DNA連接酶 載體 作用 切割目的基因和載體 拼接DNA片段形成重組DNA分子 攜帶目的基因進入受體細胞 作用 部位 兩核苷酸的脫氧核糖與磷酸間形成的磷酸二酯鍵 作用 特點 (條 件) (1)識別特定的核苷酸序列； (2)在特定位點上切割DNA分子 (1)E·coliDNA連接酶只能連接黏性末端； (2)T4DNA連接酶能連接黏性末端和平末端 (1)能在宿主細胞內(nèi)穩(wěn)定存在并大量復制； (2)有一個至多個限制酶切割位點； (3)具有特殊的標記基因 2．掌

3、握基因工程的操作步驟 (1)目的基因的獲取途徑： 方法 具體操作 直接分離 從自然界已有的物種中分離，如從基因文庫中獲取 人工 合成 化學 合成 已知核苷酸序列的較小基因，直接利用DNA合成儀用化學方法合成，不需要模板 反轉(zhuǎn) 錄法 以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下人工合成 PCR 技術 擴增 目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合，然后在DNA聚合酶作用下延伸 (2)基因表達載體的構建——重組質(zhì)粒的構建： ①表達載體的組成：目的基因＋啟動子＋終止子＋標記基因＋復制原點。 ②啟動子和終止子：啟動子是RNA聚合酶結合位點，啟動轉(zhuǎn)錄；終

4、止子是終止轉(zhuǎn)錄的位點。 ③基因表達載體的構建過程 (3)將目的基因?qū)胧荏w細胞： 植物細胞 動物細胞 微生物細胞 常用方法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法 顯微注射技術 感受態(tài)細胞法(用Ca2＋處理) 受體細胞 受精卵、體細胞 受精卵 原核細胞 (4)目的基因的檢測與鑒定： 類型 步驟 檢測內(nèi)容 方法 結果顯示 分子 檢測 第一步 目的基因是否進入受體細胞 DNA分子雜交(DNA和DNA之間) 是否成功顯 示出雜交帶 第二步 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA 分子雜交技術(DNA和mRNA之間) 是否成功顯 示出雜交帶 第

5、三步 目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì) 抗原—抗體雜交 是否成功顯 示出雜交帶 個體 水平 鑒定 做抗蟲或抗病的接種實驗，以確定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能進行活性比較，以確定功能是否相同 3．理清植物細胞工程兩大技術 4．比較并把握細胞工程的幾個流程圖 細胞工程技術 技術過程圖示 植物 組織 培養(yǎng) 動物 細胞 培養(yǎng) 植物 體細 胞雜 交 動物 細胞 的融 合 單克 隆抗 體的 制備 核移 植 5．動物細胞培養(yǎng)的特殊條件歸納 (1)胰蛋白酶的使用：首先用胰蛋白酶處理動物的器官或組織

6、，以制備單細胞懸液；培養(yǎng)過程中發(fā)生接觸抑制時，同樣需要用胰蛋白酶使細胞分散開。 (2)避免雜菌污染的措施：培養(yǎng)液及培養(yǎng)用具滅菌處理；加入一定量的抗生素；定期更換培養(yǎng)液。 (3)特殊的營養(yǎng)條件： ①液體培養(yǎng)基。②加入動物血清、血漿等。③通入氧氣以滿足代謝的需要。④通入二氧化碳以維持培養(yǎng)液的pH。 6．澄清容易混淆的三種細胞——雜種細胞、重組細胞和雜交細胞 (1)雜種細胞：植物體細胞雜交過程中，兩種細胞去掉細胞壁之后形成的原生質(zhì)體融合，融合的原生質(zhì)體出現(xiàn)細胞壁之后形成的細胞叫雜種細胞。 (2)重組細胞：體細胞的細胞核移植到去核卵母細胞之后形成的細胞叫重組細胞。 (3)雜交細胞：動物細

7、胞融合形成的細胞常稱為雜交細胞。 　聚焦基因工程 1．(2016·全國卷Ⅲ)圖(a)中的三個DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三種限制性內(nèi)切酶的識別序列與切割位點，圖(b)為某種表達載體的示意圖(載體上的EcoR I、Sau3A I的切點是唯一的)。 圖(a) 圖(b) 根據(jù)基因工程的有關知識，回答下列問題： (1)經(jīng)BamH I酶切后得到的目的基因可以與上述表達載體被________酶切后的產(chǎn)物連接，理由是 ________________________________________________________________

