乙肝血清標(biāo)志物檢測課件

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1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,,,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,,,*,乙肝血清學(xué)標(biāo)志物檢測及意義,,山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)科,郭先鋒,乙肝血清學(xué)標(biāo)志物檢測及意義 山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)科,要點(diǎn),簡介,抗原組成,傳染源,傳播途徑,病原學(xué)診斷,血清學(xué)模式及臨床意義,,End,要點(diǎn)簡介End,,前 言,病毒性肝炎在我國各類傳染病中發(fā)病率最高,乙型病毒性肝炎在我國危害極大,我國乙型肝炎患者近,3,千萬,病毒性肝炎，一般特指由嗜肝病毒感染所引起的肝炎。,HBV-,屬嗜肝,DNA,病

2、毒,,,前 言病毒性肝炎在我國各類傳染病中發(fā)病率最高,,,,A,病毒性肝炎,Hepatitis Virus,腸道傳播,腸道外傳播,F, TTV,?,其它,,E,NANB,,B,,D,,C,病毒性肝炎,-,背景,A病毒性肝炎腸道傳播腸道外傳播F, TTVENANBBDC,,,,,,傳染源,糞便,血液,/,血源性物質(zhì)/,體液,血液,/,血,源,性物質(zhì)/,體液,血液,/,血,源,性物質(zhì)/,體液,糞便,傳播途徑,糞,-,口,經(jīng)皮膚/,經(jīng)粘膜,經(jīng)皮膚/,經(jīng)粘膜,經(jīng)皮膚/,經(jīng)粘膜,糞,-,口,慢性感染,否,是,是,是,否,,病毒性肝炎類型,A,B,C,D,E,,,基因組類型,ssRNA,dsDNA

3、,,,ssRNA,,ssRNA,,ssRNA,傳染源糞便血液/血源性物質(zhì)/體液血液/血源性物質(zhì)/體液血,Hepatitis B Virus,乙型肝炎的病原體,乙型病毒性肝炎,[1],是由乙肝病毒（,HBV,）引起的、以肝臟炎性病變?yōu)橹鞑⒖梢鸲嗥鞴贀p害的一種傳染病。本病廣泛流行于世界各國，主要侵犯兒童及青壯年，少數(shù)患者可轉(zhuǎn)化為,肝硬化,或,肝癌,。因此，它已成為嚴(yán)重威脅人類健康的世界性疾病，也是我國當(dāng)前流行最為廣泛、危害性最嚴(yán)重的一種傳染病。,Hepatitis B Virus乙型肝炎的病原體,乙型病毒性肝炎無一定的流行期，一年四季均可發(fā) 病，但多屬散發(fā)。近年來乙肝發(fā)病率呈明顯增高趨勢估計(jì)全球

4、半數(shù)以上人口已被,HBV,感染過，5%的人口為,HBV,慢性感染,.,中國：乙肝高發(fā)區(qū)，人群,HBsAg,的檢出率達(dá)9.8%,乙型病毒性肝炎無一定的流行期，一年四季均可發(fā) 病，但多屬散,電鏡下,Hepatitis B Virus,,電鏡下Hepatitis B Virus,乙型肝炎病毒,HBV,乙型肝炎病毒（,HBV,）為專一的嗜肝,病毒,，近年由于,核酸,分子雜交技術(shù)的進(jìn)展，在肝外器官,細(xì)胞,也能檢出,HBV-DNA,。通過北京乙肝肝病毒試驗(yàn)研究提供了在肝外細(xì)胞復(fù)制的證據(jù)。人,HBV,也可能在肝外細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，有待深入研究。,HBV,感染者血清經(jīng)電鏡檢查有,3,種病毒顆粒,.,1.,大球形顆粒

