雙水相萃取技術(shù)

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1、第 四 節(jié) 雙 水 相 萃 取 技 術(shù) 一 、 概 述 1896年 ， 荷 蘭 微 生 物 學(xué) 家 Beijerinck發(fā) 現(xiàn) 聚 合 物的 不 相 容 性 :把 明 膠 與 瓊 脂 或 明 膠 與 可 溶 性 淀 粉 溶液 混 合 時(shí) ， 得 到 一 種 不 透 明 的 混 合 溶 液 ， 靜 置 后分 為 兩 相 ， 上 相 含 有 大 部 分 水 ， 下 相 含 有 大 部 分瓊 脂 （ 或 淀 粉 ） ， 而 兩 相 的 主 要 成 分 都 是 水 . 1955年 ， 瑞 典 倫 德 大 學(xué) 的 Albertsson首 次 利 用 雙水 相 技 術(shù) 從 單 細(xì) 胞 藻 類 中 分 離

2、淀 粉 核 ， 從 此 開 創(chuàng)了 雙 水 相 分 配 技 術(shù) 。 1979年 德 國(guó) GBF的 Kula和 Kroner等 3人 將 雙 水相 體 系 用 于 提 取 酶 和 蛋 白 質(zhì) ， 使 胞 內(nèi) 酶 的 提 取 過(guò)程 大 為 改 善 。 1、 基 本 概 念 及 分 類 雙 水 相 系 統(tǒng) :某 些 親 水 性 高 分 子 聚 合 物 的 水溶 液 超 過(guò) 一 定 濃 度 后 可 形 成 兩 相 . 聚 合 物 -聚 合 物 -水 系 統(tǒng) :聚 合 物 分 子 的 空 間阻 礙 作 用 使 相 互 間 無(wú) 法 滲 透 聚 合 物 -無(wú) 機(jī) 鹽 -水 系 統(tǒng) :鹽 析 作 用 為 什 么

3、 會(huì) 形 成 雙 水 相 ？ 聚 合 物 之 間 的 不 相 容 性 :聚 合 物 分 子 的 空 間 阻 礙 作用 使 相 互 間 無(wú) 法 滲 透 ， 從 而 在 一 定 條 件 下 分 為 兩相 。 只 要 兩 種 聚 合 物 水 溶 液 的 水 溶 性 有 所 差 異 ， 混 合時(shí) 就 可 發(fā) 生 相 分 離 ， 并 且 水 溶 性 差 別 越 大 ， 相 分離 傾 向 也 就 越 大 。 某 些 聚 合 物 的 溶 液 在 與 某 些 無(wú) 機(jī) 鹽 等 低 分 子 質(zhì) 量化 合 物 的 溶 液 相 混 時(shí) ， 只 要 濃 度 達(dá) 到 一 定 值 ， 也會(huì) 產(chǎn) 生 兩 相 。 其 形 成

4、機(jī) 理 是 由 于 鹽 析 作 用 。 雙 水 相 系 統(tǒng) 分 類 雙 聚 合 物 體 系 ： 聚 乙 二 醇 (polyethylene glycol， PEG)/葡 聚 糖 （ dextran， Dx） ；聚 丙 二 醇 （ polypropylene glycol） /聚 乙二 醇 ； 甲 基 纖 維 素 （ methylcellulose） /葡聚 糖 等 。 聚 合 物 和 無(wú) 機(jī) 鹽 體 系 ： PEG/磷 酸 鉀 （ 略 作KPi） 、 PEG/磷 酸 銨 、 PEG/硫 酸 鈉 等 類 型 形 成 上 相 的 聚 合 物 形 成 下 相 的 聚 合 物非 離 子 型 聚 合 物

