江蘇省徐州市高考生物總復(fù)習(xí) 選考專題二 細(xì)胞工程學(xué)案
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1、 專題二 細(xì)胞工程 第1課時(shí) 植物組織培養(yǎng)技術(shù) 學(xué)習(xí)目標(biāo):1.簡述細(xì)胞全能性的概念含義 2. 植物組織培養(yǎng)的過程和方法 一、細(xì)胞工程的概念 指以細(xì)胞為基本單位,在體外無菌條件下進(jìn)行培養(yǎng)、繁殖或利用細(xì)胞融合、核移植等技術(shù),使細(xì)胞某些生物學(xué)特性按照人們的意愿發(fā)生改變,從而改良生物品種、創(chuàng)造新品種和加速繁育生物個(gè)體,以及獲得某些有用的細(xì)胞代謝產(chǎn)物的技術(shù)。 1.原理和方法:應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法。 2.操作水平:細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平。 3.工程目的:按照人的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞
2、產(chǎn)品。 二、分類 根據(jù)操作對象不同,可分為植物細(xì)胞工程、動物細(xì)胞工程和微生物細(xì)胞工程。 三、技術(shù)應(yīng)用 I.植物細(xì)胞工程 (一)植物組織培養(yǎng) 1.概念:在無菌和人工控制條件下,將離體的植物器官、組織、細(xì)胞,培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上,給予適宜的培養(yǎng)條件,誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織,叢芽,最終形成完整的植株。 2.理論基礎(chǔ):植物細(xì)胞的全能性。 (1)概念:每個(gè)細(xì)胞都包含該物種所特有的全套遺傳物質(zhì),都有發(fā)育成完整個(gè)體所必需的全部基因。 (2)原因:生物體的任一細(xì)胞都含有本物種的全部遺傳信息。 (3)生物體上的細(xì)胞未表現(xiàn)出全能性,而是形成特定的組織器官,其原因是:細(xì)胞中的基因進(jìn)行了選擇性表達(dá)
3、,使細(xì)胞分化成不同的組織和器官 (4)表現(xiàn)出全能性的條件:完整的細(xì)胞核、脫離母體、無菌、一定的營養(yǎng)、激素;適宜的外部條件。 (5)全能性表達(dá)的難易程度:受精卵>生殖細(xì)胞>干細(xì)胞>體細(xì)胞;植物細(xì)胞>動物細(xì)胞 3.目的:獲取植株。 4.選材:植物莖尖、根尖、葉片和花藥等。 5.過程 (1)外植體需消毒,可用體積分?jǐn)?shù)70%的酒精。各類器具需經(jīng)過滅菌處理,在無菌條件下操作。若選取外植體是花藥,則此過程稱為花藥(花粉)離體培養(yǎng)。 (2)細(xì)胞分化:植物的個(gè)體發(fā)育過程中,細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上都會出現(xiàn)穩(wěn)定性差異,形成這些差異的過程叫做細(xì)胞分化。 (3)分化的實(shí)質(zhì):基因選擇性表達(dá)的結(jié)
4、果。 (4)脫分化:讓已經(jīng)分化的細(xì)胞,經(jīng)過誘導(dǎo)后,失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過程。此過程應(yīng)作遮光處理。 (5)愈傷組織的特點(diǎn):沒有特定結(jié)構(gòu)和功能并處于旺盛分裂狀態(tài)的薄壁細(xì)胞(排列疏松高度液泡化,無定形狀態(tài))。 愈傷組織由于分裂旺盛,細(xì)胞增殖較迅速,更容易受到外界環(huán)境的干擾而發(fā)生突變(包括基因突變和染色體變異)。 當(dāng)細(xì)胞分裂素和生長素的含量,配比相等時(shí),愈傷組織只生長不分化;配比高時(shí)利于芽的分化;比例低時(shí)利于根的分化。 (6)再分化與脫分化所用的培養(yǎng)基成分不同。再分化時(shí)需要光照處理。再分化成根、芽或胚狀體等。 (7)胚狀體:也稱體細(xì)胞胚,類似胚的結(jié)構(gòu),具有胚芽和胚根,
5、在合適條件下可發(fā)育稱為新的植株。再分化成胚狀體與再分化成根、芽的所處條件不同。 6.條件 ①離體狀態(tài)。②無菌、無毒環(huán)境。③適宜的溫度、PH、光照等。④特定的培養(yǎng)基:水、無機(jī)營養(yǎng)、有機(jī)營養(yǎng)、天然附加物、生長物質(zhì)。也可在培養(yǎng)基中添加抗生素或殺菌物質(zhì),來避免污染。 7. 地位:是培育轉(zhuǎn)基因植物、植物體細(xì)胞雜交培育植物新品種的最后一道工序。 專題二 細(xì)胞工程 第2課時(shí) 植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用 學(xué)習(xí)目標(biāo):1.列舉植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用 (一) .植物組織培養(yǎng)技術(shù) 8.應(yīng)用
