（全國）2018版高考生物大一輪復習 第十三單元 生物技術(shù)實踐 第47講 微生物的培養(yǎng)與應用學案

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1、 第47講　微生物的培養(yǎng)與應用 　1.微生物的分離和培養(yǎng)　2.某種微生物數(shù)量的測定　3.培養(yǎng)基對微生物的選擇作用　4.利用微生物發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應用 　培養(yǎng)基及微生物的純化培養(yǎng)技術(shù) 1．培養(yǎng)基 (1)概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。 (2)營養(yǎng)組成：一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。此外，還需要滿足微生物生長對pH、氧氣以及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求。 (3)分類 2．無菌技術(shù)的主要方法及適用對象[連一連] 3．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 (1)計算 (2)稱量 (3)溶化 (4)滅菌 (5)倒平板

2、 4．純化大腸桿菌 (1)原理：在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是純化的細菌菌落。 (2)主要方法：圖甲可表示用平板劃線法接種獲得的平板；圖乙可表示用稀釋涂布平板法接種獲得的平板。 (3)純化原理：圖甲菌體的分散是通過一系列的連續(xù)劃線操作實現(xiàn)的；圖乙菌體的分散是通過圖丙梯度稀釋和圖丁涂布平板操作實現(xiàn)的。 5．菌種的保存方法 (1)對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。 (2)對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。 1．培養(yǎng)基的配制原則 (1)目的要明確：配制時應根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種

3、類。 (2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。 (3)pH要適宜：細菌為6.5～7.5，放線菌為7.5～8.5，真菌為5.0～6.0，培養(yǎng)不同微生物所需pH不同。 2.消毒和滅菌的辨析 項目 條件 結(jié)果 常用方法 應用范圍 消毒 較為溫 和的物 理或化 學方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對人體有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高溫 的液體 化學藥劑 消毒法 用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源 滅菌 強烈的 理化因 素 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼燒滅菌法 接種工具 干熱滅菌法 玻璃器皿、 金

4、屬工具 高壓蒸汽 滅菌法 培養(yǎng)基及容 器的滅菌 3.兩種純化細菌方法的比較 項目 優(yōu)點 缺點 適用范圍 平板劃 線法 可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離 不能計數(shù) 適用于 好氧菌 稀釋涂 布平板法 可以計數(shù)，可以觀察菌落特征 操作復雜、 需要涂布 多個平板 適用于厭氧菌 和兼性厭氧菌 (1)認清不同生物需要的營養(yǎng)物質(zhì)不同 ①微生物需要的營養(yǎng)成分有水、無機鹽、碳源、氮源，有些微生物還需要特殊營養(yǎng)物質(zhì)，如生長因子。 ②在人和動物中，營養(yǎng)物質(zhì)包括水、無機鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。 ③在植物中，營養(yǎng)物質(zhì)包括礦質(zhì)元素、水、二氧化碳三類。

5、 (2)平板劃線操作的注意事項 ①操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要對接種環(huán)進行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的不同： a．第一次操作目的是殺死接種環(huán)上原有的微生物。 b．每次劃線之間操作目的是殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少。 c．劃線結(jié)束操作目的是殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。 ②灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。 ③第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁

6、殖而來的菌落。 ④劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。 ⑤劃線用力大小要適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。 1．如圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請回答相關問題： (1)圖甲是利用________法進行微生物接種，圖乙是利用________法進行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是________和________；對這兩種接種工具進行滅菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。 (2)接種操作為什么一定要在酒精燈火焰附近進行？ ____________________________________________________________________

7、____ ________________________________。 (3)接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細菌時為什么進行倒置培養(yǎng)？________________________________。 (4)如圖是采用上述接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是________(填“圖甲”或“圖乙”)。 解析：圖甲和圖乙分別是平板劃線法和稀釋涂布平板法，這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器。由于在酒精燈火焰附近存在著無菌區(qū)域，因此接種常在火焰附近進行。在微生物培養(yǎng)過程中會產(chǎn)生水，對微生物的生長造成影響，故需要倒置培養(yǎng)。 答案：(1)平板劃線　稀釋涂布平板　接種環(huán)　涂布

8、器　灼燒滅菌 (2)火焰附近存在著無菌區(qū)域 (3)避免培養(yǎng)過程產(chǎn)生的水分影響微生物的生長 (4)圖乙 2．(2016·高考全國卷丙，39)某同學用新鮮的泡菜濾液為實驗材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉栴}： (1)分離純化乳酸菌時，首先需要用__________________對泡菜濾液進行梯度稀釋，進行梯度稀釋的理由是 ________________________________________________________________________ __________________

