（浙江專版）2017-2018學(xué)年高中生物 第一章 實驗二 分離以尿素為氮源的微生物教學(xué)案 浙科版選修1

《（浙江專版）2017-2018學(xué)年高中生物 第一章 實驗二 分離以尿素為氮源的微生物教學(xué)案 浙科版選修1》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《（浙江專版）2017-2018學(xué)年高中生物 第一章 實驗二 分離以尿素為氮源的微生物教學(xué)案 浙科版選修1（11頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1、實驗二 分離以尿素為氮源的微生物 1.有一些細(xì)菌含有脲酶，它們可以通過降解尿素作為其生長的氮源。利用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基即可分離出此類微生物。 2．在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。 3．以尿素為氮源的微生物能分解尿素產(chǎn)生氨，氨為堿性，酚紅指示劑在堿性下為紅色，紅色區(qū)域大小代表脲酶活性強弱和含量的多少。 1．尿素 又稱脲，是蛋白質(zhì)降解的產(chǎn)物。在人和其他哺乳動物如家畜的尿中都含有尿素，大量尿素的存在會對環(huán)境造成污染。 2．以尿素為氮源的微生物的特點 含有脲酶，通過降解尿素作為其生長的氮源。其利用尿素

2、的反應(yīng)式為： (NH2)2C＝O＋H2O脲酶,2NH3＋CO2。 3．分離以尿素為氮源的微生物 (1)實驗原理： ①在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上生存的微生物能以尿素為氮源。 ②細(xì)菌合成的脲酶能將尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚紅指示劑變紅。 (2)培養(yǎng)基的對照：制備LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基和尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)土壤中的微生物，并對菌落觀察并計數(shù)。 (3)實驗步驟： 1．分離以尿素為氮源的微生物所采用的分離方法是(　　) A．涂布分離法　　　　 B．劃線分離法 C．稀釋分離法 D．選擇分離法 解析：選A　微生物的分離方法多種多樣，本實驗使

3、用了涂布分離法。 2．用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實際值相比(　　) A．比實際值高 B．比實際值低 C．和實際值一致 D．比實際值可能高也可能低 解析：選B　培養(yǎng)基上的一個菌落也可能由相連的兩個或多個菌體繁殖而來，并且該方法測得的是活菌的菌落數(shù)目，未包括死菌數(shù)，因此統(tǒng)計的活菌數(shù)要少于菌體實際值。 3．下列有關(guān)敘述，錯誤的是(　　) A．在尿素固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)含有脲酶的微生物會導(dǎo)致培養(yǎng)基呈酸性 B．地表土壤中含有一定量的脲 C．以尿素為氮源的細(xì)菌含有脲酶 D．脲是一種有機化合物，含有氮元素 解析：選A　根據(jù)反應(yīng)式：(NH2)2C＝O＋H2O2NH

4、3＋CO2，在尿素固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)含有脲酶的微生物會產(chǎn)生NH3，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基呈堿性。 4．用以尿素為唯一氮源加入酚紅指示劑的培養(yǎng)基，培養(yǎng)尿素分解菌后，指示劑將(　　) A．變藍(lán)色 B．變紅色 C．變黑色 D．變棕色 解析：選B　尿素分解菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，會使培養(yǎng)基的堿性增強，pH升高，加入酚紅指示劑將變紅色。 5．在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，生成物中除CO2外還有(　　) A．N2 B．NO C．NO D．NH3 解析：選D　以尿素為氮源的微生物中含有脲酶，它能降解尿素并產(chǎn)生NH3，為其生長提供氮源，其反應(yīng)如下：(NH2)2C===O＋H2O2NH3＋

5、CO2。 1．篩選菌株的原理 (1)原理：根據(jù)不同微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性不同而制備培養(yǎng)基。 (2)方法： ①在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。 ②改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。例如，缺乏氮源時可以分離固氮微生物；石油作為唯一碳源時，可以分離出能消除石油污染的微生物；用含無機碳源的培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物。 ③改變微生物的培養(yǎng)條件。例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物；用普通培養(yǎng)基在無氧條件下分離厭氧型和兼性厭氧型微生物。 [特別提醒]　能在選擇培養(yǎng)基上生長的不一定