8、________ ________________________________________________________________________。 (2)若某人利用圖(b)所示的表達載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖(c)所示。這三種重組子中，不能在宿主細胞中表達目的基因產(chǎn)物的有________，不能表達的原因是________________________________________________________________________ __________________________________________________

9、______________________。 (3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有________和________，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是________。 解析：(1)由于限制酶Sau3AI與BamHI切割后形成的黏性末端相同，所以經(jīng)BamHI酶切割得到的目的基因可以與上述表達載體被Sau3AⅠ酶切后的產(chǎn)物連接。(2)在基因表達載體中，啟動子應位于目的基因的首端，終止子應位于目的基因的尾端，這樣目的基因才能表達。圖中甲、丙均不符合，所以不能表達目的基因的產(chǎn)物。(3)常見DNA連接酶的有E·coliDNA連接酶和T4DNA連接酶，其中既能連接黏

10、性末端又能連接平末端的是T4DNA連接酶。 答案：(1)Sau3A I　兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端　(2)甲和丙　甲中目的基因插入在啟動子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，兩者目的基因均不能轉(zhuǎn)錄　(3)E·coliDNA連接酶　T4DNA連接酶　T4DNA連接酶 2．(2015·全國卷Ⅰ)HIV屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒，是艾滋病的病原體，回答下列問題： (1)用基因工程方法制備HIV的某蛋白(目的蛋白)時，可先提取HIV中的________，以其作為模板，在________的作用下合成________，獲取該目的蛋白的基因，構建重組表達載體，隨后導入受體細胞。 (2)從受體細

11、胞中分離純化出目的蛋白，該蛋白作為抗原注入機體后，刺激機體產(chǎn)生的可與此蛋白結合的相應分泌蛋白是________，該分泌蛋白可用于檢測受試者血清中的HIV，檢測的原理是 ________________________________________________________________________。 (3)已知某種菌導致的肺炎在健康人群中罕見，但是在艾滋病患者中卻多發(fā)。引起這種現(xiàn)象的根本原因是HIV主要感染和破壞了患者的部分________細胞，降低了患者免疫系統(tǒng)的防衛(wèi)功能。 (4)人的免疫系統(tǒng)有________癌細胞的功能。艾滋病患者由于免疫功能缺陷，易發(fā)生惡性腫瘤。

12、解析：(1)HIV屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒，其遺傳物質(zhì)是RNA，若用基因工程方法制備HIV的某蛋白時，需要在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下形成DNA，然后再通過轉(zhuǎn)錄和翻譯獲得目的蛋白。(2)抗原注入機體后，刺激機體產(chǎn)生的可與之結合的相應分泌蛋白被稱為抗體，抗體能識別抗原上的抗原決定簇，所以抗原抗體發(fā)生特異性結合。(3)HIV進入人體后，最終進入T淋巴細胞大量繁殖，破壞T淋巴細胞，最終使免疫細胞遭到完全破壞，體液免疫減弱。(4)人體免疫系統(tǒng)除了保護機體不受損害，幫助機體消滅外來的細菌、病毒以及避免發(fā)生疾病的防御功能，還具有監(jiān)控和清除功能：監(jiān)控并清除體內(nèi)已經(jīng)衰老或因其他因素而被破壞的細胞、以及癌變細胞。 答案：(1)RN

13、A　逆轉(zhuǎn)錄酶　cDNA(或DNA)　(2)抗體　抗原抗體特異性結合　(3)T(或T淋巴)　(4)監(jiān)控和清除 3．(2015·全國卷Ⅱ)已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)(P)，該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運蛋白，由305個氨基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸，改變后的蛋白質(zhì)(P1)不但保留P的功能，而且具有酶的催化活性?；卮鹣铝袉栴}： (1)從上述資料可知，若要改變蛋白質(zhì)的功能，可以考慮對蛋白質(zhì)的__________進行改造。 (2)以P基因序列為基礎，獲得P1基因的途徑有修飾________基因或合成________基因。 (3)所獲得的基因表達時是遵循中心