9、______________________________________________________。 (2)推測在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有__________________和__________________。分離純化時應挑選出__________________的菌落作為候選菌。 (3)乳酸菌在－20 ℃長期保存時，菌液中常需要加入一定量的________________(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。 解析：(1)分離純化乳酸菌過程中，需要在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)乳酸菌并得到單菌落。由于泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落，故分離純化乳酸菌時

10、，首先需要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋。(2)由于乳酸菌代謝產(chǎn)生的乳酸可以溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣，形成透明圈，故培養(yǎng)基中加入碳酸鈣可用于鑒別乳酸菌，同時碳酸鈣也可以中和乳酸菌產(chǎn)生的乳酸。(3)乳酸菌在－20 ℃長期保存時，菌液中需要加入一定量的甘油，加甘油是為了避免水結(jié)冰產(chǎn)生冰晶損傷細胞。 答案：(1)無菌水　泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落 (2)鑒別乳酸菌　中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)　具有透明圈 (3)甘油 　土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù) 1．土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù) (1)分離原理：土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成脲酶，這種物質(zhì)在把尿

11、素分解成無機物的過程中起到催化作用。 (2)統(tǒng)計菌落數(shù)目：統(tǒng)計樣品中的活菌一般用稀釋涂布平板法。 2．實驗流程 (1)土壤取樣→富含有機質(zhì)的土壤表層土 ↓ (2)樣品的稀釋→通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計數(shù)的平板 ↓ (3)接種→用稀釋涂布平板法接種 ↓ (4)培養(yǎng) ↓ (5)觀察→根據(jù)菌落的特征區(qū)分微生物 ↓ (6)計數(shù)→統(tǒng)計菌落的數(shù)目 ↓ (7)計算→根據(jù)公式“每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M[C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)]”進行計算

12、 1．選擇培養(yǎng)基四種常見制備方法或?qū)嵗? 2．兩種計數(shù)方法的比較 間接計數(shù)法 (稀釋涂布平板法) 直接計數(shù)法 (顯微計數(shù)法) 原理 當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌 利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量 公式 每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M C：某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；V：涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)；M：稀釋倍數(shù) 每毫升原液所含細菌數(shù)：每小格平均細菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù) 缺點 當兩個或

13、多個菌體連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落 不能區(qū)分細胞死活 結(jié)果 比實際值偏小 比實際值偏大 3.設置對照和重復 比較項目 對照 重復 目的 排除非測試因素對實驗結(jié)果的影響 排除偶然因素對實驗結(jié)果的影響 實例 空白對照：確定培養(yǎng)基制作是否合格 同一稀釋度涂布至少3個平板 1．“選擇菌落數(shù)在30～300的平板”的兩個提醒 用稀釋涂布平板法計數(shù)微生物時，要求選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。解題時易出現(xiàn)以下誤解： (1)只得到1個菌落數(shù)在30～300的平板是錯誤的。錯誤的原因是不符合實驗的重復原則，易受到偶然因素的影響。 (2)得到3個或3個

14、以上菌落數(shù)在30～300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況： ①不同平板間差異較大，如得到3個平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，雖然菌落數(shù)均在“30～300”，這也是不正確的，因為“34”與“230”“240”差異太大，應重新實驗找出原因。 ②不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果。 可見，并不是只要得到3個“菌落數(shù)在30～300的平板”即可，而應該是涂布的同一稀釋度的平板均符合“菌落數(shù)在30～300之間”且無較大差異，說明實驗操作合格，才能按照計算公式進行計算。 2．選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基 種類 制備方法 原理 用途 舉例 選擇 培養(yǎng)

15、 基 培養(yǎng)基中加入某些化學物質(zhì) 依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的特殊需求或抗性而設計 從眾多微生物中分離所需的微生物 加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌 鑒別 培養(yǎng) 基 培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品 產(chǎn)生特定的顏色或其他變化 鑒別不同種類的微生物 用伊紅—美藍培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌 1．(2016·高考四川卷，10)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細菌的過程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。 (1)圖中選擇培養(yǎng)基應以________為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加________作指示劑，產(chǎn)脲酶細菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成 _______

16、_________________________________________________________________色。 (2)在5個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液0.1 mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過程采取的接種方法是______________，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量為________×108個；與血細胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)較________。 (3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)