6、 (1)微型繁殖 植物組織培養(yǎng)可以保持優(yōu)良品種的遺傳特性,可以高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖。 (2)作物脫毒 植物分生區(qū)附近,如莖尖、根尖、因很少被病毒感染,甚至無病毒。生產(chǎn)上常選用莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng),再生出的植株就有可能不帶病毒。 注意:產(chǎn)生的植株只是無病毒植株,而不具備抗病毒的特性。要獲得抗病毒特性,可采用基因工程的方法。 (3)制造人工種子 ①人工種子結(jié)構(gòu): a.人工種皮:所用材料應(yīng)有韌性、耐壓、對胚狀體無毒害,最常用海藻酸鈉制作,具有保護(hù)作用。 b.人工胚乳:一些營養(yǎng)物質(zhì),如無機(jī)鹽、碳水化合物和蛋白質(zhì)。 c.胚狀體。 ②優(yōu)點(diǎn):不受環(huán)境因素的制約,一年四季都可以進(jìn)行工
7、廠化生產(chǎn);繁殖速度快,可在短時(shí)間內(nèi)提供大量種苗;胚狀體是經(jīng)人工無性繁殖產(chǎn)生的,有利于保存該種系的優(yōu)良性狀。 (4)作物新品種的培育 ①單倍體育種。②誘變育種的材料。③轉(zhuǎn)基因植物的培育。 (二)植物細(xì)胞培養(yǎng) 1.概念:將植物組織培養(yǎng)過程中形成的愈傷組織或其它易分散的組織置于液體培養(yǎng)基中,進(jìn)行懸浮培養(yǎng),得到分散的懸浮細(xì)胞,再利用細(xì)胞群體產(chǎn)生人類所需的細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物。 2.原理:細(xì)胞增殖。 3.目的:不是使細(xì)胞形成組織乃至植物體,而是通過大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)以獲得人類所需的細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物。 4.應(yīng)用 ①藥用原料,如紫杉醇(抗腫瘤藥物),人參皂苷。②食品添加劑,如各種天然的香精、食用色
8、素、甜味劑。③保健食品,如螺旋藻。 專題二 細(xì)胞工程 第3課時(shí) 植物體細(xì)胞雜交技術(shù) 學(xué)習(xí)目標(biāo):1.簡述植物體細(xì)胞雜交技術(shù) (三)植物體細(xì)胞雜交 1.概念 將不同種的植物體細(xì)胞,在一定條件下融合成 雜種細(xì)胞,并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體。 2.目的:培育出種間或?qū)匍g雜種。 3.原理:細(xì)胞膜流動性和植物細(xì)胞全能性 4.過程: (1)原生質(zhì)體:指去除植物細(xì)胞壁后獲得的裸露的植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)等。其來源可以是各種植物的葉片、根尖等部位,也可以從愈傷組織中獲得。 (2)制備原生
9、質(zhì)體的方法是: 酶解法,所用的酶是 纖維素酶和果膠酶。 基本過程是先利用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁,然后利用低速離心或采用相對密度漂浮法對原生質(zhì)體進(jìn)行分離純化并鑒定其活性,再用于細(xì)胞培養(yǎng)或體細(xì)胞雜交。 (3)人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法有: 物理法(離心,振動,電刺激)和 化學(xué)法(聚乙二醇,英文縮寫PEG)。 (4)原生質(zhì)體融合完成的標(biāo)志是: 雜種細(xì)胞再生出細(xì)胞壁。在此過程中最活躍的細(xì)胞器是高爾基體或高爾基體和線粒體。 (5)融合細(xì)胞的類型有3種(只考慮兩兩融合的情況);染色體組數(shù)為 2M+2N ??捎?。 判斷植物是否可育:第一,要有同源染色體。第二,同源染色體要能進(jìn)行正常的聯(lián)會。如三
10、倍體無籽西瓜,體細(xì)胞中有同源染色體,但在減數(shù)分裂過程中,同源染色體聯(lián)會發(fā)生紊亂,不能形成正常的生殖細(xì)胞,因此不可育,無籽。 5.意義:克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙;擴(kuò)大了遺傳重組的范圍。 6.缺點(diǎn):雖然雜種植株含有兩種生物的全部遺傳物質(zhì),但不能完全具有兩種植株的全部性狀,不能完全按人們意愿培育出所需要的新品種。 7.實(shí)例:番茄——馬鈴薯;白菜—甘藍(lán)(特點(diǎn):生長期短、耐熱性強(qiáng)和易于貯藏)等。 專題二 細(xì)胞工程 第4課時(shí) 動物細(xì)胞培養(yǎng) 學(xué)習(xí)目標(biāo):1.動物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克?。ê喪?/p>
