第一章 氨基酸和蛋白質(zhì) 一、組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸的分類 1、非極性 ...
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1、第一章氨基酸和蛋白質(zhì) 一、組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸的分類 ?。薄⒎菢O性氨基酸 包括:甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸 ?。?、極性氨基酸 極性中性氨基酸:色氨酸、酪氨酸、絲氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、蘇氨酸 酸性氨基酸:天冬氨酸、谷氨酸 堿性氨基酸:賴氨酸、精氨酸、組氨酸 其中:屬于芳香族氨基酸的是:色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸 屬于亞氨基酸的是:脯氨酸 含硫氨基酸包括:半胱氨酸、蛋氨酸 注意:在識(shí)記時(shí)可以只記第一個(gè)字,如堿性氨基酸包括:賴精組
2、 二、氨基酸的理化性質(zhì) 1、兩性解離及等電點(diǎn) 氨基酸分子中有游離的氨基和游離的羧基,能與酸或堿類物質(zhì)結(jié)合成鹽,故它是一種兩性電解質(zhì)。在某一PH的溶液中,氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等,成為兼性離子,呈電中性,此時(shí)溶液的PH稱為該氨基酸的等電點(diǎn)。 ?。?、氨基酸的紫外吸收性質(zhì) 芳香族氨基酸在280nm波長附近有最大的紫外吸收峰,由于大多數(shù)蛋白質(zhì)含有這些氨基酸殘基,氨基酸殘基數(shù)與蛋白質(zhì)含量成正比,故通過對(duì)280nm波長的紫外吸光度的測量可對(duì)蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行定量分析。 ?。?、茚三酮反應(yīng) 氨基酸的氨基與茚三酮水合物反應(yīng)可生成藍(lán)紫色化合物,此化合物最
3、大吸收峰在570nm波長處。由于此吸收峰值的大小與氨基酸釋放出的氨量成正比,因此可作為氨基酸定量分析方法。 三、肽 兩分子氨基酸可借一分子所含的氨基與另一分子所帶的羧基脫去1分子水縮合成最簡單的二肽。二肽中游離的氨基和羧基繼續(xù)借脫水作用縮合連成多肽。10個(gè)以內(nèi)氨基酸連接而成多肽稱為寡肽;39個(gè)氨基酸殘基組成的促腎上腺皮質(zhì)激素稱為多肽;51個(gè)氨基酸殘基組成的胰島素歸為蛋白質(zhì)。 多肽連中的自由氨基末端稱為N端,自由羧基末端稱為C端,命名從N端指向C端。 人體內(nèi)存在許多具有生物活性的肽,重要的有: 谷胱甘肽(GSH):是由谷、半胱和甘氨酸組成的三肽。半胱氨
4、酸的巰基是該化合物的主要功能基團(tuán)。GSH的巰基具有還原性,可作為體內(nèi)重要的還原劑保護(hù)體內(nèi)蛋白質(zhì)或酶分子中巰基免被氧化,使蛋白質(zhì)或酶處于活性狀態(tài)。 四、蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu) ?。?、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu):即蛋白質(zhì)分子中氨基酸的排列順序。 主要化學(xué)鍵:肽鍵,有些蛋白質(zhì)還包含二硫鍵。 ?。?、蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu):包括二級(jí)、三級(jí)、四級(jí)結(jié)構(gòu)?! ? 1)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu):指蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu),也就是該段肽鏈骨架原子的相對(duì)空間位置,并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象。二級(jí)結(jié)構(gòu)以一級(jí)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ),多為短距離效應(yīng)??煞譃椋? α-螺旋:多肽鏈主鏈圍繞中心軸呈有規(guī)律地螺旋
5、式上升,順時(shí)鐘走向,即右手螺旋,每隔3.6個(gè)氨基酸殘基上升一圈,螺距為0.540nm。α-螺旋的每個(gè)肽鍵的N-H和第四個(gè)肽鍵的羧基氧形成氫鍵,氫鍵的方向與螺旋長軸基本平形。 β-折疊:多肽鏈充分伸展,各肽鍵平面折疊成鋸齒狀結(jié)構(gòu),側(cè)鏈R基團(tuán)交錯(cuò)位于鋸齒狀結(jié)構(gòu)上下方;它們之間靠鏈間肽鍵羧基上的氧和亞氨基上的氫形成氫鍵維系構(gòu)象穩(wěn)定. β-轉(zhuǎn)角:常發(fā)生于肽鏈進(jìn)行180度回折時(shí)的轉(zhuǎn)角上,常有4個(gè)氨基酸殘基組成,第二個(gè)殘基常為脯氨酸。 無規(guī)卷曲:無確定規(guī)律性的那段肽鏈。 主要化學(xué)鍵:氫鍵。 2)蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu):指整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對(duì)空間位置,顯示為長距離