5、，完整的,HBV,顆粒直徑為,42nm,，又名,Dane,顆粒，分為包膜與核心的兩部分，外衣殼及包膜含有表面抗原，衣殼內(nèi)為核心結(jié)構(gòu)，有核心抗原，核心抗原下面藏有,e,抗原。,,乙型肝炎病毒HBV乙型肝炎病毒（HBV）為專一的嗜肝病毒，近,乙型肝炎病毒,HBV,２,.,小球形顆粒，陽性血清中最多的顆粒，主要為表面抗原，不含核酸及ＤＮＡ成分，為不完整的ＨＢＶ．,３,.,管形顆粒，實(shí)際上是一串小球形顆粒聚合在一起的，也含有表面抗原．,,乙型肝炎病毒HBV２.小球形顆粒，陽性血清中最多的顆粒，主要,1. HBV,形態(tài)結(jié)構(gòu),大球形顆粒（,Dane,顆粒）,小球形顆粒,管形顆粒,1. HBV形態(tài)結(jié)構(gòu)大球形

6、顆粒（Dane顆粒）小球形顆粒管形,HBV virion,The infectious virion is called the DANE particle.,HBV virionThe infectious virio,Dane,顆粒（完整的病毒）形態(tài),HBsAg,HBcAg,HBV DNA,DNAP,（外膜蛋白）,（核衣殼蛋白,）,Dane顆粒（完整的病毒）形態(tài)HBsAgHBcAgHBV D,Both comprised of HBsAg,Both comprised of HBsAg,HBV nomenclature,HBV:,h,epatitis,B,,v,irus,HBsAg:,

7、h,epatitis,B,virus,s,urface,a,nti,g,en,HBsAb:,h,epatitis,B,virus,s,urface,a,nti,b,ody,HBcAg:,h,epatitis,B,virus,c,ore,a,nti,g,en,HBcAb:,h,epatitis,B,virus,c,ore,a,nti,b,ody,HBeAg:,h,epatitis,B,virus,e,,a,nti,g,en,HBeAb:,h,epatitis,B,virus,e,,a,nti,b,ody,HBV nomenclatureHBV: hepati,抗原組成,(一)--,HBsA

8、g,位于病毒表面，是一種糖蛋白,(,曾用名：澳抗,),出現(xiàn)時間：,HBV,感染后,2,～,6,個月（潛伏期）,HBsAg,有,10,個亞型，各亞型間存在不完全的交叉免疫。近年用亞型單克隆抗體研究表明，,d,和,y,、,w,和,r,決定簇可以同時存在于同一病毒抗原顆粒上，形成,adwr,、,aywr,、,adyw,和,adyr,復(fù)合亞型。,抗原組成(一)--HBsAg位于病毒表面，是一種糖蛋白(曾用,其機(jī)制為①不同亞型病毒的雙重感染；②單一亞型病毒感染后，有的,HBV-DNA,發(fā)生點(diǎn)突變。臨床表現(xiàn)病情反復(fù)，肝臟損害較重，因而有的,HBV,感染者血清中同時,HBsAg,陽性、抗,-HBs,陽性。,

9、4種亞型(,adr,adw,ayr,ayw,)。刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體即抗-,HBs.,其機(jī)制為①不同亞型病毒的雙重感染；②單一亞型病毒感染后，有的,,,,HBsAg,血清中,HBsAg,陽性是,HBV,感染的標(biāo)志。本身具有抗原性，無傳染性。但由于,HBsAg,常與,HBV,同時存在，故認(rèn)為是傳染性標(biāo)志之一。但須注意，,HBV-DNA,可自,X,基因區(qū)終點(diǎn)起逆向與肝細(xì)胞發(fā)生整合，整合后的,S,基因表達(dá)較強(qiáng)，不斷產(chǎn)生,HBsAg,，整合的,HBcAg,基因組被抑制，不表達(dá),HBeAg,、,HBcAg,，在這種情況下，即使,HBV,已從體內(nèi)清除，而,HBsAg,仍可持續(xù)陽性，從理論上講，這種,HB

10、sAg,陽性血液并無傳染性。,,急性,HBV,感染后，血清中首先出現(xiàn),HBsAg,，整個急性期均可陽性，至恢復(fù)期可滴度下降或轉(zhuǎn)陰。如,HBsAg,持續(xù)陽性半年以上，稱為慢性,HBsAg,攜帶者（無癥狀,HBsAg,攜帶者），可持續(xù)陽性達(dá)數(shù)年。一般認(rèn)為,HBsAg,滴度與病變程度不成比例。肝功能正常，,HBsAg,滴度高，肝臟可重要病變，若,HBsAg,陰性及,DNAp,陰性，表示無重要傳染性。反之，肝功能異常，,HBsAg,滴度不高，肝臟可有明顯病變，如有部分肝硬化、肝癌患者呈,HBsAg,陰性或低滴度。無癥狀,HBsAg,攜帶者或慢性活動性乙型肝炎均可有相同的,HBsAg,滴度變化不能代表病