5、 /非 離 子 型 聚 合 物 聚 乙 二 醇 聚 乙 烯 醇 、 葡 聚 糖 、 聚 蔗 糖 、 聚乙 烯 吡 咯 烷 酮聚 丙 二 醇 聚 乙 二 醇 、 聚 乙 烯 醇 、 葡 聚 糖 、甲 基 聚 丙 二 醇 、 羥 丙 基 葡 聚 糖 、聚 乙 烯 吡 咯 烷 酮羥 丙 基 葡 聚 糖 葡 聚 糖聚 蔗 糖 葡 聚 糖乙 基 羥 基 纖 維 素 葡 聚 糖甲 基 纖 維 素 羥 丙 基 葡 聚 糖 、 葡 聚 糖高 分 子 電 解 質(zhì) /非 離 子 型 聚 合 物 羧 甲 基 葡 聚 糖 鈉 鹽 聚 乙 二 醇 高 分 子 電 解 質(zhì) /高 分 子 電 解 質(zhì) 葡 聚 糖 硫 酸 鈉

6、 羧 甲 基 纖 維 素 鈉羧 甲 基 葡 聚 糖 鈉 鹽 羧 甲 基 纖 維 素 鈉非 離 子 型 聚 合 物 /低 分 子 量 化 合 物 葡 聚 糖 丙 醇非 離 子 型 聚 合 物 /無(wú) 機(jī) 鹽 聚 乙 二 醇 磷 酸 鉀 、 硫 酸 銨 、 硫 酸 鎂 、 硫 酸鈉 、 酒 石 酸 鉀 鈉 、 甲 酸 鈉 與 一 般 的 水 -有 機(jī) 溶 劑 體 系 相 比 較 有 什 么 不 同 ？ 雙 水 相 體 系 中 兩 相 的 性 質(zhì) 差 別 （ 如 密 度 和折 射 率 等 ） 較 小 。 由 于 折 射 率 的 差 別 甚 小 ，有 時(shí) 甚 至 都 難 于 發(fā) 現(xiàn) 它 們 的 相 界

7、面 。 兩 相間 的 界 面 張 力 也 很 小 ， 僅 為 10-510-4 N/m（ 一 般 體 系 為 10-32 10-2 N/m） 。 2、 雙 水 相 萃 取 技 術(shù) 的 基 本 特 點(diǎn) 兩 相 的 性 質(zhì) 差 別 （ 如 密 度 和 折 射 率 等 ） 較 小 兩 相 間 的 界 面 張 力 也 很 小 （ 一 ） 條 件 溫 和 ， 體 系 具 有 生 物 親 和 性（ 二 ） 所 需 溶 液 少 ， 操 作 方 便（ 三 ） 分 離 迅 速 ， 步 驟 簡(jiǎn) 便（ 四 ） 操 作 易 于 控 制（ 五 ） 可 簡(jiǎn) 化 分 離 步 驟 （ 六 ） 能 進(jìn) 行 萃 取 性 的 生

8、物 轉(zhuǎn) 化（ 七 ） 親 和 萃 取 （ 親 和 分 配 ） 可 大 大 提 高 分 配 系 數(shù) 和萃 取 專 一 性 （ 八 ） 易 于 工 藝 的 連 續(xù) 化 生 產(chǎn) 二 、 雙 水 相 分 配 原 理 及 其 理 論 基 礎(chǔ)（ 一 ） 雙 水 相 系 統(tǒng) 分 配 原 理 是 否 會(huì) 形 成 雙 水 相 ， 取 決 于 混 合 熵 增 和 分 子 間 作用 力 兩 個(gè) 因 素 。 混 合 是 自 發(fā) 的 熵 增 過(guò) 程 ， 而 分 子 間 相 互 作 用 力 則隨 分 子 量 的 變 大 而 增 強(qiáng) 。 當(dāng) 兩 種 高 分 子 聚 合 物 之 間 互 不 相 溶 時(shí) ， 由 于 相 對(duì)分