6、效應(yīng)。 主要化學(xué)鍵:疏水鍵(最主要)、鹽鍵、二硫鍵、氫鍵、范德華力。 3)蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu):對(duì)蛋白質(zhì)分子的二、三級(jí)結(jié)構(gòu)而言,只涉及一條多肽鏈卷曲而成的蛋白質(zhì)。在體內(nèi)有許多蛋白質(zhì)分子含有二條或多條肽鏈,每一條多肽鏈都有其完整的三級(jí)結(jié)構(gòu),稱為蛋白質(zhì)的亞基,亞基與亞基之間呈特定的三維空間排布,并以非共價(jià)鍵相連接。這種蛋白質(zhì)分子中各個(gè)亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用,為四級(jí)結(jié)構(gòu)。由一條肽鏈形成的蛋白質(zhì)沒有四級(jí)結(jié)構(gòu)。 主要化學(xué)鍵:疏水鍵、氫鍵、離子鍵 五、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系 ?。?、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象和特定生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。一級(jí)結(jié)構(gòu)相似的
7、多肽或蛋白質(zhì),其空間構(gòu)象以及功能也 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 相似。 尿素或鹽酸胍可破壞次級(jí)鍵 β-巰基乙醇可破壞二硫鍵 ?。病⒌鞍踪|(zhì)空間結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)特有性質(zhì)和功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。 肌紅蛋白:只有三級(jí)結(jié)構(gòu)的單鏈蛋白質(zhì),易與氧氣結(jié)合,氧解離曲線呈直角雙曲線。 血紅蛋白:具有4個(gè)亞基組成的四級(jí)結(jié)構(gòu),可結(jié)合4分子氧。成人由兩條α-肽鏈(141個(gè)氨基酸殘基)和兩條β-肽鏈(146個(gè)氨基酸殘基)組成。在氧分壓較低時(shí),與氧氣結(jié)合較難,氧解離曲線呈S狀曲線。因?yàn)椋旱谝粋€(gè)亞基與氧氣結(jié)合以后,促進(jìn)第二及第三個(gè)亞基與氧氣的結(jié)合,當(dāng)前三
8、個(gè)亞基與氧氣結(jié)合后,又大大促進(jìn)第四個(gè)亞基與氧氣結(jié)合,稱正協(xié)同效應(yīng)。結(jié)合氧后由緊張態(tài)變?yōu)樗沙趹B(tài)。 六、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) 1、蛋白質(zhì)的兩性電離:蛋白質(zhì)兩端的氨基和羧基及側(cè)鏈中的某些基團(tuán),在一定的溶液PH條件下可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。 ?。病⒌鞍踪|(zhì)的沉淀:在適當(dāng)條件下,蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象。包括: a.丙酮沉淀,破壞水化層。也可用乙醇。 b.鹽析,將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液,破壞在水溶液中的穩(wěn)定因素電荷而沉淀。 ?。?、蛋白質(zhì)變性:在某些物理和化學(xué)因素作用下,其特定的空間構(gòu)象被破壞,從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)的改變和生物活性的喪失。主要
9、為二硫鍵和非共價(jià)鍵的破壞,不涉及一級(jí)結(jié)構(gòu)的改變。變性后,其溶解度降低,粘度增加,結(jié)晶能力消失,生物活性喪失,易被蛋白酶水解。常見的導(dǎo)致變性的因素有:加熱、乙醇等有機(jī)溶劑、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子及生物堿試劑、超聲波、紫外線、震蕩等。 4、蛋白質(zhì)的紫外吸收:由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸,因此在280nm處有特征性吸收峰,可用蛋白質(zhì)定量測定。 ?。?、蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng) a.茚三酮反應(yīng):經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸可發(fā)生此反應(yīng),詳見二、3 b.雙縮脲反應(yīng):蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸酮共熱,呈現(xiàn)紫色或紅色。氨基酸不出現(xiàn)此反應(yīng)。蛋白質(zhì)水解加強(qiáng),氨基酸濃度升