6、是目的菌 原則上選擇培養(yǎng)基只能允許特定種類的微生物生長，但實際上，微生物的培養(yǎng)是一個非常復(fù)雜的問題，有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長繁殖，因此能在選擇培養(yǎng)基上生長的微生物不一定都是所需的微生物，還需進一步的鑒定。 2．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法 微生物生長量的測定有計數(shù)法、重量法、生理指標(biāo)法等方法，但是一般使用計數(shù)法，計數(shù)法可分為直接計數(shù)法和間接計數(shù)法。二者的比較如下表所示： 項目 直接計數(shù)法 間接計數(shù)法 原理 利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)

7、計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌 主要用具 顯微鏡、細(xì)菌計數(shù)板 培養(yǎng)基 計數(shù)數(shù)據(jù) 菌體本身 培養(yǎng)基上菌落數(shù) 優(yōu)點 計數(shù)方便、操作簡單 計數(shù)的是活菌 缺點 死菌、活菌都計算在內(nèi) 操作較復(fù)雜，有一定誤差 [題組沖關(guān)] 1．下列有關(guān)尿素培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是(　　) A．根據(jù)物理性質(zhì)劃分，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基 B．培養(yǎng)基中的唯一氮源為尿素，用以篩選以尿素為氮源的微生物 C．培養(yǎng)基中的酚紅，用以鑒別以尿素為氮源的微生物 D．培養(yǎng)基中加入G6玻璃漏斗過濾的尿素后，要用500 g/cm2壓力(90℃以上)滅菌30 min 解析：選D　因為尿素加

8、熱會分解，所以應(yīng)先將培養(yǎng)基經(jīng)500 g/cm2壓力滅菌30 min(為防止葡萄糖分解碳化)，再添加經(jīng)過G6玻璃漏斗過濾后的尿素。 2．下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，錯誤的是(　　) A．利用涂布分離法既能分離微生物也能對微生物進行計數(shù) B．接種時連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步分散獲得單個菌落 C．以尿素為唯一氮源且含酚紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌 D．選擇培養(yǎng)基作用的原理都是顯現(xiàn)某微生物的特征，以區(qū)別于其他微生物 解析：選D　涂布分離法能分離純化微生物也能對微生物進行計數(shù)；連續(xù)劃線是將聚集的菌種逐步分散，以獲得單個菌落；尿素分解菌的分離和鑒別可以選用以尿素為唯一氮源，且

9、含酚紅的培養(yǎng)基；選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某一化學(xué)物質(zhì)或改變某一理化性質(zhì)，使某一微生物正常生長，而其他微生物則被殺滅或生長受到抑制，從而選出所需要的微生物。 3．土壤中有些微生物能利用尿素是因為(　　) A．其體內(nèi)含有脲酶 B．其體內(nèi)含有氨(NH3)酶 C．它能將CO2合成為有機物 D．它們不需要氮源 解析：選A　能利用尿素的微生物就是因為體內(nèi)含有脲酶，可降解尿素為其生長繁殖提供氮源。 1．樣品稀釋的問題 (1)稀釋原因：樣品的稀釋程度直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。因此，恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ?/p>

10、統(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵。 (2)稀釋標(biāo)準(zhǔn)：選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，保證獲得菌落數(shù)在30～300之間，便于計數(shù)。 2．與涂布平板有關(guān)的問題 (1)防止培養(yǎng)基外濺：在倒平板的過程中，不能將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。 (2)涂布器的滅菌：玻璃刮刀用70%酒精消毒，取出時，多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少量酒精的玻璃刮刀在酒精燈火焰上引燃。 (3)設(shè)置對照：可排除實驗中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。 [題組沖關(guān)] 4．(2012·浙江高考)幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病

