（浙江專版）2017-2018學(xué)年高中生物 第一章 實(shí)驗(yàn)二 分離以尿素為氮源的微生物教學(xué)案 浙科版選修1

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1、實(shí)驗(yàn)二 分離以尿素為氮源的微生物 1.有一些細(xì)菌含有脲酶，它們可以通過降解尿素作為其生長的氮源。利用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基即可分離出此類微生物。 2．在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。 3．以尿素為氮源的微生物能分解尿素產(chǎn)生氨，氨為堿性，酚紅指示劑在堿性下為紅色，紅色區(qū)域大小代表脲酶活性強(qiáng)弱和含量的多少。 1．尿素 又稱脲，是蛋白質(zhì)降解的產(chǎn)物。在人和其他哺乳動(dòng)物如家畜的尿中都含有尿素，大量尿素的存在會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染。 2．以尿素為氮源的微生物的特點(diǎn) 含有脲酶，通過降解尿素作為其生長的氮源。其利用尿素

2、的反應(yīng)式為： (NH2)2C＝O＋H2O脲酶,2NH3＋CO2。 3．分離以尿素為氮源的微生物 (1)實(shí)驗(yàn)原理： ①在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上生存的微生物能以尿素為氮源。 ②細(xì)菌合成的脲酶能將尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚紅指示劑變紅。 (2)培養(yǎng)基的對(duì)照：制備LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基和尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)土壤中的微生物，并對(duì)菌落觀察并計(jì)數(shù)。 (3)實(shí)驗(yàn)步驟： 1．分離以尿素為氮源的微生物所采用的分離方法是(　　) A．涂布分離法　　　　 B．劃線分離法 C．稀釋分離法 D．選擇分離法 解析：選A　微生物的分離方法多種多樣，本實(shí)驗(yàn)使

3、用了涂布分離法。 2．用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實(shí)際值相比(　　) A．比實(shí)際值高 B．比實(shí)際值低 C．和實(shí)際值一致 D．比實(shí)際值可能高也可能低 解析：選B　培養(yǎng)基上的一個(gè)菌落也可能由相連的兩個(gè)或多個(gè)菌體繁殖而來，并且該方法測(cè)得的是活菌的菌落數(shù)目，未包括死菌數(shù)，因此統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)要少于菌體實(shí)際值。 3．下列有關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．在尿素固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)含有脲酶的微生物會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基呈酸性 B．地表土壤中含有一定量的脲 C．以尿素為氮源的細(xì)菌含有脲酶 D．脲是一種有機(jī)化合物，含有氮元素 解析：選A　根據(jù)反應(yīng)式：(NH2)2C＝O＋H2O2NH

4、3＋CO2，在尿素固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)含有脲酶的微生物會(huì)產(chǎn)生NH3，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基呈堿性。 4．用以尿素為唯一氮源加入酚紅指示劑的培養(yǎng)基，培養(yǎng)尿素分解菌后，指示劑將(　　) A．變藍(lán)色 B．變紅色 C．變黑色 D．變棕色 解析：選B　尿素分解菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，加入酚紅指示劑將變紅色。 5．在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，生成物中除CO2外還有(　　) A．N2 B．NO C．NO D．NH3 解析：選D　以尿素為氮源的微生物中含有脲酶，它能降解尿素并產(chǎn)生NH3，為其生長提供氮源，其反應(yīng)如下：(NH2)2C===O＋H2O2NH3＋

5、CO2。 1．篩選菌株的原理 (1)原理：根據(jù)不同微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性不同而制備培養(yǎng)基。 (2)方法： ①在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。 ②改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。例如，缺乏氮源時(shí)可以分離固氮微生物；石油作為唯一碳源時(shí)，可以分離出能消除石油污染的微生物；用含無機(jī)碳源的培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物。 ③改變微生物的培養(yǎng)條件。例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物；用普通培養(yǎng)基在無氧條件下分離厭氧型和兼性厭氧型微生物。 [特別提醒]　能在選擇培養(yǎng)基上生長的不一定