9、子 質(zhì) 量 較 大 ， 分 子 間 的 相 互 排 斥 作 用 與 混 合 過(guò)程 的 熵 增 加 相 比 占 主 導(dǎo) 地 位 ， 一 種 聚 合 物 分 子 的周 圍 將 聚 集 同 種 分 子 而 排 斥 異 種 分 子 ， 當(dāng) 達(dá) 到 平衡 時(shí) ， 即 形 成 富 含 兩 種 不 同 聚 合 物 的 兩 相 。 上 、 下 相 的 組 成 取 決 于 兩 種 聚 合 物 （ 如PEG/Dx） 的 加 入 量 以 及 其 分 子 質(zhì) 量 的 大 小 。 當(dāng) 物 質(zhì) 進(jìn) 入 雙 水 相 體 系 后 ， 由 于 表 面 性 質(zhì) 、電 荷 作 用 和 各 種 作 用 力 （ 如 憎 水 鍵 、 氫

10、 鍵和 離 子 鍵 等 ） 的 存 在 和 環(huán) 境 的 影 響 ， 使 其在 上 、 下 相 中 的 濃 度 不 同 。 分 配 系 數(shù) K不 同 而 分 離 相 圖 雙 水 相 形 成 條 件 和 定 量關(guān) 系 可 用 相 圖 表 示 。 雙 結(jié) 點(diǎn) 線 ： 把 均 相 區(qū) 和兩 相 區(qū) 域 分 隔 開 。 系 線 ： 連 接 雙 結(jié) 點(diǎn) 線 上兩 點(diǎn) 的 直 線 。 臨 界 點(diǎn) ： 當(dāng) 系 線 長(zhǎng) 度 趨向 于 零 時(shí) ， 即 在 圖 中 的K點(diǎn) ， 兩 相 差 別 消 失 ，任 何 溶 質(zhì) 在 兩 相 中 的 分配 系 數(shù) 均 為 1， 成 為 單相 體 系 。 K Pi質(zhì) 量 分 數(shù)

11、/%PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)/% MTBMVVBT 在 同 一 條 系 線 上 的 各 點(diǎn) 分 成 的 兩 相 具 有 相同 的 組 成 ， 但 體 積 比 不 同 。 當(dāng) 上 下 兩 相 間 密 度 差 小 時(shí) ， 兩 相 的 體 積 近似 服 從 杠 桿 規(guī) 則 。MTBMVV BT （ 二 ） 雙 水 相 中 的 分 配 平 衡 溶 質(zhì) 在 雙 水 相 中 的 分 配 系 數(shù) 也 用 K=cT/cB表 示 。 分 配 系 數(shù) 是 各 種 相 互 作 用 的 和 . lnKP=lnKE+lnKS+lnKA 總 分 配 系 數(shù) KP: lnKE、 lnKS、 lnKA分 別 為 靜 電 作用 、 疏

12、水 作 用 、 親 和 作 用 對(duì) 溶 質(zhì) 分 配 系 數(shù) 的 貢 獻(xiàn) 。 在 系 線 上 各 點(diǎn) 處 系 統(tǒng) 的 總 濃 度 不 同 ， 但 均 分 成 組成 相 同 而 體 積 不 同 的 兩 相 ， 在 同 一 條 系 線 上 的 不同 點(diǎn) ， 物 質(zhì) 的 分 配 系 數(shù) 相 同 。 （ 一 ） 靜 電 作 用 lnK=lnKo+FZ/RT Ko為 溶 質(zhì) 靜 電 荷 為 零 時(shí) 的 分 配 系 數(shù) ； F為 法 拉 第常 數(shù) ； Z為 溶 質(zhì) 的 靜 電 荷 數(shù) ； 為 相 間 電 位 差 。 荷 電 解 質(zhì) 的 分 配 系 數(shù) 的 對(duì) 數(shù) 與 溶 質(zhì) 的 凈 電 荷 數(shù) 成正 比 .