11、因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進行分離培養(yǎng)。實驗基本步驟如下： 配制培養(yǎng)基→滅菌、倒平板→X→培養(yǎng)→觀察 請回答： (1)在配制培養(yǎng)基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因為Hp含有________，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會出現(xiàn)________色環(huán)帶。 (2)下列對尿素溶液進行滅菌的最適方法是____滅菌。 A．高壓蒸汽　　　　　　　 B．紫外燈照射 C．70%酒精浸泡 D．過濾 (3)步驟X表示__________。在無菌條件下操作時，先將菌液稀釋，然后將菌液________到培養(yǎng)基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得__________菌落。 (4)在

12、培養(yǎng)時，需將培養(yǎng)皿倒置并放在____________中。若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致______________________。 (5)臨床上用14C呼氣實驗檢測人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標(biāo)記的__________分解為NH3和14CO2。 解析：(1)幽門螺桿菌中含有脲酶，能將尿素分解成為NH3和CO2，故尿素為氮源。NH3為堿性，能使酚紅呈紅色，故菌落周圍會出現(xiàn)紅色環(huán)帶。(2)尿素在高溫下分解，故不能用高溫滅菌法，只能采取過濾的方法。(3)由細(xì)菌和真菌培養(yǎng)操作步驟可知，X為接種。接種時，應(yīng)將菌種均勻涂布在培養(yǎng)基上。為了獲得單菌落，接種前應(yīng)該稀釋菌液。(4)為了形成單菌落還應(yīng)

13、該將培養(yǎng)皿倒置在恒溫箱中。(5)用14C標(biāo)記尿素，分解后標(biāo)記物全部在CO2中。 答案：(1)脲酶　紅　(2)D　(3)接種　涂布　單 (4)恒溫培養(yǎng)箱　無法形成單菌落　(5)尿素 [隨堂基礎(chǔ)鞏固] 1．篩選、鑒別尿素分解菌的培養(yǎng)基氮源為(　　) A．蛋白胨　　　　　　　　 B．尿素 C．酚紅 D．硝酸鹽 解析：選B　分離尿素分解菌的培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源。 2．要從多種細(xì)菌中分離某種細(xì)菌，培養(yǎng)基要用(　　) A．加入青霉素的培養(yǎng)基 B．固體培養(yǎng)基 C．液體培養(yǎng)基 D．加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基 解析：選B　將聚集的菌種逐步稀釋分散到固體培養(yǎng)基的表面，經(jīng)過培養(yǎng)

14、，可以分離到由一個細(xì)菌繁殖而來的肉眼可見的一定形態(tài)的菌落，即分離出某種細(xì)菌。 3．產(chǎn)生每個標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是(　　) A．一個細(xì)菌，液體培養(yǎng)基 B．許多細(xì)菌，液體培養(yǎng)基 C．一個細(xì)菌，固體培養(yǎng)基 D．許多細(xì)菌，固體培養(yǎng)基 解析：選C　在微生物的培養(yǎng)中產(chǎn)生每個標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目是一個細(xì)菌，使用的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。 4．平板冷凝后，要將平板倒置，其原因是(　　) A．接種時拿起來方便 B．防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染 C．正著放置容易破碎 D．方便在皿底上標(biāo)記日期等內(nèi)容 解析：選B　平板倒置主要是防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。

15、 5．用涂布分離法來統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)時，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)就能推測出樣品中的活菌數(shù)。原因是(　　) A．平板上的一個菌落就是一個細(xì)菌 B．菌落中的細(xì)菌數(shù)是固定的 C．此時的一個菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個活菌 D．此方法統(tǒng)計的菌落數(shù)一定與活菌的實際數(shù)相同 解析：選C　當(dāng)稀釋倍數(shù)適宜時，培養(yǎng)基上的一個菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個活菌，但也可能由兩個或兩個以上活菌生長而成，因此菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)低。 6．能產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)著色環(huán)帶的原因是(　　) A．外泌的脲酶將尿素水解成氨，氨為堿性，使酚紅變?yōu)榧t色 B．外泌的脲酶呈堿性使酚紅變?yōu)榧t色 C．外泌的脲