14、法則的，中心法則的全部內(nèi)容包括________的復制；以及遺傳信息在不同分子之間的流動，即： ________________________________________________________________________。 (4)蛋白質(zhì)工程也被稱為第二代基因工程，其基本途徑是從預期蛋白質(zhì)功能出發(fā)，通過________和______，進而確定相對應的脫氧核苷酸序列，據(jù)此獲得基因，再經(jīng)表達、純化獲得蛋白質(zhì)，之后還需要對蛋白質(zhì)的生物__________進行鑒定。 解析：(1)對蛋白質(zhì)的氨基酸序列(或結構)進行改造，可達到改變蛋白質(zhì)的功能的目的。(2)以P基因序列為基礎，獲得P

15、1基因，可以對P基因進行修飾改造，也可以用人工方法合成P1基因。(3)中心法則的全部內(nèi)容包括 DNA的復制、 DNA→ RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白質(zhì)(或轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯)。(4)蛋白質(zhì)工程的基本途徑是從預期蛋白質(zhì)功能出發(fā)，通過設計蛋白質(zhì)結構和推測氨基酸序列，推測相應的核苷酸序列，并獲取基因。經(jīng)表達的蛋白質(zhì)，要對其進行生物功能鑒定。 答案：(1)氨基酸序列(或結構)　(2)P　P1　(3)DNA和RNA(或遺傳物質(zhì))　DNA→RNA、 RNA→DNA、RNA→蛋白質(zhì)(或轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯)　(4)設計蛋白質(zhì)的結構 推測氨基酸序列　功能 4．(2014·全國卷Ⅱ)植物甲具有極強

16、的耐旱性，其耐旱性與某個基因有關。若從該植物中獲得該耐旱基因，并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。 回答下列問題： (1)理論上，基因組文庫含有生物的________基因；而cDNA文庫中含有生物的________基因。 (2)若要從植物甲中獲得耐旱基因，可首先建立該植物的基因組文庫，再從中________出所需的耐旱基因。 (3)將耐旱基因?qū)朕r(nóng)桿菌，并通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導入植物________的體細胞中，經(jīng)過一系列的過程得到再生植株。要確認該耐旱基因是否在再生植株中正確表達，應檢測此再生植株中該基因的________，如果檢測結果呈陽性，再在田間試驗中檢測植株

17、的____________是否得到提高。 (4)假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為3∶1時，則可推測該耐旱基因整合到了________(填“同源染色體的一條上”或“同源染色體的兩條上”)。 解析：(1)基因文庫包括基因組文庫和cDNA文庫，基因組文庫包含生物基因組的全部基因，cDNA文庫是以mRNA反轉(zhuǎn)錄后構建的，只含有已經(jīng)表達的基因(并不是所有基因都會表達)，即部分基因。(2)從基因文庫中獲取目的基因需要進行篩選。(3)要提高植物乙的耐旱性，需要利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將耐旱基因?qū)胫参镆业捏w細胞中。要檢測目的基因(耐旱基因)是否表達應該用抗原抗體雜交檢測目的

18、基因(耐旱基因)的表達產(chǎn)物(即耐旱的相關蛋白質(zhì))；個體水平檢測可以通過田間實驗，觀察檢測其耐旱性情況。(4)如果耐旱基因整合到同源染色體的兩條上，則子代將全部表現(xiàn)耐旱，不會出現(xiàn)性狀分離。[或如果耐旱基因整合到同源染色體的一條上，則轉(zhuǎn)基因植株的基因型可以用A－表示(A表示耐旱基因，－表示另一條染色體上沒有相應的基因)，A－自交后代基因型為AA∶A－∶－－＝1∶2∶1，所以耐旱∶不耐旱＝3∶1，與題意相符。] 答案：(1)全部　部分　(2)篩選　(3)乙　表達產(chǎn)物　耐旱性　(4)同源染色體的一條上 5．圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度(bp即堿基對)和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結構

19、和部分堿基序列?，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。 請回答下列問題： (1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由_________________連接。 (2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是____________末端，其產(chǎn)物長度為____________________。 (3)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T－A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物