11、動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件及其應(yīng)用;) II.動物細(xì)胞工程 (一)動物細(xì)胞培養(yǎng) 1.概念:從動物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖。 2.原理:細(xì)胞增殖。 3.取材:大都取自動物胚胎或出生后不久的幼齡動物的器官或組織。一般,各種動物組織或細(xì)胞都可以體外培養(yǎng),但代謝旺盛、分化程度低的更容易培養(yǎng)。腫瘤細(xì)胞比正常細(xì)胞更容易培養(yǎng)。 4.過程: (1)用胰蛋白酶處理動物組織目的:使組織分散成單個(gè)細(xì)胞。 (2)不用胃蛋白酶的原因:培養(yǎng)液的PH為7.2~7.4,而胃蛋白酶的適宜PH為1.8左右,在此PH范圍內(nèi),胃蛋白酶會變性失活。 (
12、3)原代培養(yǎng):指從供體獲取組織或細(xì)胞后的初次培養(yǎng)。由于剛離體,細(xì)胞的生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化,最接近體內(nèi)組織或細(xì)胞,很適合用于藥物測試、基因表達(dá)等試驗(yàn)研究。 (4)細(xì)胞貼壁生長和接觸抑制:懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上,細(xì)胞數(shù)目不斷增多,當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會停止分裂增殖,稱為細(xì)胞的接觸抑制。 (5)傳代培養(yǎng):將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分離稀釋后轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。與原代培養(yǎng)的區(qū)別是是否分瓶,一旦分瓶就稱為傳代培養(yǎng)。多次分瓶后培養(yǎng)細(xì)胞仍叫傳代培養(yǎng)。 (6)細(xì)胞株:傳代培養(yǎng)10~50代的細(xì)胞稱為細(xì)胞株。原代培養(yǎng)的細(xì)胞不叫細(xì)胞株。 (7)細(xì)胞系:當(dāng)傳代培養(yǎng)50代后,一
13、些細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變,并且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn),有可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去,這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。在動物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),并不是每次培養(yǎng)都會使細(xì)胞稱為細(xì)胞系,只是有這種可能。 細(xì)胞株與細(xì)胞系最大區(qū)別是:細(xì)胞株的遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變,而細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變了。 5.條件 (1)無菌無毒的環(huán)境 ①培養(yǎng)液及器具滅菌處理。②培養(yǎng)液中通常加入一定量的抗生素(注意加入抗生素的種類及濃度)。③定期更換培養(yǎng)液,以便清除代謝產(chǎn)物,防止代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞毒害。 (2)營養(yǎng)物質(zhì) 葡萄糖、無機(jī)鹽、氨基酸、維生素、核酸、嘌呤、嘧啶、激素、生長因子、動物血清。 (3)適宜的溫度、PH和氣體環(huán)境 ①溫度
14、:37℃左右。②PH:7.2~7.4。③氣體主要由O2和CO2,O2是細(xì)胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的PH。 動物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),攪動培養(yǎng)液的原因:增加培養(yǎng)液中的溶解氧,使動物細(xì)胞與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸。 6.地位:是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。 7.應(yīng)用 生物制品的生產(chǎn)、轉(zhuǎn)基因動物的培養(yǎng)、檢測有毒物質(zhì)、醫(yī)學(xué)研究。 專題二 細(xì)胞工程 第5課時(shí) 細(xì)胞核移植和體細(xì)胞克隆 學(xué)習(xí)目標(biāo):1.簡述克隆動物的概念含義和基本原理; 2.簡述體細(xì)胞核移植技術(shù)和動物克隆技術(shù),以及應(yīng)用前景 (二)細(xì)胞核移植 1.概
15、念:將供體體細(xì)胞的細(xì)胞核與受體去核卵(母)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行人工組合,借助于卵(母)細(xì)胞的發(fā)育能力,經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)育成胚胎進(jìn)而形成個(gè)體的技術(shù)。 2.原理:動物細(xì)胞核的全能性 3.目的: (1)生殖性克隆,得到克隆動物。 (2)治療性克隆,克隆器官用于器官移植。 4.取材 (1)供體細(xì)胞 若取體細(xì)胞核,則為體細(xì)胞核移植;若取胚胎細(xì)胞核,則為胚胎細(xì)胞核移植。由于動物胚胎細(xì)胞分化程度低,恢復(fù)其全能性相對容易,而動物體細(xì)胞分化程度高,恢復(fù)其全能性較困難。 (2)卵(母)細(xì)胞 選取減數(shù)第二次分裂中期的卵(母)細(xì)胞,其細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)已成熟,能支持胚胎的全程發(fā)育。選取卵(母)細(xì)胞作為受體細(xì)胞的原