11、情的輕重，因此分解此不能將,HBsAg,滴度的變化作為判斷病情輕重和藥物治療效的指標(biāo)。,急性HBV感染后，血清中首先出現(xiàn)HBsAg，整個急性期均可陽,用免疫電鏡及免疫熒光法在肝細(xì)胞漿內(nèi)證實(shí)有,HBsAg,,而血清中,HBsAg,陰性，其機(jī)制尚無確切解釋。已知原因之一是現(xiàn)用的,RIA,檢測法，其測試靈敏度為,10-5,,尚不能測出最低感染量,(10-7),，因此有,10%,假陰性，故對,HBsAg,的判斷，以陽性有診斷意義，陰性不能排除,HBV,感染。近年發(fā)現(xiàn)血清中,HBV,標(biāo)志均陰性，而在白細(xì)胞或肝細(xì)胞內(nèi)檢出,HBV-DNA,，說明確定或除外,HBV,感染不能單憑,HBsAg,是否陽性，應(yīng)與其

12、他標(biāo)志結(jié)合判斷。,用免疫電鏡及免疫熒光法在肝細(xì)胞漿內(nèi)證實(shí)有HBsAg,而血清中,HBsAg,持續(xù)時間,,●,急性自限性肝炎：血中,HbsAg,大多可持續(xù),1-6,周，最長可達(dá),6,個月內(nèi)可消失,,●,慢性肝炎或慢性,HBsAg,攜帶者：可持續(xù)陽性。,,HBsAg持續(xù)時間,抗原組成,(二,)--,HBcAg,HBcAg,為,HBC,復(fù)制指標(biāo),.,位于,Dane,顆粒核心部分和肝細(xì)胞核內(nèi)，在血清中不易檢出游離的,HBcAg,主要成分是蛋白質(zhì),刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-,HBc,(,非保護(hù)性抗體,),存在于受感染的肝細(xì)胞核內(nèi)，有很強(qiáng)的免疫原性，在乙肝急性期、恢復(fù)期和,HBsAg,攜帶者中?？蓹z出抗,-,HBc

13、,。除非,HBV C,基因序列出現(xiàn)極少數(shù)變異或感染者有免疫缺陷。,抗-,HBc IgM,陽性提示急性期或慢性感染急性發(fā)作，抗,HBc IgG,出現(xiàn)較遲，但可保持多年或者終生。,抗原組成(二)-- HBcAgHBcAg 為HBC復(fù)制指標(biāo).,（,抗,-HBs,●出現(xiàn)時間：急性感染后期或,HBsAg,轉(zhuǎn)陰后（數(shù)月才能檢測出）,.6-12,月內(nèi)逐步上升至高峰，可持續(xù)多年，但滴度會逐漸下降。,●抗,-HBs,為保護(hù)性抗體（中和抗體）其出現(xiàn)標(biāo)志著,HBV,感染進(jìn)入恢復(fù)期,●,-HBs,對相同,HBsAg,亞型的,HBV,再感染有免疫力，但對不同亞型的,HBV,保護(hù)力不完全。,（抗-HBs●出現(xiàn)時間：急性

14、感染后期或HBsAg 轉(zhuǎn)陰后（數(shù),抗原組成,(三,)--,HBeAg,位于,HBV,的核心,是一種可溶性蛋白抗原,HBeAg,和,Dane,顆粒出現(xiàn)相平行，且與,DNA,多聚酶在血中的消長動態(tài)相符合,血中,HBeAg,的出現(xiàn)可作為,HBV,復(fù)制及血清有感染性的指標(biāo),.,急性,HBV,感染時,HBeAg,的出現(xiàn)時間略晚于,HBsAg,，在病變極期后消失，如果,HbeAg,持續(xù)存在預(yù)示趨向慢性。大部分情況持續(xù)存在表示患者處于高感染低應(yīng)答期。,刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-,HBe,。轉(zhuǎn)換過程意味著由免疫耐受轉(zhuǎn)換為免疫激活，此時常有病變活動的激化。,抗-,HBe,能與受染肝細(xì)胞表面的,e,抗原結(jié)合,通過補(bǔ)體介導(dǎo)破

