《醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課件：4_3單基因遺傳病的研究方法與技術(shù)》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課件：4_3單基因遺傳病的研究方法與技術(shù)（69頁珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。
1、基因突變基因突變基因突變基因突變：傳遞中不改變?cè)械耐蛔?。：傳遞中不改變?cè)械耐蛔?。：傳遞中不斷改變自己，多見：傳遞中不斷改變自己，多見于短重復(fù)序列的突變，在一代代傳遞中于短重復(fù)序列的突變，在一代代傳遞中重復(fù)次數(shù)發(fā)生明顯變化。重復(fù)次數(shù)發(fā)生明顯變化。 三核苷酸重復(fù)突變?nèi)塑账嶂貜?fù)突變基因突變類型基因突變類型：只有一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的改變，是突變：只有一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的改變，是突變中最多見的形式。突變的結(jié)果分為：中最多見的形式。突變的結(jié)果分為：基因突變類型基因突變類型各種類型病理性突變的比例各種類型病理性突變的比例微小突變微小突變基因突變分析所用實(shí)驗(yàn)材料基因突變分析所用實(shí)驗(yàn)材料Xq27.3前突變和全
2、突變前突變和全突變正常正常 CGG 200F: Fully expanded and methylatedNM: Methylated X do not cut with EclXIP: Unmethylated premutationN: X in normal male and active normal femalev聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)于1983年由美國(guó)年由美國(guó)Cetus公司的公司的K.Mullis建立，并和建立，并和定點(diǎn)突變的發(fā)明者定點(diǎn)突變的發(fā)明者M(jìn).Smith一起榮獲一起榮獲1993年度諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)，年度諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)，為為生命科學(xué)領(lǐng)域的研究開創(chuàng)了嶄新時(shí)代。生命科學(xué)領(lǐng)域的研
3、究開創(chuàng)了嶄新時(shí)代。5533d.NTPs耐熱DNA聚合酶引物5353535353535353添加反應(yīng)混合液添加反應(yīng)混合液及樣本及樣本變性變性535353535353退火退火加入試管中加入試管中延伸延伸53535353繼續(xù)延伸繼續(xù)延伸535355TaqTaq353TaqTaq55循環(huán)循環(huán)5353535355335353第二個(gè)循環(huán)第二個(gè)循環(huán)4個(gè)拷貝個(gè)拷貝第三個(gè)循環(huán)第三個(gè)循環(huán)8個(gè)拷貝個(gè)拷貝53535353535353535353533553535353第第n個(gè)循環(huán)個(gè)循環(huán)2n個(gè)拷貝個(gè)拷貝應(yīng)用應(yīng)用PCR相關(guān)技術(shù)進(jìn)行基因突變相關(guān)技術(shù)進(jìn)行基因突變分析的策略與方法分析的策略與方法策略與方法策略與方法1. 脊髓小
4、腦性共濟(jì)失調(diào)脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào) NC F1 F2 F3 F4 F5 PC M應(yīng)用應(yīng)用PCR技術(shù)分析一遺傳性脊髓小腦性共技術(shù)分析一遺傳性脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)（濟(jì)失調(diào)（SCA)3型家系型家系NCNC: :正常對(duì)照正常對(duì)照PCPC: :陽性對(duì)照陽性對(duì)照F F: :家系成員家系成員M M:Marker:Marker結(jié)果：結(jié)果：家系成員家系成員1 1、3 3、4 4有有SCA3SCA3致病基致病基因突變因突變; ;家系成員家系成員2 2、5 5未檢測(cè)到突變未檢測(cè)到突變123452. 脊肌萎縮癥脊肌萎縮癥應(yīng)用應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)分析脊肌萎縮癥（技術(shù)分析脊肌萎縮癥（SMA）致病基因致病基因SMNPCRPC
5、R擴(kuò)增擴(kuò)增SMNSMN基因基因exon7,DraIexon7,DraI酶切酶切PCRPCR產(chǎn)物產(chǎn)物. .酶切酶切N N：正常人：正常人PCRPCR產(chǎn)物被酶切為產(chǎn)物被酶切為兩條帶兩條帶酶切酶切P P：陽性對(duì)照：陽性對(duì)照PCRPCR產(chǎn)物被酶切為產(chǎn)物被酶切為一條短帶一條短帶病人病人1 1：結(jié)果顯示：結(jié)果顯示SMNSMN基因有突變基因有突變病人病人2 2和和3 3：結(jié)果：結(jié)果顯示未有突變顯示未有突變414244新致病基因的研究方法新致病基因的研究方法和技術(shù)和技術(shù)StopCACACAPrimer 1Primer 2CACACACACACACACACACACACACACACAD4S1534D4S2929D
6、4S2460D4S423I-1114,124176,178200,202105,112II-1114,120153,159200,202107,109II-2114,124157,176202,204105,112II-3114,122157,178200,202102,105II-4114,124157,176202,204105,112II-5114,124157,176198,202107,109III-1114,124153,176200,202109,112III-2114,124176,176202,202109,112 隱性突變隱性突變往往導(dǎo)致失去功能（loss of function） 顯性突變可導(dǎo)致獲得功能（gain of function）和失去功能 失去功能：?jiǎn)伪秳┝坎蛔悖╤alpoinsufficency） 獲得功能：顯性負(fù)效應(yīng)（dominant negtive） 基因突變對(duì)基因功能的影響及發(fā)病基因突變對(duì)基因功能的影響及發(fā)病機(jī)制研究機(jī)制研究將目的DN片段克隆到質(zhì)粒載體 失去功能引起單倍劑量不足失去功能引起單倍劑量不足， 獲得功能導(dǎo)致顯性負(fù)效應(yīng)獲得功能導(dǎo)致顯性負(fù)效應(yīng)，適于建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型，雜合突變
醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課件：4_3單基因遺傳病的研究方法與技術(shù)