13、 分 配 系 數(shù) 與 靜 電 荷 數(shù) 的 關(guān) 系 因 無(wú) 機(jī) 鹽 而 異 ,同 一 雙水 相 系 統(tǒng) 中 添 加 不 同 的 鹽 產(chǎn) 生 的 相 間 電 位 不 同 帶 負(fù) 電 荷 的 蛋 白 質(zhì) 在 雙 水 相 種 的 分 配 系 數(shù) K : K+ Na+ NH4+ Li+ (C4H9)4N+ ClO 4- SCN- I- Br- Cl- CH3CO2- F- H2PO4- HPO42- （ 二 ） 疏 水 作 用 一 般 情 況 下 ， 蛋 白 質(zhì) 的 表 面 均 存 在 疏 水 區(qū) ， 疏 水區(qū) 所 占 比 表 面 越 大 ， 其 疏 水 性 越 強(qiáng) .不 同 組 分 由 于其 表 面

14、疏 水 性 的 差 異 使 得 其 各 自 在 上 下 相 中 產(chǎn) 生相 應(yīng) 的 分 配 平 衡 。 lnKs HF(RH +B) HF為 相 間 的 疏 水 性 差 ， 也 稱 疏 水 性 因 子 ； RH為氨 基 酸 的 相 對(duì) 疏 水 性 ； B為 比 例 常 數(shù) 。 lnKo=HF HFS HFS蛋 白 質(zhì) 的 表 面 疏 水 性 . lnK0 HF(HFS+ HFS) HFS為 鹽 濃 度 增 加 引 起 的 HFS值 增 量 。 lnK HF(HFS+ HFS)+ FZ/RT （ 三 ） 界 面 張 力 作 用 非 電 解 質(zhì) 型 溶 質(zhì) 在 液 體 中 的 界 面 張 力 的 存

15、 在 使 它呈 不 均 勻 分 布 ， 并 聚 集 在 雙 水 相 體 系 中 具 有 較 低能 量 的 一 相 中 。 非 電 解 質(zhì) 型 溶 質(zhì) 的 分 配 系 數(shù) 與 相 間 表 面 自 由 能 差及 溶 質(zhì) 的 分 子 量 有 關(guān) lnKP=-E/kT -M/RT 溶 質(zhì) 的 分 配 系 數(shù) 的 對(duì) 數(shù) 與 其 分 子 量 呈 線 性 關(guān) 系 同 一 溶 質(zhì) 的 分 配 系 數(shù) 隨 雙 水 相 系 統(tǒng) 的 不 同 而 改 變 （ 四 ） 親 和 作 用 通 過(guò) 一 定 的 方 法 ， 將 配 基 連 接 在 雙 水 相 的 成相 物 質(zhì) 分 子 上 ， 就 構(gòu) 成 了 具 有 親 和

16、性 質(zhì) 的 雙水 相 體 系 ， 形 成 對(duì) 被 分 配 物 質(zhì) 的 親 和 作 用 ，調(diào) 節(jié) 待 提 取 物 在 兩 相 中 的 分 配 ， 從 而 提 高 其分 離 效 果 過(guò) 渡 金 屬 離 子 :Cu2 、 Ni2 、 Fe2 、 Zn2 、Co2 等 是 常 用 的 親 和 配 基 作 用 機(jī) 理 :配 位 鍵 力 、 -鍵 及 靜 電 作 用 力 四 、 影 響 物 質(zhì) 分 配 平 衡 的 因 素 除 了 靜 電 作 用 、 疏 水 作 用 及 界 面 張 力 等 各種 相 互 作 用 因 素 外 ， 影 響 物 質(zhì) 在 雙 水 相 系統(tǒng) 中 分 配 的 因 素 主 要 還 有 :

17、 雙 水 相 系 統(tǒng) 的 聚 合 物 組 成 (包 括 聚 合 物 類 型 、平 均 分 子 量 ) 鹽 類 (包 括 離 子 的 類 型 和 濃 度 、 離 子 強(qiáng) 度 、pH值 ) 溶 質(zhì) 的 物 理 化 學(xué) 性 質(zhì) (包 括 分 子 量 、 等 電 點(diǎn) ) 體 系 的 溫 度 等 。 （ 一 ） 雙 水 相 中 聚 合 物 組 成當(dāng) 兩 種 不 同 濃 度 的 聚 合 物 與 聚 合 物 或 者 聚 合 物 與 無(wú)機(jī) 鹽 以 不 同 的 濃 度 混 合 時(shí) ， 可 能 存 在 三 種 情 況 ： a、 完 全 混 溶 性 (勻 相 溶 液 )； b、 物 理 的 不 相 溶 性(相 分