17、終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為________，突變基因表達的蛋白質(zhì)含________個氨基酸。 解析：(1)篩選產(chǎn)脲酶細菌的選擇培養(yǎng)基應以尿素為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需要添加酚紅作指示劑，產(chǎn)脲酶細菌產(chǎn)生的脲酶可以將尿素分解成氨，導致培養(yǎng)基的pH升高，菌落周圍的指示劑將變成紅色。(2)圖中過程采取的接種方法是稀釋涂布平板法，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量為：(156＋178＋191)/3÷0.1×105＝1.75×108，血細胞計數(shù)板計數(shù)法所得數(shù)據(jù)包括死的細菌，且稀釋涂布平板法計數(shù)時所計菌落數(shù)少于真正的活細菌數(shù)，故與血細胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)

18、法測得的細菌數(shù)較少。(3)圖乙從起始密碼算起的堿基序列號為271，前270個堿基決定90個氨基酸，從271位到箭頭處可以決定1個氨基酸，然后插入70個核苷酸，可決定23個氨基酸，多出一個堿基，加上后面的AG剛好可以決定1個氨基酸，則后面UGA是終止密碼。因此突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA終止密碼為UGA，突變基因表達的蛋白質(zhì)所含氨基酸數(shù)為90＋1＋23＋1＝115(個)。 答案：(1)尿素　酚紅　紅 (2)稀釋涂布平板法　1.75　少 (3)UGA　115 2．(2016·高考全國卷乙，39)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室

19、內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下： ①配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O); ②制作無菌平板； ③設置空白對照組和若干實驗組，進行相關操作； ④將各組平板置于37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)。 回答下列問題： (1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于____________。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分X通常是__________________。 (2)步驟③中，實驗組的操作是 ____________________________________________________________________

20、____ ________________________________________________________________________。 (3)若在某次調(diào)查中，某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了______________現(xiàn)象。若將30(即36－6)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法______________(填“正確”或“不正確”)。 解析：(1)牛肉膏、蛋白胨都含有N，可為微生物的生長提供氮源。制作無菌平板所用培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，所以X應為瓊脂。(2)根據(jù)實驗目的可知，本實驗的自變

21、量為教室的不同高度，因變量為微生物的分布情況，故實驗組的操作應為將實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間。(3)空白培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落，說明培養(yǎng)基被污染了，即調(diào)查中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象。實驗過程中若培養(yǎng)基被污染，必須將其拋棄，重新制作新的培養(yǎng)基進行實驗。 答案：(1)牛肉膏、蛋白胨　瓊脂 (2)將實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間 (3)污染　不正確 　微生物的篩選與鑒別 1．纖維素酶 (1)組成：纖維素酶是一種復合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。 (2)作用 2．菌種篩選 (1)方法：剛果紅染色法。 (2)原理 　　　　

22、　　　　　纖維素分解菌 　　　　　　　　　 ↓ →紅色復合物紅色消失、出現(xiàn)透明圈。 即：使用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。 3．篩選流程 土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境 ↓ 選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量 ↓ 梯度稀釋 ↓ 涂布平板：將樣品涂布于含CR的鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 ↓ 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍出現(xiàn)透明圈 1．微生物的鑒別方法 (1)菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進行鑒別。 (2)指示劑鑒別法：如以尿素

23、為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)基變紅說明該種微生物能夠分解尿素。 (3)染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來篩選分解纖維素的微生物。 2．篩選微生物的三種方法 (1)單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面，直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物。 (2)選擇培養(yǎng)法：利用選擇培養(yǎng)基對微生物進行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生物。 (3)鑒定培養(yǎng)法：利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微生物。 3．篩選微生物的兩個實例比較 比較 項目 土壤中分解

24、尿素 的細菌的分離 分解纖維素的 微生物的分離 方法 利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng) 利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng) 原理 只有分解尿素的細菌能夠合成脲酶，才能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長 因為培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機會而大量繁殖 鑒別 在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑變紅說明菌落中的菌體為分解尿素的細菌 剛果紅染色法，周圍出現(xiàn)透明圈的菌落為分解纖維素的微生物的菌落 (1)纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基中并不只有纖維素一種碳源。 (2)纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上生長的并不只是纖維素分解菌。 (3)

25、纖維素分解菌菌落周圍的透明圈的大小與纖維素分解菌分解纖維素的能力呈正相關。 1．牛奶是微生物生長的良好培養(yǎng)基。牛奶在飲用前都要經(jīng)過巴氏消毒，以殺死有害微生物。為檢測消毒前后牛奶中細菌含量變化情況，做如圖所示操作。用無菌吸管從錐形瓶中吸取1 mL生牛奶稀釋液至盛有9 mL無菌水的試管中，混合均勻，如此再重復2次。請回答下列有關問題： (1)巴氏消毒的方法是 ________________________________________________________________________， 使用這種方法對生鮮牛奶進行消毒的好處是________。 (2)取最終的牛奶