10、高,雙縮脲呈色深度下降,可檢測蛋白質(zhì)水解程度。 七、蛋白質(zhì)的分離和純化 ?。薄⒊恋?,見六、2 2、電泳:蛋白質(zhì)在高于或低于其等電點(diǎn)的溶液中是帶電的,在電場中能向電場的正極或負(fù)極移動(dòng)。根據(jù)支撐物不同,有薄膜電泳、凝膠電泳等。 ?。场⑼肝觯豪猛肝龃汛蠓肿拥鞍踪|(zhì)與小分子化合物分開的方法。 ?。?、層析: a.離子交換層析,利用蛋白質(zhì)的兩性游離性質(zhì),在某一特定PH時(shí),各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同,故可以通過離子交換層析得以分離。如陰離子交換層析,含負(fù)電量小的蛋白質(zhì)首先被洗脫下來?! ? b.分子篩,又稱凝膠過濾。小分子蛋白質(zhì)進(jìn)入孔內(nèi),滯留時(shí)間長,大分子蛋
11、白質(zhì)不能時(shí)入孔內(nèi)而徑直流出。 ?。?、超速離心:既可以用來分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測定蛋白質(zhì)的分子量。不同蛋白質(zhì)其密度與形態(tài)各不相同而分開。 八、多肽鏈中氨基酸序列分析 a.分析純化蛋白質(zhì)的氨基酸殘基組成 ?。ǖ鞍踪|(zhì)水解為個(gè)別氨基酸,測各氨基酸的量及在蛋白質(zhì)中的百分組成) ↓ 測定肽鏈頭、尾的氨基酸殘基 二硝基氟苯法(DNP法) 頭端 尾端 羧肽酶A、B、C法等 丹酰氯法 ↓ 水解肽鏈,分別分析 胰凝乳蛋白酶(糜蛋白酶)法:水解芳香族氨
12、基酸的羧基側(cè)肽鍵 胰蛋白酶法:水解賴氨酸、精氨酸的羧基側(cè)肽鍵 溴化脯法:水解蛋氨酸羧基側(cè)的肽鍵 ↓ Edman降解法測定各肽段的氨基酸順序 (氨基末端氨基酸的游離α-氨基與異硫氰酸苯酯反應(yīng)形成衍生物,用層析法鑒定氨基酸種類) b.通過核酸推演氨基酸序列。 第二章 核酸的結(jié)構(gòu)與功能 一、核酸的分子組成:基本組成單位是核苷酸,而核苷酸則由堿基、戊糖和磷酸三種成分連接而成?! ? 兩類核酸:脫氧核糖核酸(DNA),存在于細(xì)胞核和線粒體內(nèi)。 核糖核酸(RNA),存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)。
13、 1、堿基: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 NH2 NH2 O CH3 O O O O O NH2 胞嘧啶 胸腺嘧啶 尿嘧啶 鳥嘌呤 腺嘌呤 嘌呤和嘧啶環(huán)中均含有共軛雙鍵,因此對(duì)波長260nm左右的紫外光有較強(qiáng)吸收,這一重要的理化性質(zhì)被用于對(duì)核酸、核苷酸、核苷及堿基進(jìn)行定性定量分析。
14、 2、戊糖:DNA分子的核苷酸的 糖是β-D-2-脫氧核糖,RNA中為β-D-核糖。 ?。?、磷酸:生物體內(nèi)多數(shù)核苷酸的磷酸基團(tuán)位于核糖的第五位碳原子上。 二、核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu) 核苷酸在多肽鏈上的排列順序?yàn)楹怂岬囊患?jí)結(jié)構(gòu),核苷酸之間通過3′,5′磷酸二酯鍵連接。 三、DNA的空間結(jié)構(gòu)與功能 1、DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu) DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)是核酸的二級(jí)結(jié)構(gòu)。雙螺旋的骨架由 糖和磷酸基構(gòu)成,兩股鏈之間的堿基互補(bǔ)配對(duì),是遺傳信息傳遞者,DNA半保留復(fù)制的基礎(chǔ),結(jié)構(gòu)要點(diǎn): a.DNA是一反向平行的互補(bǔ)雙鏈結(jié)構(gòu) 親水的脫氧核糖基和磷酸基骨架位于雙鏈的
15、外側(cè),而堿基位于內(nèi)側(cè),堿基之間以氫鍵相結(jié)合,其中,腺嘌呤始終與胸腺嘧啶配對(duì),形成兩個(gè)氫鍵,鳥嘌呤始終與胞嘧啶配對(duì),形成三個(gè)氫鍵。 b.DNA是右手螺旋結(jié)構(gòu) 螺旋直徑為2nm。每旋轉(zhuǎn)一周包含了10個(gè)堿基,每個(gè)堿基的旋轉(zhuǎn)角度為36度。螺距為3.4nm,每個(gè)堿基平面之間的距離為0.34nm。 c.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的維系 橫向靠互補(bǔ)堿基的氫鍵維系,縱向則靠堿基平面間的疏水性堆積力維持,尤以后者為重要。 ?。?、DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu) 三級(jí)結(jié)構(gòu)是在雙螺旋基礎(chǔ)上進(jìn)一步扭曲形成超螺旋,使體積壓縮。在真核生物細(xì)胞核內(nèi),DNA三級(jí)結(jié)構(gòu)與一組組蛋白共同組成核小體。在核小體的基礎(chǔ)上,DNA
16、鏈經(jīng)反復(fù)折疊形成染色體。 ?。?、功能 DNA的基本功能就是作為生物遺傳信息復(fù)制的模板和基因轉(zhuǎn)錄的模板,它是生命遺傳繁殖的物質(zhì)基礎(chǔ),也是個(gè)體生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。 DNA中的核糖和磷酸構(gòu)成的分子骨架是沒有差別的,不同區(qū)段的DNA分子只是堿基的排列順序不同。 四、RNA的空間結(jié)構(gòu)與功能 DNA是遺傳信息的載體,而遺傳作用是由蛋白質(zhì)功能來體現(xiàn)的,在兩者之間RNA起著中介作用。其種類繁多,分子較小,一般以單鏈存在,可有局部二級(jí)結(jié)構(gòu),各類RNA在遺傳信息表達(dá)為氨基酸序列過程中發(fā)揮不同作用。如: 名 稱功 能 核蛋白體RNA (rRNA)核蛋白體組成成分