18、離 )； c、 復(fù) 雜 的 凝 聚 (相 分 離 ， 聚 合 物 聚 集 在同 一 相 中 ， 純 溶 劑 -水 聚 集 在 另 一 相 中 ) 當(dāng) 這 兩 種 聚 合 物 是 離 子 化 合 物 并 帶 有 相 反 電 荷 時(shí) ，它 們 互 相 吸 引 并 發(fā) 生 復(fù) 雜 的 凝 聚 。 不 同 聚 合 物 的 水 相 系 統(tǒng) 顯 示 出 不 同 的 疏 水 性 水 溶 液 中 聚 合 物 的 疏 水 性 按 下 列 次 序 遞 增 ： 葡 萄 糖 硫 酸 鹽 甲 基 葡 萄 糖 葡 萄 糖 羥 丙 級(jí) 葡 萄糖 甲 基 纖 維 素 聚 乙 烯 醇 聚 乙 二 醇 聚 丙 三 醇 。 （ 二

19、 ） 成 相 聚 合 物 分 子 量 對(duì) 于 PEG/Dextran所 形 成 的 雙 水 相 體 系 中 ，若 降 低 PEG相 對(duì) 分 子 質(zhì) 量 ， 則 生 物 分 子 分配 于 富 含 PEG的 上 相 中 ， 使 分 配 系 數(shù) 增 大 ；而 降 低 Dextran相 對(duì) 分 子 質(zhì) 量 ， 則 分 配 系 數(shù)減 小 。 對(duì) 于 同 種 聚 合 物 而 言 ， 其 疏 水 性 隨 相 對(duì) 分子 質(zhì) 量 增 加 而 增 加 若 想 在 上 相 獲 得 較 高 的 蛋 白 質(zhì) 收 率 ， 對(duì) 于PEG聚 合 物 ， 應(yīng) (? )它 的 平 均 相 對(duì) 分 子 質(zhì)量 （ 三 ） 成 相 聚

20、 合 物 的 濃 度 聚 合 物 分 相 的 最 低 濃 度 為 臨 界 點(diǎn) ， 系 線 的長(zhǎng) 度 為 零 ,此 時(shí) 分 配 系 數(shù) 為 1， 即 組 分 均 勻 的分 配 于 上 下 相 . 隨 著 成 相 聚 合 物 的 總 濃 度 或 聚 合 物 /鹽 混 合物 的 總 濃 度 增 大 ， 系 線 的 長(zhǎng) 度 增 加 ， 系 統(tǒng)遠(yuǎn) 離 臨 界 點(diǎn) ， 成 相 聚 合 物 兩 相 性 質(zhì) 的 差 別也 增 大 ， 組 分 在 兩 相 中 的 分 配 系 數(shù) 改 變 。 成 相 物 質(zhì) 的 總 濃 度 越 高 ， 系 線 越 長(zhǎng) ， 生 物分 子 越 容 易 分 配 于 其 中 的 某 一

21、相 . 其 它 因 素 1.分 配 物 質(zhì) 的 分 子 量 2.鹽 的 種 類 和 濃 度 3.pH值 影 響 4.溫 度 的 影 響 5.通 氣 和 攪 拌 的 影 響 M 10-4 雙 水 相 萃 取 操 作 及 設(shè) 備 一 、 雙 水 相 系 統(tǒng) 的 選 擇 :易 于 兩 相 的 分 離 . 根 據(jù) 待 分 離 蛋 白 質(zhì) 和 共 存 雜 質(zhì) 的 表 面 疏 水性 、 分 子 量 、 等 電 點(diǎn) 和 表 面 電 荷 等 性 質(zhì) 上的 差 別 ， 來(lái) 選 擇 雙 水 相 系 統(tǒng) ， 并 確 定 成 相聚 合 物 的 分 子 量 及 濃 度 、 鹽 的 濃 度 、 pH值等 因 素 以 確

