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1、1.1 DNA重組技術(shù)的基本工具,DNA重組技術(shù)的基本工具,準確切割DNA的工具（“分子手術(shù)刀”） DNA片段的連接工具（“分子縫合針”） 基因轉(zhuǎn)移工具（“分子運輸車”）,基因的大小以納米計算，要對它進行剪切、拼接等操作，沒有非常精細的工具是不行的。進行基因操作最少需要以下三種工具：,思考,在自然界中有一些生物的DNA可能進入另一種生物的細胞中。我們有沒有學過相關(guān)的實例？ 現(xiàn)今存在的生物為什么沒有在長期的進化過程中被外源DNA的入侵而滅絕，仍能保持一種穩(wěn)定狀態(tài)？ 怎樣才能使外來的DNA失效從而保護自身？,識別雙鏈DNA 分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸
2、二酯鍵斷開。,主要是從原核生物中分離純化出來的一種酶。能將外來的DNA切斷，由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進行的，故名限制性核酸內(nèi)切酶。,4000種。,形成兩種末端,一、 “分子手術(shù)刀” 限制性核酸內(nèi)切酶,限制酶切割DNA后形成的末端黏性末端、平末端是如何形成的？,科目一考試網(wǎng) 科目一模擬考試2016,金手指駕校網(wǎng) 金手指駕駛員考試2016,,重播,什么叫黏性末端？,當限制酶從識別序列的中心軸線兩側(cè)切開時，被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個伸出的核苷酸，他們之間正好互補配對，這樣的切口叫黏性末端。,,,,什么叫平末端？,當限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，切開的DNA兩條單鏈的
3、切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。,基因的針線DNA連接酶,切斷的DNA片段要與受體細胞的DNA連接，你覺得可以用什么酶？,DNA聚合酶和DNA連接酶有何相同點和不同點？,限制酶切割后有兩種不同的結(jié)果，一種產(chǎn)生黏性末端，一種產(chǎn)生平末端。那么恢復它們的連接時，所用DNA連接酶是否可以不加選擇？,E.coliDNA連接酶：連接黏性末端,T4DNA連接酶：連接黏性末端和平末端,基因進入受體細胞的載體,要讓一個從甲生物細胞內(nèi)取出來的基因在乙生物體內(nèi)進行表達，首先得將這個基因送到乙生物的細胞內(nèi)去！能將外源基因送入細胞的工具就是載體。,基因進入受體細胞的載體,假如目的基因?qū)胧荏w細胞后不能復制將怎樣？
4、作為載體沒有切割位點將怎樣？ 目的基因是否進入受體細胞，你如何察覺？ 如果載體對受體細胞有害將怎樣？,作為載體的必要條件,能自我復制 有切割位點 能與目的基因結(jié)合 能進入受體生物細胞并在受體生物細胞內(nèi)復制并表達； 有遺傳標記基因 對受體細胞無害 比較容易得到,,3、基因的運輸工具運載體,,能復制并帶著插入的目的基因一起復制,,有切割位點,,有標記基因的存在，將來可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。,練習,在基因工程中，切割運載體和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同種限制酶 B. 兩種限制酶 同種連接酶 D. 兩種連接酶,,不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是 A、能復制 （ ） B、有多個限制酶切點 C、具有標記基因 D、它是環(huán)狀DNA,D,練習,3) 基因工程是在DNA分子水平上進行設(shè)計施工的。在基因操作的基本步驟中，不進行堿基互補配對的步驟是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因與運載體結(jié)合 C、將目的基因?qū)胧荏w細胞 D、目的基因的檢測和表達,C,練習,大腸桿菌的一種限制酶（EcoR)能識別GAATTC序列，并在G和A之間切開形成黏性末端。 Sma能識別CCCGGG序列，并在C和G之間切割形成平末端 。,,T,磷酸二酯鍵,,A,,
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