6、是目的菌 原則上選擇培養(yǎng)基只能允許特定種類的微生物生長，但實(shí)際上，微生物的培養(yǎng)是一個(gè)非常復(fù)雜的問題，有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長繁殖，因此能在選擇培養(yǎng)基上生長的微生物不一定都是所需的微生物，還需進(jìn)一步的鑒定。 2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法 微生物生長量的測(cè)定有計(jì)數(shù)法、重量法、生理指標(biāo)法等方法，但是一般使用計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)法可分為直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。二者的比較如下表所示： 項(xiàng)目 直接計(jì)數(shù)法 間接計(jì)數(shù)法 原理 利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)

7、計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌 主要用具 顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板 培養(yǎng)基 計(jì)數(shù)數(shù)據(jù) 菌體本身 培養(yǎng)基上菌落數(shù) 優(yōu)點(diǎn) 計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單 計(jì)數(shù)的是活菌 缺點(diǎn) 死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi) 操作較復(fù)雜，有一定誤差 [題組沖關(guān)] 1．下列有關(guān)尿素培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．根據(jù)物理性質(zhì)劃分，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基 B．培養(yǎng)基中的唯一氮源為尿素，用以篩選以尿素為氮源的微生物 C．培養(yǎng)基中的酚紅，用以鑒別以尿素為氮源的微生物 D．培養(yǎng)基中加入G6玻璃漏斗過濾的尿素后，要用500 g/cm2壓力(90℃以上)滅菌30 min 解析：選D　因?yàn)槟蛩丶?/p>

8、熱會(huì)分解，所以應(yīng)先將培養(yǎng)基經(jīng)500 g/cm2壓力滅菌30 min(為防止葡萄糖分解碳化)，再添加經(jīng)過G6玻璃漏斗過濾后的尿素。 2．下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．利用涂布分離法既能分離微生物也能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù) B．接種時(shí)連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步分散獲得單個(gè)菌落 C．以尿素為唯一氮源且含酚紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌 D．選擇培養(yǎng)基作用的原理都是顯現(xiàn)某微生物的特征，以區(qū)別于其他微生物 解析：選D　涂布分離法能分離純化微生物也能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)；連續(xù)劃線是將聚集的菌種逐步分散，以獲得單個(gè)菌落；尿素分解菌的分離和鑒別可以選用以尿素為唯一氮源，且

9、含酚紅的培養(yǎng)基；選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某一化學(xué)物質(zhì)或改變某一理化性質(zhì)，使某一微生物正常生長，而其他微生物則被殺滅或生長受到抑制，從而選出所需要的微生物。 3．土壤中有些微生物能利用尿素是因?yàn)?　　) A．其體內(nèi)含有脲酶 B．其體內(nèi)含有氨(NH3)酶 C．它能將CO2合成為有機(jī)物 D．它們不需要氮源 解析：選A　能利用尿素的微生物就是因?yàn)轶w內(nèi)含有脲酶，可降解尿素為其生長繁殖提供氮源。 1．樣品稀釋的問題 (1)稀釋原因：樣品的稀釋程度直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。因此，恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ?/p>

10、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。 (2)稀釋標(biāo)準(zhǔn)：選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，保證獲得菌落數(shù)在30～300之間，便于計(jì)數(shù)。 2．與涂布平板有關(guān)的問題 (1)防止培養(yǎng)基外濺：在倒平板的過程中，不能將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。 (2)涂布器的滅菌：玻璃刮刀用70%酒精消毒，取出時(shí)，多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少量酒精的玻璃刮刀在酒精燈火焰上引燃。 (3)設(shè)置對(duì)照：可排除實(shí)驗(yàn)中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。 [題組沖關(guān)] 4．(2012·浙江高考)幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病

11、因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下： 配制培養(yǎng)基→滅菌、倒平板→X→培養(yǎng)→觀察 請(qǐng)回答： (1)在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有________，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會(huì)出現(xiàn)________色環(huán)帶。 (2)下列對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌的最適方法是____滅菌。 A．高壓蒸汽　　　　　　　 B．紫外燈照射 C．70%酒精浸泡 D．過濾 (3)步驟X表示__________。在無菌條件下操作時(shí)，先將菌液稀釋，然后將菌液________到培養(yǎng)基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得__________菌落。 (4)在