17、 信使RNA (mRNA)蛋白質(zhì)合成模板 轉(zhuǎn)運(yùn)RNA (tRNA)轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸 不均一核RNA (HnRNA)成熟mRNA的前體 小核RNA (SnRNA)參與HnRNA的剪接、轉(zhuǎn)運(yùn) 小核仁RNA (SnoRNA)rRNA的加工和修飾 ?。薄⑿攀筊NA(半衰期最短) ?。保﹉nRNA為mRNA的初級(jí)產(chǎn)物,經(jīng)過剪接切除內(nèi)含子,拼接外顯子,成為成熟的mRNA并移位到細(xì)胞質(zhì) ?。玻┐蠖鄶?shù)的真核mRNA在轉(zhuǎn)錄后5′末端加上一個(gè)7-甲基鳥嘌呤及三磷酸鳥苷帽子,帽子結(jié)構(gòu)在mRNA作為模板翻譯成蛋白質(zhì)的過程中具有促進(jìn)核蛋白體與mRNA的結(jié)合,加速翻譯起始速度的作用,同時(shí)
18、可以增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性。3′末端多了一個(gè)多聚腺苷酸尾巴,可能與mRNA從核內(nèi)向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)位及mRNA的穩(wěn)定性有關(guān)。 ?。常┕δ苁前押藘?nèi)DNA的堿基順序,按照堿基互補(bǔ)的原則,抄錄并轉(zhuǎn)送至胞質(zhì),以決定蛋白質(zhì)合成的氨基酸排列順序。mRNA分子上每3個(gè)核苷酸為一組,決定肽鏈上某一個(gè)氨基酸,為三聯(lián)體密碼。 ?。?、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(分子量最?。? ?。保﹖RNA分子中含有10%~20%稀有堿基,包括雙氫尿嘧啶,假尿嘧啶和甲基化的嘌呤等。 ?。玻┒?jí)結(jié)構(gòu)為三葉草形,位于左右兩側(cè)的環(huán)狀結(jié)構(gòu)分別稱為DHU環(huán)和Tψ環(huán),位于下方的環(huán)叫作反密碼環(huán)。反密碼環(huán)中間的3個(gè)堿基為反密碼子,與mRNA上相應(yīng)的三
19、聯(lián)體密碼子形成堿基互補(bǔ)。所有tRNA3′末端均有相同的CCA-OH結(jié)構(gòu)。 ?。常┤?jí)結(jié)構(gòu)為倒L型。 ?。矗┕δ苁窃诩?xì)胞蛋白質(zhì)合成過程中作為各種氨基酸的戴 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 本并將其轉(zhuǎn)呈給mRNA。 3、核蛋白體RNA(含量最多) ?。保┰松锏膔RNA的小亞基為16S,大亞基為5S、23S;真核生物的rRNA的小亞基為18S,大亞基為5S、5.8S、28S。真核生物的18SrRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)呈花狀。 ?。玻﹔RNA與核糖體蛋白共同構(gòu)成核糖體,它是蛋白質(zhì)合成機(jī)器--核蛋白體的組成成分,參與蛋白質(zhì)的合成。
20、 ?。础⒑嗣福耗承㏑NA分子本身具有自我催化能,可以完成rRNA的剪接。這種具有催化作用的RNA稱為核酶。 五、核酸的理化性質(zhì) 1、DNA的變性 在某些理化因素作用下,如加熱,DNA分子互補(bǔ)堿基對(duì)之間的氫鍵斷裂,使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)松散,變成單鏈,即為變性。監(jiān)測是否發(fā)生變性的一個(gè)最常用的指標(biāo)是DNA在紫外區(qū)260nm波長處的吸光值變化。解鏈過程中,吸光值增加,并與解鏈程度有一定的比例關(guān)系,稱為DNA的增色效應(yīng)。紫外光吸收值達(dá)到最大值的50%時(shí)的溫度稱為DNA的解鏈溫度(Tm),一種DNA分子的Tm值大小與其所含堿基中的G+C比例相關(guān),G+C比例越高,Tm值越高。
21、 2、DNA的復(fù)性和雜交 變性DNA在適當(dāng)條件下,兩條互補(bǔ)鏈可重新恢復(fù)天然的雙螺旋構(gòu)象,這一現(xiàn)象稱為復(fù)性,其過程為退火,產(chǎn)生減色效應(yīng)。不同來源的核酸變性后,合并一起復(fù)性,只要這些核苷酸序列可以形成堿基互補(bǔ)配對(duì),就會(huì)形成雜化雙鏈,這一過程為雜交。雜交可發(fā)生于DNA-DNA之間,RNA-RNA之間以及RNA-DNA之間。 六、核酸酶(注意與核酶區(qū)別) 指所有可以水解核酸的酶,在細(xì)胞內(nèi)催化核酸的降解。可分為DNA酶和RNA酶;外切酶和內(nèi)切酶;其中一部分具有嚴(yán)格的序列依賴性,稱為限制性內(nèi)切酶。 第三章 酶 一、酶的組成 單純酶:僅由氨基酸殘基構(gòu)成的酶
22、。 結(jié)合酶:酶蛋白:決定反應(yīng)的特異性; 輔助因子:決定反應(yīng)的種類與性質(zhì);可以為金屬離子或小分子有機(jī)化合物。 可分為輔酶:與酶蛋白結(jié)合疏松,可以用透析或超濾方法除去。 輔基:與酶蛋白結(jié)合緊密,不能用透析或超濾方法除去。 酶蛋白與輔助因子結(jié)合形成的復(fù)合物稱為全酶,只有全酶才有催化作用。 參與組成輔酶的維生素 轉(zhuǎn)移的基團(tuán) 輔酶或輔基所含維生素 氫原子NAD+﹑NADP+尼克酰胺(維生素PP) FMN﹑FAD維生素B2 醛基TPP維生素B1 ?;o酶A﹑硫辛酸泛酸、硫辛酸 烷基鈷胺類