20、中共有____________種不同長度的DNA片段。 (4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應選用的限制酶是____________。在導入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加____________的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是_________________________________。 解析：(1)一條脫氧核苷酸鏈中相鄰的兩個堿基之間是通過“—脫氧核糖—磷酸—脫氧核糖—”相連的，要注意與兩條脫氧核苷酸鏈的相鄰堿基之間通過氫鍵相連進行區(qū)分。(2)從

21、SmaⅠ的識別序列和酶切點可見，其切割后產(chǎn)生的是平末端，圖1中DNA片段有兩個SmaⅠ的識別序列，故切割后產(chǎn)生的產(chǎn)物長度為537＝(534＋3)bp、790＝(796－3－3)bp和661＝(658＋3)bp三種。(3)圖示方框內(nèi)發(fā)生堿基對的替換后，形成的d基因失去了1個SmaⅠ的識別序列，故D基因、d基因用SmaⅠ完全切割后產(chǎn)物中除原有的3種長度的DNA片段外，還增加一種長度為1 327 bp的DNA片段。(4)目的基因的兩端都有BamHⅠ的識別序列，質(zhì)粒的啟動子后的抗生素A抗性基因上也有BamHⅠ的識別序列，故應選用的限制酶是BamHⅠ，此時將抗生素B抗性基因作為標記基因，故篩選時培養(yǎng)基中

22、要添加抗生素B。若重組質(zhì)粒已導入了受體細胞卻不能表達，很可能是因為用同種限制酶切割后，目的基因和質(zhì)粒有兩種連接方式，導入受體細胞的重組質(zhì)粒是目的基因和質(zhì)粒反向連接形成的。 答案：(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖　(2)平　537 bp、790 bp、661 bp　(3)4　(4)BamHⅠ　抗生素B　同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接 1．使用限制酶的注意點 (1)一般用同種限制酶切割載體和目的基因。 (2)不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。 2．DNA連接酶≠DNA聚合酶 DNA連接酶連接兩個DNA片段，而DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸添加到脫氧核

23、苷酸鏈上。 3．限制酶≠DNA酶≠解旋酶 限制酶是切割某種特定的脫氧核苷酸序列，并使兩條鏈在特定的位置斷開；DNA酶是將DNA水解為組成單位；解旋酶是將DNA的兩條鏈間的氫鍵打開形成兩條單鏈。 4．啟動子、終止子 (1)啟動子(DNA片段)≠起始密碼子(RNA)。 (2)終止子(DNA片段)≠終止密碼子(RNA) 　聚焦細胞工程 1．(2014·全國卷Ⅰ)某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(能檢測出抗原抗體反應的血清最大稀釋倍數(shù))，結果如下圖所示。 若要制備雜交瘤細胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細胞(

24、染色體數(shù)目40條)，并將該細胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細胞(染色體數(shù)目60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導細胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細胞。 回答下列問題： (1)制備融合所需的B淋巴細胞時，所用免疫小鼠的血清抗體效價需達到16 000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過________次免疫后才能有符合要求的。達到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細胞的是________小鼠，理由是 ________________________________________________________________________。 (

25、2)細胞融合實驗完成后，融合體系中除含有未融合的細胞和雜交瘤細胞外，可能還有______________________________，體系中出現(xiàn)多種類型細胞的原因是 ________________________________________________________________________。 (3)雜交瘤細胞中有________個細胞核，染色體數(shù)目最多是________條。 (4)未融合的B淋巴細胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是 _________________________________________________________________

26、_______。 解析：(1)據(jù)圖分析，第四次注射后X、Y、Z小鼠的血清抗體效價幾乎都達到16 000以上，小鼠Y的B淋巴細胞產(chǎn)生抗體效價最高，最適用于制備單克隆抗體。(2)融合體系中除了未融合的細胞和雜交瘤細胞之外，還有骨髓瘤細胞和B淋巴細胞的自身融合產(chǎn)物，由于細胞膜具有流動性，且誘導之后的細胞融合不具有特異性，故體系中會出現(xiàn)多種類型的細胞。(3)雜交瘤細胞形成后，小鼠的免疫B淋巴細胞核與其骨髓瘤細胞核會融合形成一個細胞核。小鼠的B淋巴細胞(染色體數(shù)目40條)和骨髓瘤細胞(染色體數(shù)目60條)融合后，染色體可達100條。(4)未融合的B淋巴細胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后，仍然不是能惡性增殖的細胞，同時