12、培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置并放在____________中。若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致______________________。 (5)臨床上用14C呼氣實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標(biāo)記的__________分解為NH3和14CO2。 解析：(1)幽門螺桿菌中含有脲酶，能將尿素分解成為NH3和CO2，故尿素為氮源。NH3為堿性，能使酚紅呈紅色，故菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶。(2)尿素在高溫下分解，故不能用高溫滅菌法，只能采取過濾的方法。(3)由細(xì)菌和真菌培養(yǎng)操作步驟可知，X為接種。接種時(shí)，應(yīng)將菌種均勻涂布在培養(yǎng)基上。為了獲得單菌落，接種前應(yīng)該稀釋菌液。(4)為了形成單菌落還應(yīng)

13、該將培養(yǎng)皿倒置在恒溫箱中。(5)用14C標(biāo)記尿素，分解后標(biāo)記物全部在CO2中。 答案：(1)脲酶　紅　(2)D　(3)接種　涂布　單 (4)恒溫培養(yǎng)箱　無法形成單菌落　(5)尿素 [隨堂基礎(chǔ)鞏固] 1．篩選、鑒別尿素分解菌的培養(yǎng)基氮源為(　　) A．蛋白胨　　　　　　　　 B．尿素 C．酚紅 D．硝酸鹽 解析：選B　分離尿素分解菌的培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源。 2．要從多種細(xì)菌中分離某種細(xì)菌，培養(yǎng)基要用(　　) A．加入青霉素的培養(yǎng)基 B．固體培養(yǎng)基 C．液體培養(yǎng)基 D．加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基 解析：選B　將聚集的菌種逐步稀釋分散到固體培養(yǎng)基的表面，經(jīng)過培養(yǎng)

14、，可以分離到由一個(gè)細(xì)菌繁殖而來的肉眼可見的一定形態(tài)的菌落，即分離出某種細(xì)菌。 3．產(chǎn)生每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是(　　) A．一個(gè)細(xì)菌，液體培養(yǎng)基 B．許多細(xì)菌，液體培養(yǎng)基 C．一個(gè)細(xì)菌，固體培養(yǎng)基 D．許多細(xì)菌，固體培養(yǎng)基 解析：選C　在微生物的培養(yǎng)中產(chǎn)生每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目是一個(gè)細(xì)菌，使用的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。 4．平板冷凝后，要將平板倒置，其原因是(　　) A．接種時(shí)拿起來方便 B．防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染 C．正著放置容易破碎 D．方便在皿底上標(biāo)記日期等內(nèi)容 解析：選B　平板倒置主要是防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。

15、 5．用涂布分離法來統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí)，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測(cè)出樣品中的活菌數(shù)。原因是(　　) A．平板上的一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌 B．菌落中的細(xì)菌數(shù)是固定的 C．此時(shí)的一個(gè)菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌 D．此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)一定與活菌的實(shí)際數(shù)相同 解析：選C　當(dāng)稀釋倍數(shù)適宜時(shí)，培養(yǎng)基上的一個(gè)菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，但也可能由兩個(gè)或兩個(gè)以上活菌生長而成，因此菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)低。 6．能產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)著色環(huán)帶的原因是(　　) A．外泌的脲酶將尿素水解成氨，氨為堿性，使酚紅變?yōu)榧t色 B．外泌的脲酶呈堿性使酚紅變?yōu)榧t色 C．外泌的脲

16、酶將酚紅分解成呈紅色的物質(zhì) D．酚紅與脲酶反應(yīng)后生成了呈紅色的物質(zhì) 解析：選A　能產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌將脲酶分泌到細(xì)菌外，隨后脲酶將培養(yǎng)基中的尿素水解成氨，氨為堿性，遇酚紅變紅色。 7．分離以尿素為氮源的微生物的土樣最好取自(　　) A．有大量植物生長的地方 B．臨水的地方 C．有哺乳動(dòng)物排泄物的地方 D．干燥、空曠的地方 解析：選C　由于人和其他哺乳動(dòng)物如家畜的尿中都含有尿素，因此含有哺乳動(dòng)物排泄物的土壤中就可能存在以尿素為氮源的微生物。 [課時(shí)跟蹤檢測(cè)] 1．從土壤中分離以尿素為氮源的細(xì)菌，實(shí)驗(yàn)過程如圖所示： (1)圖中物質(zhì)A為________________，若要統(tǒng)計(jì)