23、輔酶類維生素B12 二氧化碳生物素生物素 氨基磷酸吡哆醛吡哆醛(維生素B6) 甲基、等一碳單位四氫葉酸葉酸 二、酶的活性中心 酶的活性中心由酶作用的必需基團(tuán)組成,這些必需基團(tuán)在空間位置上接近組成特定的空間結(jié)構(gòu),能與底物特異地結(jié)合并將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。對(duì)結(jié)合酶來說,輔助因子參與酶活性中心的組成。但有一些必需基團(tuán)并不參加活性中心的組成。 三、酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué) 酶促反應(yīng)的速度取決于底物濃度、酶濃度、PH、溫度、激動(dòng)劑和抑制劑等。 ?。?、底物濃度 1)在底物濃度較低時(shí),反應(yīng)速度隨底物濃度的增加而上升,加大底物濃度,反應(yīng)速度趨緩,底物濃
24、度進(jìn)一步增高,反應(yīng)速度不再隨底物濃度增大而加快,達(dá)最大反應(yīng)速度,此時(shí)酶的活性中心被底物飽合。 ?。玻┟资戏匠淌? V=Vmax[S]/Km+[S] a.米氏常數(shù)Km值等于酶促反應(yīng)速度為最大速度一半時(shí)的底物濃度。 b.Km值愈小,酶與底物的親和力愈大。 c.Km值是酶的特征性常數(shù)之一,只與酶的結(jié)構(gòu)、酶所催化的底物和反應(yīng)環(huán)境如溫度、PH、離子強(qiáng)度有關(guān),與酶的濃度無關(guān)。 d.Vmax是酶完全被底物飽和時(shí)的反應(yīng)速度,與酶濃度呈正比。 ?。?、酶濃度 在酶促反應(yīng)系統(tǒng)中,當(dāng)?shù)孜餄舛却蟠蟪^酶濃度,使酶被底物飽和時(shí),反應(yīng)速度與酶的濃度成正比關(guān)系。
25、 ?。?、溫度 溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度具有雙 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 重影響。升高溫度一方面可加快酶促反應(yīng)速度,同時(shí)也增加酶的變性。酶促反應(yīng)最快時(shí)的環(huán)境溫度稱為酶促反應(yīng)的最適溫度。酶的活性雖然隨溫度的下降而降低,但低溫一般不使酶破壞。 酶的最適溫度不是酶的特征性常數(shù),它與反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間有關(guān)。 ?。础H 酶活性受其反應(yīng)環(huán)境的PH影響,且不同的酶對(duì)PH有不同要求,酶活性最大的某一PH值為酶的最適PH值,如胃蛋白酶的最適PH約為1.8,肝精氨酸酶最適PH為9.8,但多數(shù)酶的最適PH接近中性。 最適PH不是酶的特征性
26、常數(shù),它受底物濃度、緩沖液的種類與濃度、以及酶的純度等因素影響。 ?。?、激活劑 使酶由無活性或使酶活性增加的物質(zhì)稱為酶的激活劑,大多為金屬離子,也有許多有機(jī)化合物激活劑。分為必需激活劑和非必需激活劑。 ?。?、抑制劑 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白變性的物質(zhì)統(tǒng)稱為酶的抑制劑。大多與酶的活性中心內(nèi)、外必需基團(tuán)相結(jié)合,從而抑制酶的催化活性。可分為: ?。保┎豢赡嫘砸种苿阂怨矁r(jià)鍵與酶活性中心上的必需基團(tuán)相結(jié)合,使酶失活。此種抑制劑不能用透析、超濾等方法去除。又可分為: a.專一性抑制劑:如農(nóng)藥敵百蟲、敵敵畏等有機(jī)磷化合物能特民地與膽堿酯酶活性中心絲氨酸
27、殘基的羥基結(jié)合,使酶失活,解磷定可解除有機(jī)磷化合物對(duì)羥基酶的抑制作用。 b.非專一性抑制劑:如低濃度的重金屬離子如汞離子、銀離子可與酶分子的巰基結(jié)合,使酶失活,二巰基丙醇可解毒。化學(xué)毒氣路易士氣是一種含砷的化合物,能抑制體內(nèi)的巰基酶而使人畜中毒。 ?。玻┛赡嫘砸种苿和ǔR苑枪矁r(jià)鍵與酶和(或)酶-底物復(fù)合物可逆性結(jié)合,使酶活性降低或消失。采用透析或超濾的方法可將抑制劑除去,使酶恢復(fù)活性??煞譃椋? a.競爭性抑制劑:與底物競爭酶的活性中心,從而阻礙酶與底物結(jié)合形成中間產(chǎn)物。如丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的抑制作用;磺胺類藥物由于化學(xué)結(jié)構(gòu)與對(duì)氨基苯甲酸相似,是二氫葉酸合成酶的競爭抑制
28、劑,抑制二氫葉酸的合成;許多抗代謝的抗癌藥物,如氨甲蝶呤(MTX)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巰基嘌呤(6-MP)等,幾乎都是酶的競爭性抑制劑,分別抑制四氫葉酸、脫氧胸苷酸及嘌呤核苷酸的合成。 Vmax不變,Km值增大 b.非競爭性抑制劑:與酶活性中心外的必需基團(tuán)結(jié)合,不影響酶與底物的結(jié)合,酶和底物的結(jié)合也不影響與抑制劑的結(jié)合。 Vmax降低,Km值不變 c.反競爭性抑制劑:僅與酶和底物形成的中間產(chǎn)物結(jié)合,使中間產(chǎn)物的量下降。 Vmax、Km均降低 四、酶活性的調(diào)節(jié) ?。薄⒚冈募せ睢? 有些酶在細(xì)胞內(nèi)合成或初分泌時(shí)只是酶的無