15、壞受染的肝細(xì)胞,抗-,HBe,的出現(xiàn)是預(yù)后良好的征象。抗,HBe,陽轉(zhuǎn)后，病毒復(fù)制處于靜止?fàn)顟B(tài)，傳染性降低。部分病人仍有病毒復(fù)制，肝炎活動，稱為,HBeAg,陰性慢性肝炎。,抗原組成(三)-- HBeAg位于HBV的核心,是一種可溶性,HBV DNA,是病毒復(fù)制和有傳染性最直接的證據(jù),檢測方法：斑點(diǎn)雜交法、,PCR,法,近年用多聚酶鏈反應(yīng)（,PCR,）這一體外,DNA,擴(kuò)增技術(shù)，使靈敏度提高,100,倍以上（,10FGfg/ml,），可測出極微量的病毒。,HBV-DNA-p,是,HBV,核心所具有的,DNA-p,，在病毒復(fù)制過程中起逆轉(zhuǎn)酶作用。,DNA-p,活性是表示,HBV,復(fù)缺點(diǎn)活力的重要

16、指標(biāo)。,HBV-DNA,及,DNA-p,檢測有助于判斷,HBV,感染者病毒復(fù)制程度及,傳染,性大小，較靈敏評價抗病毒藥物的療效。,乙 肝,HBV DNA是病毒復(fù)制和有傳染性最直接的證據(jù)檢測方法：斑點(diǎn),抗原組成,(四,)-- Pre-S,抗原,位于,HBV,的外衣殼上，有兩種,刺激機(jī)體產(chǎn)生抗,Pre-S,1,和抗,Pre-S,2,，,能阻斷,HBV,與肝細(xì)胞受體結(jié)合，從而起到抵抗病毒,的作用,抗,Pre-S,1,和抗,Pre-S,2,的出現(xiàn)，表示病情好轉(zhuǎn)，趨向痊愈,抗原組成(四)-- Pre-S抗原位于HBV的外衣殼上，有兩,傳染源,患者,潛伏期,急性期,慢性期,,無癥狀,HBsAg,攜帶者,

17、傳染源患者,,,,,,,,,高,中等,低/不能檢出,血液,精液,尿,血清,陰道分泌物,糞便,傷口滲出物,唾液,汗液,淚液,乳汁,各種體液中,HBV,的濃度,高中等低/不能檢出血液精液尿血清陰道分泌物糞便傷口滲出物唾,,,,,,,血源性傳播,輸血、注射、外科和牙科手術(shù)、針刺等,剃刀、牙刷和蚊蟲叮咬等,,母嬰垂直傳播,宮內(nèi)傳播,分娩時微小皮損處傳播,產(chǎn)后母嬰密切接觸,性傳播,,,HBV,傳播途徑,血源性傳播HBV 傳播途徑,乙肝血清標(biāo)志物檢測課件,病原學(xué)診斷,(一),--抗原抗體檢測,,項(xiàng)目：,HBsAg、,抗-,HBs、HBeAg、,抗-,HBe、,抗-,HBc,以及抗-,HBc IgM,方法,

18、ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay，,最常用，定性),發(fā)光免疫分析(定量,),反相間接血凝試驗(yàn)(少用,),病原學(xué)診斷(一)--抗原抗體檢測,ELISA,的基本原理,利用抗原和抗體特異性結(jié)合,主要的試劑,固相抗原或抗體,酶標(biāo)記的抗原或抗體,酶的底物,,ELISA的基本原理利用抗原和抗體特異性結(jié)合,ELISA,的主要方法,間接法: 測定抗-,HBs,夾心法：測定,HBsAg,和,HBeAg,競爭法：測定抗-,HBc,中和法：測定抗-,HBe,捕捉法：測定抗-,HBc IgM,ELISA的主要方法間接法: 測定抗-HBs,病原學(xué)診斷,(二),—,核酸檢