16、因:卵(母)細(xì)胞體積大、易操作,營養(yǎng)物質(zhì)多,含有能使細(xì)胞核的全能性表達(dá)的物質(zhì)。 5.過程 6.存在問題 成功率低,絕大多數(shù)克隆動物存在健康問題,對克隆動物食品的安全性問題也存在爭議 7.應(yīng)用 ①加速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)良畜種群繁育。②保護(hù)瀕危物種,增大存活數(shù)量。③生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白。④作為異種移植的供體。⑤用于組織器官的移植。 專題二 細(xì)胞工程 第6課時(shí) 細(xì)胞核移植和體細(xì)胞克隆 學(xué)習(xí)目標(biāo):1.細(xì)胞融合與單克隆抗體(簡述動物細(xì)胞融合的方法和過程
17、;簡述單克隆抗體的制備過程及其應(yīng)用;關(guān)注細(xì)胞工程研究的發(fā)展和應(yīng)用前景) (三)動物細(xì)胞融合 1.概念:是指兩個(gè)或多個(gè)動物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。 2.原理:細(xì)胞膜的流動性。 3.誘導(dǎo)融合方法: 物理法(離心、振動、電激)、化學(xué)法(聚乙二醇)、生物法(滅活的病毒)。 4.意義:突破了有性雜交方法的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。 5.應(yīng)用:制備單克隆抗體。 (1)概念:單一的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,經(jīng)培養(yǎng)篩選后產(chǎn)生的專一抗體。 (2)傳統(tǒng)方法獲得的抗體特點(diǎn):一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。從血清中分離出的抗體:產(chǎn)量低、純度低、特異性差。 (3)過程 ①制備單克
18、隆抗體為何用免疫過的B淋巴細(xì)胞? 免疫過的B淋巴細(xì)胞才能產(chǎn)生抗體(實(shí)際上應(yīng)為效應(yīng)B細(xì)胞)。 ②為何制備單克隆抗體用單個(gè)B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞? 一個(gè)B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種特異性抗體,而骨髓瘤細(xì)胞能在體外大量增殖。 ③細(xì)胞融合之后,若只考慮兩兩融合: 有5種細(xì)胞,3種融合細(xì)胞。 ④單克隆抗體制備過程的三次(兩次)篩選: 第一次:用選擇性培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞; 第二次:(有限稀釋法)篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞; 第三次:篩選出產(chǎn)量高的雜交瘤細(xì)胞(一般不說第三次篩選)。 ⑤雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):既能大量增殖,又能產(chǎn)生專一性(特異性)抗體。 原因是:雜交瘤細(xì)胞具有B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞兩種細(xì)胞的遺傳物質(zhì)。 (4)主要優(yōu)點(diǎn):特異性強(qiáng)、靈敏度高,并可大量制備。 (5)用途 ① 作為診斷試劑 準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異,并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合,具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。 ② 用于治療疾病和運(yùn)載藥物 可制成“生物導(dǎo)彈”,如把抗癌細(xì)胞的單克隆抗體跟放射性同位素、化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素相結(jié)合,制成“生物導(dǎo)彈”,注入體內(nèi),借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用,能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在位置,在原位殺死癌細(xì)胞。這樣既不損傷正常細(xì)胞,又減少了用藥劑量。 注意:單克隆抗體不等同于生物導(dǎo)彈,生物導(dǎo)彈=引導(dǎo)(單克隆抗體)+ 彈頭(藥物) 10
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