27、正常細胞的分裂次數(shù)是有限的。 答案：(1)四　Y　Y小鼠的抗體效價最高　(2)B淋巴細胞相互融合形成的細胞，骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞　細胞融合是隨機的，且融合率達不到100% (3)1　100　(4)不能無限增殖 2．(2013·全國卷Ⅱ)甲、乙是染色體數(shù)目相同的兩種二倍體藥用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小組擬培育同時含有A和B的新型藥用植物?；卮鹣铝袉栴}： (1)為了培育該新型藥用植物，可取甲和乙的葉片，先用 ________________________________________________________________________ 酶和_

28、_____酶去除細胞壁，獲得具有活力的________，再用化學誘導劑誘導二者融合。形成的融合細胞進一步培養(yǎng)形成________組織，然后經(jīng)過________形成完整的雜種植株。這種培育技術稱為 ________________________________________________________________________。 (2)上述雜種植株屬于多倍體，多倍體是指 ________________________________________________________________________。 假設甲與乙有性雜交的后代是不育的，而上述雜種植株是可育的，

29、造成這種差異的原因是________________________________________________________________________。 (3)這種雜交植株可通過制作人工種子的方法來大量繁殖。經(jīng)植物組織培養(yǎng)得到的________等材料用人工薄膜包裝后可得到人工種子。 解析：該新型藥用植物是通過植物體細胞雜交技術獲得的，要獲得有活力的原生質(zhì)體才能進行體細胞雜交，因此首先用纖維素酶和果膠酶去掉植物的細胞壁，然后用PEG化學誘導劑(物理方法：離心、振動等)誘導二者的原生質(zhì)體整合。然后采用植物組織培養(yǎng)技術獲得雜種植株，植物組織培養(yǎng)的主要過程是：先脫分化形成愈傷組織，然

30、后再分化形成植物體，利用了植物細胞的全能性。(2)如果植物甲、乙是兩個物種，二者不能通過有性雜交產(chǎn)生可育后代，原因是甲、乙有性雜交所產(chǎn)生的后代在減數(shù)分裂過程中同源染色體聯(lián)會異常，也就是存在著生殖隔離。但植物甲、乙通過植物體細胞雜交技術產(chǎn)生的后代卻是可育的，因為在減數(shù)分裂過程中同源染色體能完成正常的聯(lián)會，產(chǎn)生正常的配子。由于甲、乙都是二倍體，因此，植物體細胞雜交得到的后代是異源多倍體(四倍體)。(3)人工種子生產(chǎn)不受氣候、季節(jié)和地域等因素限制，而且可以避免后代不發(fā)生性狀分離等優(yōu)點，因此，植物細胞工程重要的應用之一是制備人工種子，用到的核心技術是植物組織培養(yǎng)技術。將植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽

31、、頂芽、腋芽等材料用人工薄膜包裝后可得到人工種子。 答案：(1)纖維素酶　果膠酶　原生質(zhì)體　愈傷　再分化(分化)　植物體細胞雜交技術　(2)體細胞中含有三個或三個以上染色體組的個體　在減數(shù)分裂過程中，前者染色體聯(lián)會異常，而后者染色體聯(lián)會正?！?3)胚狀芽、不定芽、頂芽、腋芽 3．科學家從某無限增殖的細胞中分離出無限增殖調(diào)控基因(prG)，該基因能激發(fā)細胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了更為廣闊的前景。請回答下列問題： (1)利用______________________技術制備單克隆抗體，常用聚乙二醇、________________、電激等誘導因素誘導細胞融合。再經(jīng)多次篩選和細胞培養(yǎng)

32、獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的________________細胞。 (2)有人提出用核移植技術構建重組細胞來生產(chǎn)單克隆抗體，請完成設計方案： ①取________________細胞的細胞核，移植到去核的能夠________的細胞中，構成重組細胞(假定移植后細胞核中基因的表達狀態(tài)不受影響)。 ②將重組細胞在________條件下做大規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠________內(nèi)增殖，以獲得大量單克隆抗體。 (3)也有人提出，可以直接通過基因工程導入該調(diào)控基因(prG)來制備單克隆抗體，其思路如圖所示。 ①酶A是指__________，酶B是指________。 ②圖中 Ⅰ 表示___