17、每克土壤樣品中以尿素為氮源的細(xì)菌的活菌數(shù)目，宜采用________________法接種到尿素培養(yǎng)基上，對(duì)照組配制的培養(yǎng)基為____________培養(yǎng)基，若用同濃度的土壤稀釋液接種，實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)皿中菌落數(shù)____________(填“大于”“等于”或“小于”)對(duì)照組。在能利用尿素的細(xì)菌菌落周圍，有紅色環(huán)帶出現(xiàn)的原因是_______________________________________________。 (2)下列培養(yǎng)基中，能分離出分解尿素的細(xì)菌的是(　　) A．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚紅、瓊脂糖、水 B．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚紅、瓊脂糖、水、尿素 C．N

18、aCl、瓊脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物、尿素 D．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚紅、瓊脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物 (3)欲將分離得到的以尿素為氮源的細(xì)菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，應(yīng)使用________培養(yǎng)基。 答案：(1)無菌水　涂布分離　LB全營養(yǎng)　小于　能利用尿素的細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶，將培養(yǎng)基中的尿素分解，產(chǎn)生的氨使指示劑呈紅色　(2)B　(3)LB液體 2．苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請(qǐng)回答下列問題： (1

19、)②中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入______作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基________(填“影響”或“不影響”)細(xì)菌的數(shù)量，如果要測(cè)定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用____________________法。 (2)④為對(duì)照，微生物在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于__________________________________；使用________________________________法可以在⑥上獲得單菌落。 (3)實(shí)驗(yàn)過程中如何防止其他微生物的污染？___________________________________ _____________

20、_______________________________________________________________。 解析：根據(jù)微生物對(duì)營養(yǎng)的需求，在培養(yǎng)基中加入或不加某些物質(zhì)以達(dá)到促進(jìn)目的菌生長，抑制或阻止其他雜菌生長的目的，然后再用涂布分離法、劃線分離法或其他方法篩選出單個(gè)目的菌落，再接種培養(yǎng)即可獲得純目的菌。在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)中要注意單一變量原則和對(duì)照原則，操作中要嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作。 答案：(1)苯酚　影響　涂布分離　(2)④的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基加入了苯酚作為碳源　涂布分離法或劃線分離　(3)培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過程進(jìn)行無菌操作 3．圖甲是從土

21、壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。請(qǐng)回答下列問題： (1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以__________為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加__________作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長一段時(shí)間后，其菌落周圍的指示劑將變成________色。 (2)在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液0.1 mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過程采取的接種方法是________________，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為________×108個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較

22、________。 (3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個(gè)核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為______________，突變基因表達(dá)的蛋白含________個(gè)氨基酸。 解析：(1)脲酶能夠催化尿素水解釋放出氨和二氧化碳，因此選擇培養(yǎng)基中應(yīng)以尿素為唯一氮源。挑取單菌落接種到加有酚紅指示劑的鑒別培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，菌落周圍的氨增加，pH升高，酚紅指示劑將變紅色。(2)該過程采取的接種方法為涂布分離法。利用涂布分離法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30～300

23、的平板，因此平板上長出的細(xì)菌菌落平均數(shù)為(156＋178＋191)÷3＝175個(gè)。每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)為175÷0.1×105＝1.75×108個(gè)。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法會(huì)將死細(xì)胞計(jì)算在內(nèi)，而稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法只能計(jì)數(shù)活細(xì)胞(只有活細(xì)胞才能在平板上生長)，故一般血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法所得結(jié)果要比涂布分離法所得結(jié)果大。(3)箭頭處插入70個(gè)核苷酸，箭頭后密碼子的解讀方式為*AG，UGA，GAA……對(duì)比3種終止密碼可發(fā)現(xiàn)，此處的終止密碼為UGA。從起始密碼到終止密碼之前共有273＋72個(gè)堿基，因此突變基因表達(dá)的蛋白含115個(gè)氨基酸。 答案：(1)尿素　酚紅　紅　(2)涂布分離法　1.75　少　(3)U