22、定 最 佳 的 萃 取 系 統(tǒng) 。 對(duì) 于 目 標(biāo) 蛋 白 與 雜 蛋 白 的 表 面 疏 水 性 相 差較 大 的 體 系 ， 可 利 用 鹽 析 等 作 用 原 理 ， 通過(guò) 提 高 成 相 系 統(tǒng) 的 濃 度 ， 增 大 雙 水 相 系 統(tǒng)的 疏 水 性 ， 達(dá) 到 目 標(biāo) 蛋 白 與 雜 蛋 白 的 分 離 。 對(duì) 于 目 標(biāo) 蛋 白 質(zhì) 與 雜 蛋 白 的 等 電 點(diǎn) 不 同 的體 系 ， 添 加 適 當(dāng) 的 鹽 ， 并 通 過(guò) 調(diào) 節(jié) 系 統(tǒng) 的pH值 使 相 間 電 位 差 變 大 ， 而 達(dá) 到 目 標(biāo) 產(chǎn) 物與 雜 蛋 白 的 分 離 。 PEG/Dx系 統(tǒng) 高 聚 物 /鹽

23、 體 系 新 的 雙 水 相 體 系 :表 面 活 性 劑 -表 面 活 性 劑 -水 體 系 、 雙 水 相 膠 束 體 系 等 體 系 二 、 雙 水 相 萃 取 工 藝 設(shè) 計(jì) 目 標(biāo) 物 應(yīng) 滿 足 以 下 條 件 ： 與 原 料 液 中 的 雜 質(zhì) 應(yīng) 分 配 在 不 同 的 相 中 在 雙 水 相 體 系 中 的 某 一 相 中 的 分 配 系 數(shù) 應(yīng)相 對(duì) 較 大 雙 水 相 系 統(tǒng) 的 上 下 相 應(yīng) 易 于 分 離 。 工 藝 流 程 目 的 產(chǎn) 物 的 萃 取 PEG的 循 環(huán) 無(wú) 機(jī) 鹽 的 循 環(huán) 。 （ 一 ） 目 的 產(chǎn) 物 的 萃 取 1.如 果 目 標(biāo) 產(chǎn) 物

24、在 上 相 中 的 分 配 系 數(shù) 足 夠 大 ， 則細(xì) 胞 勻 漿 液 中 的 目 標(biāo) 產(chǎn) 物 可 采 用 一 步 或 兩 步 雙 水相 萃 取 工 藝 獲 得 較 高 的 純 化 倍 數(shù) 。 一 步 雙 水 相 萃 取 是 把 生 物 材 料 懸 浮 液 和 雙 水 相 系統(tǒng) 混 合 后 ， 分 離 上 下 相 ， 其 中 下 相 含 有 大 多 數(shù) 雜質(zhì) ， 而 上 相 再 通 過(guò) 超 濾 操 作 進(jìn) 行 進(jìn) 一 步 的 提 純 目標(biāo) 產(chǎn) 物 ， 同 時(shí) 高 聚 物 一 相 可 以 得 到 回 收 。 在 兩 步 萃 取 操 作 中 ， 把 一 步 萃 取 體 系 中 的 上 相 分離

25、出 來(lái) 后 ， 再 加 入 鹽 使 其 形 成 新 的 雙 水 相 體 系 ，則 富 含 PEG的 上 相 得 到 回 收 ， 同 時(shí) ， 含 有 目 標(biāo) 產(chǎn)物 的 鹽 相 通 過(guò) 超 濾 等 操 作 得 到 分 離 目 標(biāo) ， 而 且 可以 通 過(guò) 濃 縮 可 以 進(jìn) 行 回 收 再 利 用 。 PEG/鹽 雙 水 相 體 系 一 步 或 兩 步 萃 取 流 程 示 意 圖 2.細(xì) 胞 內(nèi) 蛋 白 質(zhì) 的 萃 取 雙 水 相 萃 取 法 可 選 擇 性 地 使 細(xì) 胞 碎 片 分 配于 雙 水 相 系 統(tǒng) 的 下 相 ， 而 目 標(biāo) 產(chǎn) 物 分 配 于上 相 ， 同 時(shí) 實(shí) 現(xiàn) 目 標(biāo) 產(chǎn)