29、活性前體,必須在一定條件下,這些酶的前體水解一個(gè)或幾個(gè)特定的肽鍵,致使構(gòu)象發(fā)生改變,表現(xiàn)出酶的活性。酶原的激活實(shí)際上是酶的活性中心形成或暴露的過程。生理意義是避免細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行自身消化,并使酶在特定的部位環(huán)境中發(fā)揮作用,保證體內(nèi)代謝正常進(jìn)行。 ?。病⒆儤?gòu)酶 體內(nèi)一些代謝物可以與某些酶分子活性中心外的某一部位可逆地結(jié)合,使酶發(fā)生變構(gòu)并改變其催化活性,有變構(gòu)激活與變構(gòu)抑制。 ?。?、酶的共價(jià)修飾調(diào)節(jié) 酶蛋白肽鏈上的一些基團(tuán)可與某種化學(xué)基團(tuán)發(fā)生可逆的共價(jià)結(jié)合,從而改變酶的活性,這一過程稱為酶的共價(jià)修飾。在共價(jià)修飾過程中,酶發(fā)生無活性與有活性兩種形式的互變。酶的共
30、價(jià)修飾包括磷酸化與脫磷酸化、乙?;c脫乙酰化、甲基化與脫甲基化、腺苷化與脫腺苷化等,其中以磷酸化修飾最為常見。 五、同工酶 同工酶是指催化相同的化學(xué)反應(yīng),而酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)乃至免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶。同工酶是由不同基因或等位基因編碼的多肽鏈,或由同一基因轉(zhuǎn)錄生成的不同mRNA翻譯的不同多肽鏈組成的蛋白質(zhì)。翻譯后經(jīng)修飾生成的多分子形式不在同工酶之列。同工酶存在于同一種屬或同一個(gè)體的不同組織或同一細(xì)胞的不同亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中。 如乳酸脫氫酶是四聚體酶。亞基有兩型:骨骼肌型(M型)和心肌型(H型)。兩型亞基以不同比例組成五種同工酶,如LDH1(HHHH)、LDH2(H
31、HHM)等。它們具有不同的電泳速度,對(duì)同一底物表現(xiàn)不同的Km值。單個(gè)亞基無酶的催化活性。心肌、腎以LDH1為主,肝、骨骼肌以LDH5為主。 肌酸激酶是二聚體,亞基有M型(肌型)和B型(腦型)兩種。腦中含CK1(BB型);骨骼肌中含CK3(MM型);CK2(MB型)僅見于心肌。 第四章 維生素 一、脂溶性維生素 ?。?、維生素A 作用:與眼視覺有關(guān),合成視紫紅質(zhì)的原料;維持上皮組織結(jié)構(gòu)完整;促進(jìn)生長發(fā)育。 缺乏可引起夜盲癥、干眼病等。 2、維生素D 作用:調(diào)節(jié)鈣磷代謝,促進(jìn)鈣磷吸收。 缺乏兒童引
32、起佝僂病,成人引起軟骨病。 3、維生素E 作用:體內(nèi)最重要的抗氧化劑,保護(hù)生物膜的結(jié)構(gòu)與功能;促進(jìn)血紅素代謝;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與XXXXXX的成熟與胚胎發(fā)育有關(guān)。 ?。础⒕S生素K 作用:與肝臟合成凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ有關(guān)。 缺乏時(shí)可引起凝血時(shí)間延長,血塊回縮不良。 二、水溶性維生素 ?。薄⒕S生素B1 又名硫胺素,體內(nèi)的活性型為焦磷酸硫胺素(TPP) TPP是α-酮酸氧化脫羧酶和轉(zhuǎn)酮醇酶的輔酶,并可抑制膽堿酯酶的活性,缺乏時(shí)可引起腳氣病和(或)末梢神經(jīng)炎。 2、維生素B2 又名核黃素,體內(nèi)的活性型為黃素單核
33、苷酸(FMN)和黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD) FMN和FAD是體內(nèi)氧化還原酶的輔基,缺乏時(shí)可引起口角炎、唇炎、陰囊炎、眼瞼炎等癥。 ?。场⒕S生素PP 包括尼克酸及尼克酰胺,肝內(nèi)能將色氨酸轉(zhuǎn)變成維生素PP,體內(nèi)的活性型包括尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)和尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)。 NAD+和NADP+在體內(nèi)是多種不需氧脫氫酶的輔酶,缺乏時(shí)稱為癩皮癥,主要表現(xiàn)為皮炎、腹瀉及癡呆。 ?。?、維生素B6 包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,體內(nèi)活性型為磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺。 磷酸吡哆醛是氨基酸代謝中的轉(zhuǎn)氨酶及脫羧酶的輔酶,也是δ-氨基γ-