16、酶將酚紅分解成呈紅色的物質(zhì) D．酚紅與脲酶反應(yīng)后生成了呈紅色的物質(zhì) 解析：選A　能產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌將脲酶分泌到細(xì)菌外，隨后脲酶將培養(yǎng)基中的尿素水解成氨，氨為堿性，遇酚紅變紅色。 7．分離以尿素為氮源的微生物的土樣最好取自(　　) A．有大量植物生長的地方 B．臨水的地方 C．有哺乳動物排泄物的地方 D．干燥、空曠的地方 解析：選C　由于人和其他哺乳動物如家畜的尿中都含有尿素，因此含有哺乳動物排泄物的土壤中就可能存在以尿素為氮源的微生物。 [課時跟蹤檢測] 1．從土壤中分離以尿素為氮源的細(xì)菌，實驗過程如圖所示： (1)圖中物質(zhì)A為________________，若要統(tǒng)計

17、每克土壤樣品中以尿素為氮源的細(xì)菌的活菌數(shù)目，宜采用________________法接種到尿素培養(yǎng)基上，對照組配制的培養(yǎng)基為____________培養(yǎng)基，若用同濃度的土壤稀釋液接種，實驗組培養(yǎng)皿中菌落數(shù)____________(填“大于”“等于”或“小于”)對照組。在能利用尿素的細(xì)菌菌落周圍，有紅色環(huán)帶出現(xiàn)的原因是_______________________________________________。 (2)下列培養(yǎng)基中，能分離出分解尿素的細(xì)菌的是(　　) A．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚紅、瓊脂糖、水 B．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚紅、瓊脂糖、水、尿素 C．N

18、aCl、瓊脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物、尿素 D．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚紅、瓊脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物 (3)欲將分離得到的以尿素為氮源的細(xì)菌進行擴大培養(yǎng)，應(yīng)使用________培養(yǎng)基。 答案：(1)無菌水　涂布分離　LB全營養(yǎng)　小于　能利用尿素的細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶，將培養(yǎng)基中的尿素分解，產(chǎn)生的氨使指示劑呈紅色　(2)B　(3)LB液體 2．苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請回答下列問題： (1

19、)②中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入______作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基________(填“影響”或“不影響”)細(xì)菌的數(shù)量，如果要測定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用____________________法。 (2)④為對照，微生物在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于__________________________________；使用________________________________法可以在⑥上獲得單菌落。 (3)實驗過程中如何防止其他微生物的污染？___________________________________ _____________

20、_______________________________________________________________。 解析：根據(jù)微生物對營養(yǎng)的需求，在培養(yǎng)基中加入或不加某些物質(zhì)以達到促進目的菌生長，抑制或阻止其他雜菌生長的目的，然后再用涂布分離法、劃線分離法或其他方法篩選出單個目的菌落，再接種培養(yǎng)即可獲得純目的菌。在設(shè)計實驗中要注意單一變量原則和對照原則，操作中要嚴(yán)格進行無菌操作。 答案：(1)苯酚　影響　涂布分離　(2)④的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基加入了苯酚作為碳源　涂布分離法或劃線分離　(3)培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過程進行無菌操作 3．圖甲是從土

21、壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。請回答下列問題： (1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以__________為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加__________作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成________色。 (2)在5個細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液0.1 mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過程采取的接種方法是________________，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為________×108個；與血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)方法測得的細(xì)菌數(shù)較

22、________。 (3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為______________，突變基因表達的蛋白含________個氨基酸。 解析：(1)脲酶能夠催化尿素水解釋放出氨和二氧化碳，因此選擇培養(yǎng)基中應(yīng)以尿素為唯一氮源。挑取單菌落接種到加有酚紅指示劑的鑒別培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時間后，菌落周圍的氨增加，pH升高，酚紅指示劑將變紅色。(2)該過程采取的接種方法為涂布分離法。利用涂布分離法對細(xì)菌進行計數(shù)時，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30～300