19、測,核酸雜交,探針,,PCR,引物,病原學(xué)診斷(二)—核酸檢測核酸雜交,各項(xiàng),HBV,血清標(biāo)志物的解釋,HBsAg,–,HBV,感染的標(biāo)志,,,可能是急性或慢性,Anti-HBs,–,既往感染自然免疫/接種疫苗產(chǎn)生,Anti-HBc IgM,–,急性,HBV,感染標(biāo)志,Anti-HBc IgG,–,既往或慢性,HBV,感染,HBeAg,–,病毒復(fù)制活躍，具有高度傳染性,,Anti-HBe,–,慢性感染,,,病毒不再復(fù)制,,,低傳染性,HBV-DNA,–,直接測定病毒復(fù)制狀態(tài)，比,HBeAg,更準(zhǔn)確；臨床主要用于監(jiān)測治療反應(yīng),,各項(xiàng)HBV血清標(biāo)志物的解釋HBsAg –HBV感染的標(biāo)志,可,為什么

20、要開展乙肝,“,兩對半,”,定量檢測,乙型病毒性肝炎是世界性的傳染病，嚴(yán)重地威脅著人類的健康。我國是乙型病毒性肝炎高發(fā)病國家。據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界無癥狀攜帶者（,HBsAg,攜帶者）超過,2.8,億，我國占,1,億以上，且多數(shù)無癥狀。所以乙肝的早期診斷對控制傳染源、降低發(fā)病率及疾病的治療均具有很重要的意義。酶標(biāo)（,ELISA,）檢測始于,20,世紀(jì),80,年代中期，它對乙肝“兩對半”定性測定在疾病的診斷，病情監(jiān)測，療效觀察起到了一定的作用，但酶標(biāo)檢測,HbsAg,靈敏度較低，不能真正意義上定量測定血清中,HbsAg,含量。隨著臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，定性檢測已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床及患者的要求?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析定

21、量測定乙肝“兩對半”大大彌補(bǔ)了酶標(biāo)定性測定及靈敏度低的不足。,,為什么要開展乙肝“兩對半”定量檢測 乙型病毒性肝,血清學(xué)檢測的臨床意義,HBsAg,抗-,HBs HBeAg,抗-,HBe,抗-,HBc,臨床意義,,,,,急性或慢性感染(大三陽),+,-,+,-,+,+,+,+,乙肝后期或慢性感染(小三陽),-,-,+,+,-,-,-,潛伏期或急性乙肝早期,-,-,+,+,+,痊愈或恢復(fù)期,有免疫力,-,-,-,-,-,+,+,+,-,-,痊愈,有免疫力,疫苗接種或曾經(jīng)感染過,有免疫力,血清學(xué)檢測的臨床意義HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-,血清學(xué)檢測的臨床意義,HBsAg,抗

22、-,HBs HBeAg,抗-,HBe,抗-,HBc,臨床意義,,血清學(xué)檢測的臨床意義,血清學(xué)檢測的臨床意義,,,,,,急性或慢性感染(傳染性弱,),+,-,-,-,+,-,+,+,急性,乙肝恢復(fù)期或既往感染,-,-,-,-,-,-,+,急性窗口期或既往感染康復(fù)期,-,-,-,-,-,未感染過,HBV,+,+,-,-,+,+,+,-,-,+,急性感染趨向恢復(fù),;,慢性攜帶者,HBV,感染已恢復(fù),,,有免疫力,血清學(xué)檢測的臨床意義 HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

23、,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Symptoms,HBeAg,anti-HBe,Total anti-HBc,IgM anti-HBc,anti-HBs,HBsAg,0,4,8,12,16,20,24,28,32,36,52,100,Acute HBV Infection with Recovery,Typical Serologic Course,Weeks after Exposure,Titre,SymptomsHBeAganti-HBeTotal ant,,,IgM anti-HBc,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

24、,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Total anti-HBc,HBsAg,Acute,(6 months),HBeAg,Chronic,(Years),anti-HBe,0,4,8,12,16,20,24,28,32,36,52,Years,Weeks after Exposure,Titre,Progression to Chronic HBV Infection,Typical Serologic Course,小結(jié),IgM anti-HBcTotal anti-HBcHBsA,乙肝五項(xiàng)檢測的影響因素,1.,樣本采集與處理的影響,1.1,標(biāo)本嚴(yán)溶血及混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或