34、酮戊酸(ALA)合成酶的輔酶。 ?。?、泛酸 又稱遍多酸,在體內(nèi)的活性型為輔酶A及?;d體蛋白(ACP)。 在體內(nèi)輔酶A及?;d體蛋白(ACP)構(gòu)成酰基轉(zhuǎn)移酶的輔酶。 6、生物素 生物素是體內(nèi)多種羧化酶的輔酶,如丙酮酸羧化酶,參與二氧化碳的羧化過程。 7、葉酸 以四氫葉酸的形式參與一碳基團(tuán)的轉(zhuǎn)移,一碳單位在體內(nèi)參加多種物質(zhì)的合成,如嘌呤、胸腺嘧啶核苷酸等。葉酸缺乏時(shí),DNA合成受抑制,骨髓幼紅細(xì)胞DNA合成減少,造成巨幼紅細(xì)胞貧血。 ?。浮⒕S生素B12 又名鈷胺素,唯一含金屬元素的維生素。 參與同型半工半胱氨酸甲基化生
35、成蛋氨酸的反應(yīng),催化這一反應(yīng)的蛋氨酸合成酶(又稱甲基轉(zhuǎn)移酶)的輔基是維生素B12,它參與甲基的轉(zhuǎn)移。一方面不利于蛋氨酸的生成,同時(shí)也影響四氫葉酸的再生,最終影響嘌呤、嘧啶的合成,而導(dǎo)致核酸合成障礙,產(chǎn)生巨幼紅細(xì)胞性貧血。 ?。?、維生素C 促進(jìn)膠原蛋白的合成;是催化膽固醇轉(zhuǎn)變成7-α羥膽固醇反應(yīng)的7-α羥化酶的輔酶;參與芳香族氨基酸的代謝;增加鐵的吸收;參與體內(nèi)氧化還原反應(yīng),保護(hù)巰基等作用。 第三章 氨基酸代謝 一、營養(yǎng)必需氨基酸 簡記為:纈、異、亮、蘇、蛋、賴、苯、色 二、體內(nèi)氨的來源和轉(zhuǎn)運(yùn) 1、來源 1)氨基酸經(jīng)脫氨基作用產(chǎn)生的氨是體內(nèi)氨的主要來源
36、; 2)由腸道吸收的氨;即腸內(nèi)氨基酸在腸道細(xì)菌作用下產(chǎn)生的氨和腸道尿素經(jīng)細(xì)菌尿素 酶水解產(chǎn)生的氨。 3)腎小管上皮細(xì)胞分泌的氨主要來自谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的催化下水解生成的氨。 2、轉(zhuǎn)運(yùn) 1)丙氨酸-葡萄糖循環(huán) ?。∪猓 。ㄑ海ǜ危? 肌肉蛋白質(zhì) 葡萄糖 葡萄糖 葡萄糖 尿素 氨基酸糖糖尿素循環(huán) 分異 NH3 解 生 NH3 谷氨酸 丙酮酸 丙酮酸 谷氨酸 轉(zhuǎn)氨酶
37、 轉(zhuǎn)氨酶 α-酮戊二酸 丙氨酸 丙氨酸 丙氨酸 α-酮戊二酸 2)谷氨酰胺的運(yùn)氨作用 谷氨酰胺主要從腦、肌肉等組織向肝或腎運(yùn)氨。氨與谷氨酰胺在谷氨酰胺合成酶催化下生成谷氨酰胺,由血液輸送到肝或腎,經(jīng)谷氨酰胺酶水解成谷氨酸和氨。 可以認(rèn)為,谷氨酰胺既是氨的解毒產(chǎn)物,也是氨的儲(chǔ)存及運(yùn)輸形式。 三、氨基酸的脫氨基作用 1、轉(zhuǎn)氨基作用 轉(zhuǎn)氨酶催化某一氨基酸的α-氨基轉(zhuǎn)移到另一種α-酮酸的酮基上,生成相應(yīng)的氨基酸;原來的氨基酸則轉(zhuǎn)變成α-酮酸。既是氨基酸的分解代謝過程,也是體內(nèi)某些氨基酸合成的重要途徑。除賴氨酸、脯氨酸
38、及羥脯氨酸外,體內(nèi)大多數(shù)氨基酸可以參與轉(zhuǎn)氨基作用。如: 谷氨酸+丙酮酸 谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT) α-酮戊二酸+丙氨酸 谷氨酸+草酰乙酸 谷草轉(zhuǎn)氨酶(A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 ST)α-酮戊二酸+天冬氨酸 轉(zhuǎn)氨酶的輔酶是維生素B6的磷酸酯,即磷酸吡哆醛。 2、L-谷氨酸氧化脫氨基作用 L-谷氨酸L-谷氨酸脫氫酶 α-酮戊二酸+NH3 NADH 3、聯(lián)合脫氨基作用 氨基酸 α-酮戊二酸 NH3+NADH 轉(zhuǎn)氨酶谷氨酸脫氫酶 α-酮酸 谷氨酸 NAD+ 4、嘌呤核苷酸循環(huán)
39、 上述聯(lián)合脫氨基作用主要在肝、腎等組織中進(jìn)行。骨骼肌和心肌中主要通過嘌呤核苷酸循環(huán)脫去氨基。 氨基酸 α-酮戊二酸 天冬氨酸 次黃嘌呤核苷酸 NH3 GTP(IMP) 腺苷酸代琥珀酸 腺嘌呤核苷酸 (AMP) 延胡索酸 α-酮酸L-谷氨酸草酰乙酸 蘋果酸 5、氨基酸脫氨基后生成的α-酮酸可以轉(zhuǎn)變成糖及脂類,在體內(nèi)可以轉(zhuǎn)變成糖的氨基酸稱為生糖氨基酸;能轉(zhuǎn)變成酮體者稱為生酮氨基酸;二者兼有者稱為生糖兼生酮氨基酸。只要記住生酮氨
40、基酸包括:亮、賴;生糖兼生酮氨基酸包括異亮、蘇、色、酪、苯丙;其余為生糖氨基酸。 四、氨基酸的脫羧基作用 1、L-谷氨酸 L-谷氨酸脫羧酶 γ-氨基丁酸(GABA) GABA為抑制性神經(jīng)遞質(zhì)。 2、L-半胱氨酸 磺酸丙氨酸 磺酸丙氨酸脫羧酶 ?;撬? ?;撬崾墙Y(jié)合型膽汁酸的組成成分。 3、L-組氨酸 組氨酸脫羧酶 組胺 組胺是一種強(qiáng)烈的血管舒張劑,并能增加毛細(xì)血管的通透性。 4、色氨酸 色氨酸羥化酶 5-羥色氨酸 5-羥色氨酸脫羧酶 5-羥色胺(5-HT) 腦內(nèi)的5-羥色胺可作為神經(jīng)遞質(zhì),具有抑制作用;在外周組織,有收縮血管作用。 5、L-鳥氨酸 鳥
41、氨酸脫羧酶 腐胺 精脒 精胺 脫羧基SAM 脫羧基SAM 精脒與精胺是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長的重要物質(zhì)。合稱為多胺類物質(zhì)。 五、一碳單位 一碳單位來源于組、色、甘、絲,體內(nèi)的一碳單位有:甲基、甲烯基、甲炔基、甲?;皝啺奔谆?,CO2不屬于一碳單位。 四氫葉酸是一碳單位代謝的輔酶。 主要生理功用是作為合成嘌呤及嘧啶的原料。如N10-CHO-FH4與N5,H10=CH-FH4分別提供嘌呤合成時(shí)C2與C8的來源;N5,N10-CH2-FH4提供胸苷酸合成時(shí)甲基的來源。由此可見,一碳單位將氨基酸與核酸代謝密切聯(lián)系起來。 六、芳香族氨基