24、GA　115 4．生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，某同學(xué)為探究土壤中微生物對(duì)尿素是否具有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌(目的菌)。培養(yǎng)基成分如表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問題： KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 葡萄糖 10 g 尿素 1 g 瓊脂糖 15 g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL (1)培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選________，因此這種培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。 (2)目的菌生長所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基

25、中的________，實(shí)驗(yàn)過程中振蕩培養(yǎng)的主要目的是________________________________。 (3)轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上時(shí)，常采用________的方法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。 (4)下列材料或用具：①培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿，②玻璃棒、試管、三角瓶和移液管，③實(shí)驗(yàn)操作者的雙手。其中需要滅菌的是________；需要消毒的是________。(填序號(hào)) (5)簡(jiǎn)述土壤中可分解尿素的細(xì)菌的鑒定方法及原理： ________________________________________________________________________ ____

26、____________________________________________________________________。 解析：(1)加入尿素的培養(yǎng)基能夠篩選出降解尿素的細(xì)菌，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)目的菌生長所需的碳源和氮源來源于培養(yǎng)基中的含碳和含氮物質(zhì)，目的菌的生長過程需要氧，培養(yǎng)時(shí)補(bǔ)充氧氣常用振蕩方法。(3)在固體培養(yǎng)基上篩選細(xì)菌時(shí)，常用劃線分離法或涂布分離法進(jìn)行接種。(4)實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)基及器具需滅菌處理，操作者的雙手則需消毒處理。(5)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，細(xì)菌合成的脲酶催化尿素分解為氨，pH升高，使酚紅指示劑變紅，從而選擇出能降解尿素的細(xì)

27、菌。 答案：(1)目的菌(分解尿素的細(xì)菌)　選擇 (2)尿素、葡萄糖　為目的菌提供氧氣 (3)涂布分離　(4)①②?、? (5)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑；細(xì)菌合成的脲酶催化尿素分解為氨，pH升高，使酚紅指示劑變紅 5．(2016·浙江10月選考，32題節(jié)選)請(qǐng)回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細(xì)菌實(shí)驗(yàn)的有關(guān)問題： (1)LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加________，滅菌備用。 (2)尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用____________滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因?yàn)镚6玻璃砂漏斗________________

28、，故用于過濾除菌。然后將尿素溶液加入到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。 (3)取適量含產(chǎn)脲酶細(xì)菌的10－4,10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48 h，推測(cè)固體培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)量最少的是_____________ (A.10－5稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基B.10－5稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基　C．10－4稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基　D．10－4稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基)。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)________________，其原因是細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生________________所致。 解析：(1)本實(shí)驗(yàn)中的LB培養(yǎng)基

29、是要與尿素培養(yǎng)基作對(duì)比的，所以要用瓊脂糖替換瓊脂。(2)尿素培養(yǎng)基的滅菌要分開進(jìn)行，除尿素外的其他成分仍用高壓蒸汽滅菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗過濾除菌，再將除菌的尿素加到已滅菌的其他成分中。G6玻璃砂漏斗由于孔徑小，細(xì)菌不能濾過，可用于過濾除菌，但需要在使用前進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。(3)由于在土壤中產(chǎn)脲酶的細(xì)菌遠(yuǎn)少于普通細(xì)菌，所以在尿素培養(yǎng)基上的菌落數(shù)相對(duì)少得多，另外稀釋倍數(shù)高的土壤稀釋液中細(xì)菌數(shù)量更少，在培養(yǎng)基上菌落數(shù)也更少。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是因?yàn)殡迕复呋蛩胤纸猱a(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑在堿性下呈紅色。 答案：(1)瓊脂糖　(2)高壓蒸汽　孔徑小、細(xì)菌不能濾過　(3)A　紅色環(huán)帶　氨(或NH3) - 11 -