26、物 的 部 分 純 化 和 細(xì)胞 碎 片 的 除 去 ， 從 而 節(jié) 省 利 用 離 心 法 或 膜分 離 法 除 碎 片 的 操 作 過(guò) 程 。 如 果 細(xì) 胞 勻 漿 液 中 的 目 標(biāo) 產(chǎn) 物 的 分 配 系 數(shù)較 小 ， 則 可 采 用 多 步 雙 水 相 萃 取 工 藝 以 獲得 較 高 的 純 化 倍 數(shù) 。 三 步 雙 水 相 萃 取 酶 的 流 程 示 意 圖 （ 二 ） PEG循 環(huán) 在 大 規(guī) 模 雙 水 相 萃 取 過(guò) 程 中 ， 成 相 材 料 的回 收 和 循 環(huán) 使 用 ， 不 僅 可 以 減 少 廢 水 處 理的 費(fèi) 用 ， 還 可 以 節(jié) 約 化 學(xué) 試 劑 ，

27、 降 低 成 本 。 PEG的 回 收 有 兩 種 方 法 ： 加 入 鹽 使 目 標(biāo) 產(chǎn) 物 轉(zhuǎn) 入 富 鹽 相 來(lái) 回 收PEG； 將 PEG相 通 過(guò) 離 子 交 換 樹 脂 ， 用 洗 脫 劑先 洗 去 PEG， 再 洗 出 蛋 白 質(zhì) 。 （ 三 ） 無(wú) 機(jī) 鹽 的 循 環(huán) 一 種 方 法 使 將 含 磷 酸 鈉 的 鹽 相 冷 卻 到 6 ，使 鹽 結(jié) 晶 析 出 ， 然 后 用 離 心 機(jī) 分 離 收 集 ； 另 一 種 方 法 是 用 電 滲 析 法 、 膜 分 離 法 回 收鹽 類 或 除 去 PEG相 的 鹽 。 三 、 大 規(guī) 模 雙 水 相 萃 取 及 其 簡(jiǎn) 單 設(shè)

28、備 兩 步 萃 取 法 連 續(xù) 分 離 胞 內(nèi) 酶 的 流程 示 意 圖 第 四 節(jié) 雙 水 相 萃 取 技 術(shù) 在 生 物 、 食品 工 業(yè) 中 的 應(yīng) 用 （ 1） 提 取 酶 和 蛋 白 質(zhì) 。 （ 2） 進(jìn) 行 萃 取 性 生 物 轉(zhuǎn) 化 (3)酸 水 解 產(chǎn) 物 中 提 取 二 肽 、 氨 基 酸 、 核 苷酸 等 風(fēng) 味 物 質(zhì) （ 4） 萃 取 細(xì) 胞 、 細(xì) 胞 器 、 膜 等 粒 子 （ 5） 應(yīng) 用 于 液 液 分 配 層 析 第 五 節(jié) 雙 水 相 萃 取 分 離 技 術(shù) 的 發(fā) 展 方 向 一 、 開 發(fā) 廉 價(jià) 的 新 型 雙 水 相 體 系 二 、 雙 水 相 分 配 與 相 關(guān) 技 術(shù) 的 集 成 化 實(shí) 驗(yàn) （ 設(shè) 計(jì) 型 ） 設(shè) 計(jì) 一 個(gè) PEG/磷 酸 鹽 的 雙 水 相 體 系 ， 并 從番 木 瓜 中 初 步 萃 取 木 瓜 蛋 白 酶 。 思 考 題 名 詞 解 釋 ： 聚 合 物 的 不 相 容 性 ； 相 圖 。 雙 水 相 體 系 的 是 怎 樣 形 成 的 ？ 其 組 成 是 什么 ？ 影 響 雙 水 相 萃 取 的 因 素 有 哪 些 ？ 雙 水 相 萃 取 技 術(shù) 有 什 么 優(yōu) 越 性 ？