42、酸(色、酪、苯丙)的代謝 1、 苯丙氨酸 苯丙氨酸羥化酶 酪氨酸 黑色素細(xì)胞的酪氨酸酶 多巴 酪氨酸羥化酶 多巴 黑色素 多巴脫羧酶 多巴胺 SAM 去甲腎上腺素 兒茶酚胺 腎上腺素 苯酮酸尿癥:當(dāng)苯丙氨酸羥化酶先天性缺乏時(shí),苯丙氨酸不能轉(zhuǎn)變?yōu)槔野彼?,體內(nèi)苯丙氨酸蓄積,并經(jīng)轉(zhuǎn)氨基作用生成苯丙酮酸,再
43、進(jìn)一步轉(zhuǎn)變成苯乙酸等衍生物。此時(shí)尿中出現(xiàn)大量苯丙酮酸等代謝產(chǎn)物,稱為苯酮酸尿癥。 白化?。喝梭w缺乏酪氨酸酶,黑色素合成障礙,皮膚、毛發(fā)等發(fā)白,稱為白化病。 2、色氨酸 1)生成5-羥色胺 2)生成一碳單位 3)可分解產(chǎn)生尼克酸,這是體內(nèi)合成維生素的特例。 七、含硫氨基酸(甲硫、半胱、胱)代謝 1、甲硫氨酸 S-腺苷甲硫氨酸(SAM) ATP PPi SAM中的甲基為活性甲基,通過轉(zhuǎn)甲基作用可以生成多種含甲基的重要生理活性物質(zhì)。SAM是體內(nèi)最重要的甲基直接供給體。 2、甲硫氨酸循環(huán) 甲硫氨酸 SAM
44、甲基轉(zhuǎn)移酶 S-腺苷同型半胱氨酸 RH RCH3 < 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 br> 甲硫氨酸合成酶 同型半胱氨酸 FH4 N5-CH3-FH4 N5-CH3-FH4可看成體內(nèi)甲基的間接供體,甲硫氨酸合成酶輔酶為維生素B12。 3、肌酸的合成 肌酸以甘氨酸為骨架,由精氨酸提供脒基,SAM供給甲基而合成。在肌酸激酶催化下,肌酸轉(zhuǎn)變成磷酸肌酸,并儲(chǔ)存ATP的高能磷酸鍵。 4、體內(nèi)硫酸根主要來源于半胱氨酸,
45、一部分以無機(jī)鹽形式隨尿排出,另一部分則經(jīng)ATP活化成活性硫酸根,即3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸(PAPS)。 八、氨基酸衍生的重要含氮化合物 化合物氨基酸前體 嘌呤堿天冬氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸 嘧啶堿天冬氨酸 血紅素、細(xì)胞色素甘氨酸 肌酸、磷酸肌酸甘氨酸、精氨酸、蛋氨酸 尼克酸色氨酸 兒茶酚胺類苯丙氨酸、酪氨酸 甲狀腺素酪氨酸 黑色素苯丙氨酸、酪氨酸 精胺、精脒蛋氨酸、鳥氨酸 九、尿素的生成 線粒體 NH3+CO2+H2O 2*ATP 氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ(CSP-Ⅰ) 2*AD
46、P N-酰谷氨酸(AGA),Mg++ 氨基甲酰磷酸 Pi胞液 鳥氨酸 瓜氨酸 ATP瓜氨酸 天冬氨酸 α-酮戊二酸 氨基酸 AMP ASS 鳥氨酸 精氨酸代琥珀酸 草酰乙酸 谷氨酸 α-酮酸 尿素 蘋果酸 精氨酸 延胡索酸 ASS:精氨酸代琥珀酸合成酶 尿素分子中的2個(gè)氮原子,1個(gè)來自氨,另1個(gè)來自天冬氨酸,而天冬氨酸又可由其他氨基酸通過轉(zhuǎn)氨基作用而生成。 線粒體中以氨為氮源,
47、通過CSP-Ⅰ合成氨甲酰磷酸,并進(jìn)一步合成尿素;在胞液中以 谷氨酰胺為氮源,通過CSP-Ⅱ,催化合成氨基甲酰磷酸,并進(jìn)一步參與嘧啶的合成。CSP-Ⅰ的活性可用為肝細(xì)胞分化程度的指標(biāo)之一;CSP-Ⅱ的活性可作為細(xì)胞增殖程度的指標(biāo)之一。 氨基甲酰磷酸的生成是尿素合成的重要步驟。AGA是CSP-Ⅰ的變構(gòu)激動(dòng)劑,精氨酸是AGA合成酶的激活劑。 第三章核苷酸代謝 一、嘌呤核苷酸代謝 1、合成原料CO2 甘氨酸 C6N7 天冬氨酸N1C5 甲?;ㄒ惶紗挝唬〤2C4C8 甲?;ㄒ惶紗挝唬? N3N9
48、 谷氨酰胺 2、合成過程 ?。保念^合成: 5-磷酸核糖 PRPP合成酶 磷酸核糖焦磷酸 PRPP酰胺轉(zhuǎn)移酶 5-磷酸核糖胺 ATPAMP(PRPP) ATP AMP 次黃嘌呤核苷酸 (IMP) GTPGMP黃嘌呤核苷酸 (XMP) 嘌呤核苷酸是在磷酸核糖分子上逐步合成的,而不是首先單獨(dú)合成嘌呤堿然后再與磷酸核糖結(jié)合而成的。 2)補(bǔ)救合成: 利用體內(nèi)游離的嘌呤或嘌呤核苷,經(jīng)過簡單的反
49、應(yīng)過程,合成嘌呤核苷酸。生理意義為:一方面在于可以節(jié)省從頭合成時(shí)能量和一些氨基酸的消耗;另一方面,體內(nèi)某些組織器官,如腦、骨髓等由于缺乏從頭合成的酶體系,只能進(jìn)行補(bǔ)救合成。 3、脫氧核苷酸的生成 脫氧核苷酸的生成是在二磷酸核苷水平上,由核糖核苷酸還原酶催化,核糖核苷酸C2上的羥基被氫取代生成。 4、分解產(chǎn)物 AMP 次黃嘌呤 黃嘌呤氧化酶 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 黃嘌呤 黃嘌呤氧化酶 尿酸 GMP 鳥嘌呤 人體內(nèi)嘌呤堿最終分解生成尿酸,隨尿排出體外。 痛風(fēng)癥患者血中尿酸含量升高。臨床上常用別嘌呤醇治療痛風(fēng)癥,這是因?yàn)閯e嘌呤醇與 次黃嘌呤結(jié)構(gòu)類似,可抑制黃嘌呤氧化酶,從而抑制尿酸的生成。 5、抗代謝物
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