33、_____________，對 Ⅱ 進行檢測與鑒定的目的是____________，Ⅲ所指細胞具有的特點是__________________________。 解析：(1)在利用動物細胞融合技術制備單克隆抗體的過程中，常用聚乙二醇、滅活的病毒、電激等方法誘導細胞融合，融合后的細胞經(jīng)多次篩選和細胞培養(yǎng)，最終獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。(2)產(chǎn)生單克隆抗體的細胞應具有兩個特點：能無限增殖和產(chǎn)生特定抗體。若用核移植技術構建重組細胞首先取特定抗原刺激的B淋巴細胞的細胞核，移植到去核的能夠無限增殖的細胞中，構成重組細胞；然后將重組細胞進行動物細胞培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，以獲得大量單

34、克隆抗體。(3)基因工程中第一步獲取目的基因；第二步用限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶處理供體DNA和質(zhì)粒，獲取基因表達載體(重組質(zhì)粒)；第三步將重組質(zhì)粒導入受體細胞；第四步檢測目的基因是否導入和表達。 答案：(1)動物細胞融合　滅活的病毒　雜交瘤 (2)①特定抗原刺激的B淋巴　無限增殖?、隗w外　腹腔　(3)①限制性核酸內(nèi)切酶　DNA連接酶　②目的基因(無限增殖調(diào)控基因或prG)　檢測目的基因是否導入和表達　既能無限增殖，又能產(chǎn)生特定抗體 4．科學家利用植物體細胞雜交技術成功獲得了番茄—馬鈴薯雜種植株，為了便于雜種細胞的篩選和鑒定，科學家利用紅色熒光和綠色熒光分別標記番茄和馬鈴薯的原生質(zhì)體

35、膜上的蛋白質(zhì)，其培育過程如圖所示，請據(jù)圖回答下列問題： (1)植物體細胞雜交依據(jù)的生物學原理有____________________________________。 (2)過程①常用的酶是____________________，細胞融合完成的標志是__________________。 (3)植物原生質(zhì)體融合過程常利用化學試劑____________誘導融合，在鑒定雜種原生質(zhì)體時可用顯微鏡觀察，根據(jù)細胞膜表面熒光的不同可觀察到__________種不同的原生質(zhì)體(只考慮細胞兩兩融合的情況)，當觀察到______________________________________時可

36、判斷該原生質(zhì)體是由番茄和馬鈴薯融合而成的。 (4)過程③和過程④依次為________________________________________，過程④中的培養(yǎng)基常添加的植物激素是__________________________。 (5)若番茄細胞內(nèi)有m條染色體，馬鈴薯細胞內(nèi)有n條染色體，則“番茄—馬鈴薯”細胞在有絲分裂后期含______條染色體。若雜種細胞培育成的“番茄—馬鈴薯”植株為四倍體，則此雜種植株的花粉經(jīng)離體培養(yǎng)得到的植株屬于____________植株。 解析：(1)植物體細胞雜交包括原生質(zhì)體融合和培育雜種植株兩大步驟，兩者的原理分別是細胞膜的流動性和植物細胞的全能

37、性。(2)去除細胞壁常用的酶是纖維素酶和果膠酶，細胞融合完成的標志是再生出新的細胞壁。(3)化學促融劑是聚乙二醇，兩兩融合的原生質(zhì)體有三種：番茄—番茄、番茄—馬鈴薯、馬鈴薯—馬鈴薯，其中雜種細胞的細胞表面有兩種顏色的熒光。(4)過程③和過程④分別表示脫分化和再分化，誘導細胞分化所用的植物激素主要是生長素和細胞分裂素。(5)“番茄—馬鈴薯”體細胞有m＋n條染色體，有絲分裂后期染色體數(shù)目加倍，由配子發(fā)育成的個體均為單倍體。 答案：(1)細胞膜的流動性、植物細胞的全能性　(2)纖維素酶和果膠酶　再生出新的細胞壁　(3)聚乙二醇(或PEG)　3　融合的細胞表面既有紅色熒光又有綠色熒光　(4)脫分化和再分化　生長素和細胞分裂素 (5)2(m＋n)　單倍體 14