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1、1.1 DNA重組技術(shù)的基本工具,DNA重組技術(shù)的基本工具,準(zhǔn)確切割DNA的工具（“分子手術(shù)刀”） DNA片段的連接工具（“分子縫合針”） 基因轉(zhuǎn)移工具（“分子運(yùn)輸車”）,基因的大小以納米計(jì)算，要對(duì)它進(jìn)行剪切、拼接等操作，沒有非常精細(xì)的工具是不行的。進(jìn)行基因操作最少需要以下三種工具：,思考,在自然界中有一些生物的DNA可能進(jìn)入另一種生物的細(xì)胞中。我們有沒有學(xué)過相關(guān)的實(shí)例？ 現(xiàn)今存在的生物為什么沒有在長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中被外源DNA的入侵而滅絕，仍能保持一種穩(wěn)定狀態(tài)？ 怎樣才能使外來的DNA失效從而保護(hù)自身？,識(shí)別雙鏈DNA 分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸
2、二酯鍵斷開。,主要是從原核生物中分離純化出來的一種酶。能將外來的DNA切斷，由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進(jìn)行的，故名限制性核酸內(nèi)切酶。,4000種。,形成兩種末端,一、 “分子手術(shù)刀” 限制性核酸內(nèi)切酶,限制酶切割DNA后形成的末端黏性末端、平末端是如何形成的？,科目一考試網(wǎng) 科目一模擬考試2016,金手指駕校網(wǎng) 金手指駕駛員考試2016,,重播,什么叫黏性末端？,當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)切開時(shí)，被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，他們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。,,,,什么叫平末端？,當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線處切開時(shí)，切開的DNA兩條單鏈的
3、切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。,基因的針線DNA連接酶,切斷的DNA片段要與受體細(xì)胞的DNA連接，你覺得可以用什么酶？,DNA聚合酶和DNA連接酶有何相同點(diǎn)和不同點(diǎn)？,限制酶切割后有兩種不同的結(jié)果，一種產(chǎn)生黏性末端，一種產(chǎn)生平末端。那么恢復(fù)它們的連接時(shí)，所用DNA連接酶是否可以不加選擇？,E.coliDNA連接酶：連接黏性末端,T4DNA連接酶：連接黏性末端和平末端,基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體,要讓一個(gè)從甲生物細(xì)胞內(nèi)取出來的基因在乙生物體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，首先得將這個(gè)基因送到乙生物的細(xì)胞內(nèi)去！能將外源基因送入細(xì)胞的工具就是載體。,基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體,假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制將怎樣？
4、作為載體沒有切割位點(diǎn)將怎樣？ 目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞，你如何察覺？ 如果載體對(duì)受體細(xì)胞有害將怎樣？,作為載體的必要條件,能自我復(fù)制 有切割位點(diǎn) 能與目的基因結(jié)合 能進(jìn)入受體生物細(xì)胞并在受體生物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并表達(dá)； 有遺傳標(biāo)記基因 對(duì)受體細(xì)胞無害 比較容易得到,,3、基因的運(yùn)輸工具運(yùn)載體,,能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制,,有切割位點(diǎn),,有標(biāo)記基因的存在，將來可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。,練習(xí),在基因工程中，切割運(yùn)載體和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同種限制酶 B. 兩種限制酶 同種連接酶 D. 兩種連接酶,,不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是 A、能復(fù)制 （ ） B、有多個(gè)限制酶切點(diǎn) C、具有標(biāo)記基因 D、它是環(huán)狀DNA,D,練習(xí),3) 基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合 C、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 D、目的基因的檢測(cè)和表達(dá),C,練習(xí),大腸桿菌的一種限制酶（EcoR)能識(shí)別GAATTC序列，并在G和A之間切開形成黏性末端。 Sma能識(shí)別CCCGGG序列，并在C和G之間切割形成平末端 。,,T,磷酸二酯鍵,,A,,
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