25、附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣的活性，催化底物顯色造成假陽性，嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。,1.2,塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。最好使用一次性玻璃試管或真空管采血管；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會增加,OD,值，可能與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷能吸附酶標(biāo)記物不易洗脫有關(guān)；,EDTA,、酶抑制劑（如,NaN3,）可抑制,ELISA,系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。,1.3,標(biāo)本凝固不全 ，正常血液采集后,1/2~2h,開始凝固，,18~24h,血塊完全收縮。在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血

26、清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在,ELISA,測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?乙肝五項(xiàng)檢測的影響因素1. 樣本采集與處理的影響1.1標(biāo),乙肝五項(xiàng)檢測的影響因素,2,、試劑的影響,2.1,乙肝兩對半試劑廠家較多；不同廠家出產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別，有資料顯示，不同廠家試劑的特異性和敏感性分別為,89.4%—99.3%,78~89%,存在較大差異。有的廠家酶標(biāo)板孔間,A,值差大于,15%,；標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定比較差。使用質(zhì)劣的試劑必然導(dǎo)

27、致結(jié)果的假陽性或假陰性。因此。選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵之一。,2.2,不同方法學(xué)的檢測試劑，會使兩對半結(jié)果出現(xiàn)一些不同。例如：在實(shí)際工作中常用,ELISA,檢測,HBsAg,結(jié)果為陰性，而電化學(xué)發(fā)光檢測為陽性。除方法學(xué)的靈敏度外；還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的差別。單抗對變異抗原或亞型乙肝標(biāo)志物檢測存在差異，建議試劑廠家對劑的制備應(yīng)該考慮亞型及型濃度的問題。,,乙肝五項(xiàng)檢測的影響因素2、試劑的影響2.1乙肝兩對半試劑,乙肝五項(xiàng)檢測的影響因素,3,、干擾物質(zhì)的影響有人認(rèn)為大約,40%,的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果；常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子

28、、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠,Ig,抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。如,RF,因子可與標(biāo)記二抗的,FC,段法結(jié)合造成假陽性，補(bǔ)體從,C1q,活化，使一抗和酶標(biāo)二抗的抗體分子發(fā)生變構(gòu)，,Fc,的,C1q,分子結(jié)合點(diǎn)暴露出來，則補(bǔ)體,C1q,可將二者連接起來造成假陽性，采用,56℃30,分鐘滅活補(bǔ)體可降低假陽性率，高濃度的,AFP,（如孕婦），在儲存過程中可能形成二聚體會導(dǎo)致本底過深影響檢測結(jié)果。,乙肝五項(xiàng)檢測的影響因素3、干擾物質(zhì)的影響有人認(rèn)為大約40,乙肝五項(xiàng)檢測的影響因素,4,、藥物的影響,,4.1,高效價的乙肝免疫球蛋白會與,HBsAg,形成復(fù)合物，影響,HB

29、sAg,的檢出，所以一些,HBsAg,陽性患者注射乙肝免疫球蛋白后，,HBsAg,檢測會呈陰性反應(yīng)，導(dǎo)致乙肝兩對半少見模式的出現(xiàn)，如我們常遇到乙肝大三陽的孕婦，為阻斷乙肝母嬰垂直傳播時，在孕第,8,、,9,、,10,月常規(guī)注射乙肝免疫球蛋白，不僅影響孕婦,HBsAg,的檢出；而且其所生產(chǎn)的生新兒也常出現(xiàn),HBsAg,陰性，,HBeAg,陽性和,HBcAb,陽性等少見模式、可能是乙肝免疫球蛋白屬,IgG,抗體能通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)與胎兒血液中的,HBsAg,結(jié)合形成復(fù)合物；則新生兒,HBsAg,檢測呈陰性；用,0.5ML,的鹽酸處理標(biāo)本,1,小時可提高出率。,4.2,為預(yù)防乙肝，部分,HBsAg