23、的平板，因此平板上長出的細(xì)菌菌落平均數(shù)為(156＋178＋191)÷3＝175個。每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)為175÷0.1×105＝1.75×108個。血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)法會將死細(xì)胞計算在內(nèi)，而稀釋涂布平板計數(shù)法只能計數(shù)活細(xì)胞(只有活細(xì)胞才能在平板上生長)，故一般血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)法所得結(jié)果要比涂布分離法所得結(jié)果大。(3)箭頭處插入70個核苷酸，箭頭后密碼子的解讀方式為*AG，UGA，GAA……對比3種終止密碼可發(fā)現(xiàn)，此處的終止密碼為UGA。從起始密碼到終止密碼之前共有273＋72個堿基，因此突變基因表達的蛋白含115個氨基酸。 答案：(1)尿素　酚紅　紅　(2)涂布分離法　1.75　少　(3)U

24、GA　115 4．生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，某同學(xué)為探究土壤中微生物對尿素是否具有分解作用，設(shè)計了以下實驗，并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌(目的菌)。培養(yǎng)基成分如表所示，實驗步驟如圖所示。請分析回答問題： KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 葡萄糖 10 g 尿素 1 g 瓊脂糖 15 g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL (1)培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選________，因此這種培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。 (2)目的菌生長所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基

25、中的________，實驗過程中振蕩培養(yǎng)的主要目的是________________________________。 (3)轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上時，常采用________的方法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。 (4)下列材料或用具：①培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿，②玻璃棒、試管、三角瓶和移液管，③實驗操作者的雙手。其中需要滅菌的是________；需要消毒的是________。(填序號) (5)簡述土壤中可分解尿素的細(xì)菌的鑒定方法及原理： ________________________________________________________________________ ____

26、____________________________________________________________________。 解析：(1)加入尿素的培養(yǎng)基能夠篩選出降解尿素的細(xì)菌，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)目的菌生長所需的碳源和氮源來源于培養(yǎng)基中的含碳和含氮物質(zhì)，目的菌的生長過程需要氧，培養(yǎng)時補充氧氣常用振蕩方法。(3)在固體培養(yǎng)基上篩選細(xì)菌時，常用劃線分離法或涂布分離法進行接種。(4)實驗中培養(yǎng)基及器具需滅菌處理，操作者的雙手則需消毒處理。(5)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，細(xì)菌合成的脲酶催化尿素分解為氨，pH升高，使酚紅指示劑變紅，從而選擇出能降解尿素的細(xì)

27、菌。 答案：(1)目的菌(分解尿素的細(xì)菌)　選擇 (2)尿素、葡萄糖　為目的菌提供氧氣 (3)涂布分離　(4)①②　③ (5)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑；細(xì)菌合成的脲酶催化尿素分解為氨，pH升高，使酚紅指示劑變紅 5．(2016·浙江10月選考，32題節(jié)選)請回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細(xì)菌實驗的有關(guān)問題： (1)LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加________，滅菌備用。 (2)尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用____________滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因為G6玻璃砂漏斗________________

28、，故用于過濾除菌。然后將尿素溶液加入到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。 (3)取適量含產(chǎn)脲酶細(xì)菌的10－4,10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48 h，推測固體培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)量最少的是_____________ (A.10－5稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基B.10－5稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基　C．10－4稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基　D．10－4稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基)。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)________________，其原因是細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生________________所致。 解析：(1)本實驗中的LB培養(yǎng)基

29、是要與尿素培養(yǎng)基作對比的，所以要用瓊脂糖替換瓊脂。(2)尿素培養(yǎng)基的滅菌要分開進行，除尿素外的其他成分仍用高壓蒸汽滅菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗過濾除菌，再將除菌的尿素加到已滅菌的其他成分中。G6玻璃砂漏斗由于孔徑小，細(xì)菌不能濾過，可用于過濾除菌，但需要在使用前進行高壓蒸汽滅菌。(3)由于在土壤中產(chǎn)脲酶的細(xì)菌遠(yuǎn)少于普通細(xì)菌，所以在尿素培養(yǎng)基上的菌落數(shù)相對少得多，另外稀釋倍數(shù)高的土壤稀釋液中細(xì)菌數(shù)量更少，在培養(yǎng)基上菌落數(shù)也更少。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是因為脲酶催化尿素分解產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑在堿性下呈紅色。 答案：(1)瓊脂糖　(2)高壓蒸汽　孔徑小、細(xì)菌不能濾過　(3)A　紅色環(huán)帶　氨(或NH3) - 11 -