30、,陰性人群在接種乙肝疫苗后的,1—2,周內(nèi)，血清中可檢出,HBsAg,成份，形成一過性,HBsAg,陽性，這可能是乙肝疫苗主要成分是,HBsAg.,，有方法能夠把它檢出；如電化學(xué)發(fā)光法，建議接種乙肝疫苗后,1,個月內(nèi)不應(yīng)作,HBsAg,檢測。,,乙肝五項(xiàng)檢測的影響因素4、藥物的影響4.1 高效價的乙肝,乙肝,DNA,檢測的臨床意義,HBV-DNA,稱為乙肝病毒脫氧核糖核酸。乙肝病毒是一種部分雙鏈,DNA,病毒，也就是說它的遺傳物質(zhì)是,DNA,，它載有病毒所有遺傳信息，乙肝病毒靠它才可以復(fù)制、增殖、繁衍后代。研究證明，乙肝病毒的裸,DNA(,沒有蛋白質(zhì)包裹,DNA),就有感染性，完成對宿主的

31、侵襲，造成宿主體內(nèi)出現(xiàn)完整的乙肝病毒顆粒。也就是說,HBV-DNA,相當(dāng)于完整的乙肝病毒顆粒。因此，檢測,HBV-DNA,是判斷乙肝病毒有無復(fù)制的“金指標(biāo)”。,DNA,的檢測的目的主要是判斷目前患者病毒復(fù)制程度的大小，也是傳染性大小，尤其在判斷乙肝的轉(zhuǎn)歸，以及用藥前后的療效的判斷有很重要的作用，也是重要的用藥指征之一，尤其是抗病毒治療。現(xiàn)在這種基因的檢測技術(shù)已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于臨床。,乙肝DNA檢測的臨床意義HBV-DNA稱為乙肝病毒脫氧核糖核,,應(yīng)采取以疫苗接種和切斷傳播途徑為重點(diǎn)的綜合性措施。,一,.,乙肝疫苗和,乙肝免疫球蛋白,（,HBIG,）的應(yīng)用在目前,HBsAg,攜帶者廣泛存在，傳染源

32、管理十分困難的情況下，控制和預(yù)防乙型肝炎，關(guān)鍵性措施是用乙肝疫苗預(yù)防。我國已將乙肝疫苗接種納入計(jì)劃免疫，此外下列人群亦為乙肝疫苗接種的適應(yīng)癥：①,HBsAg,陽性，特別是,HBeAg,同時陽性母親所生的新生兒；②乙肝高發(fā)區(qū),3,歲以下幼兒；③醫(yī)務(wù)人員，接觸血液的人員；④多次接受輸血及血制品的患者；⑤,HBsAg,陽性者家庭成員，尤其是配偶，凡是患有急性或慢性疾病或?qū)Ω栺R林和抑菌劑硫柳汞過敏者禁用。,預(yù) 防,預(yù) 防,,HBsAg,陽性孕婦的新生兒用,30,μ,g,免疫,3,針；,HBsAg,陰性孕婦的新生兒第,1,針為,30,μ,g,，第,2,、,3,針各為,,10,μ,g,；,高危人群，

33、如腎透析患者和其他職業(yè)性與乙肝密切接觸者,用,20,μ,g,免疫,3,針；,其他一般易感人群（包括兒童、成人）,10,μ,g,免疫,3,針。以,上均按,0,、,1,、,6,月免疫程序，但新生兒第,1,針應(yīng)在出生后,24,小時內(nèi)接種，免疫效果更好。也有用,0,、,1,、,2,月免疫程序者,。目前多主張對高危人群（尤其,HBsAg,陽性，同時,HBcAg,陽性孕婦的新生兒；,接種乙肝疫苗因人而異我國應(yīng)用的免疫劑量和程序,接種乙肝疫苗因人而異我國應(yīng)用的免疫劑量和程序,,意外受,HBV,感染，如被,HBsAg,陽性血液污染的針頭刺傷 或被,HBsAg,陽性血液濺入眼結(jié)膜或口腔粘膜或輸入,HBsAg,陽性血液、手術(shù)刀損傷皮膚等），一般應(yīng)立即（,24,小時之內(nèi)）肌肉注射乙肝免疫球蛋白。如,HBIG,每毫升含抗,-HBs200IU,以上者可注射,0.5,～,0.7ml/kg,。,意外受HBV感染，如被HBsAg陽性血液污染的針頭刺傷,THE END,THE END,歡迎指正,歡迎指正,