26、稀釋液0.1 mL滴在培養(yǎng)基上進行涂布，應選擇的涂布工具是下圖中的________。 (3)圖中所示方法為稀釋培養(yǎng)法，理想情況下，培養(yǎng)一段時間后可在培養(yǎng)基表面形成菌落。若用該方法培養(yǎng)設置了3個培養(yǎng)皿，菌落數(shù)分別為35個、33個、34個，則可以推測生牛奶中每毫升含細菌數(shù)為________個，運用這種方法統(tǒng)計的結(jié)果往往較實際值________(填“偏大”或“偏小”)，原因是 ________________________________________________________________________。 (4)從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落中，混有各種雜菌，從中檢測大腸桿菌的

27、方法是在培養(yǎng)基中加入________，菌落具有______________________特征的可以認定為大腸桿菌。 答案：(1)70～75 ℃煮30分鐘(或80 ℃煮15分鐘)　牛奶的營養(yǎng)成分不被破壞　(2)B　(3)3.4×106　偏小　個別菌落可能是由2個或多個細菌形成的　(4)伊紅—美藍　(金屬光澤的紫)黑色 2．(高考新課標全國卷Ⅰ改編)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉栴}： (1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復合酶，其中的葡萄糖苷酶可將________分解成________。 (2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時，C

28、R可與纖維素形成________色復合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。 (3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設計了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見表)： 酵母膏 無機鹽 淀粉 纖維 素粉 瓊脂 CR溶液 水 培養(yǎng) 基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 培養(yǎng) 基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 注：“＋”表示有，“－”表示無。 據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是____________________

29、____________________________________________________ ________________________________________________________________________； 培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是 ________________________________________________________________________ ______________________________________________________

30、__________________。 解析：(1)纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶能使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶能將纖維二糖分解成葡萄糖。(2)剛果紅是一種染料，可以與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物就無法形成，培養(yǎng)基中就會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。(3)纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，而用于分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，并且培養(yǎng)基中需含有纖維素，才能與CR形成紅色復合物，有纖維素分解菌時才能形成以纖維素分解菌為中心的透明

31、圈。 答案：(1)纖維二糖　葡萄糖 (2)紅　透明圈 (3)不能　液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落　不能　培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會形成CR—纖維素紅色復合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌 3．(2017·河北邯鄲一模)某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細菌(目的菌)。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答下列問題： (1)培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是________________，這種培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。 (2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培

32、養(yǎng)基中的________。實驗需要振蕩培養(yǎng)，由此推測“目的菌”的代謝類型是____________。 (3)在上述實驗操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關鍵是________________。 (4)轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時，常采用平板劃線的方法進行接種，此過程中所用的接種工具是________，操作時采用的滅菌方法是________。 (5)實驗結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應該進行滅菌處理才能倒掉，這樣做的目的是 ________________________________________________________________________ ____________________

33、____________________________________________________。 (6)某同學計劃統(tǒng)計污水池中“目的菌”的總數(shù)，他選用104、105、106稀釋液進行平板劃線，每種稀釋液都設置了3個培養(yǎng)皿，從設計實驗的角度看，還應設置的一組對照實驗是__________________________________，此對照實驗的目的是______________________________。 解析：(1)該實驗的目的是篩選“目的菌”，故培養(yǎng)基中添加的化合物A起選擇作用。(2)微生物正常生長需要碳源、氮源、無機鹽等，由培養(yǎng)基中添加的物質(zhì)種類知：化合物A應該給微

34、生物生長提供碳源、氮源。培養(yǎng)過程需振蕩，說明目的菌是需氧型微生物。(6)統(tǒng)計污水池中的“目的菌”時應設置空白對照，以用于檢驗培養(yǎng)基是否滅菌嚴格。 答案：(1)篩選目的菌　選擇　(2)化合物A　異養(yǎng)需氧型　(3)防止外來雜菌污染　(4)接種環(huán) 灼燒滅菌　(5)防止造成環(huán)境污染　(6)不接種的空白培養(yǎng)基　檢驗培養(yǎng)基滅菌是否合格 課時作業(yè) 1．(2017·武漢調(diào)研)如表所示為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基配方，請回答有關問題： KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4· 7H2O 葡萄糖 尿素 蒸餾水 1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 定容至

35、1 000 mL (1)該培養(yǎng)基只允許分解尿素的細菌生長，這種培養(yǎng)基稱為________培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基會抑制其他種類微生物生長，其原因是該培養(yǎng)基 ________________________________________________________________________。 (2)若要通過統(tǒng)計培養(yǎng)基中菌落數(shù)來估計樣品中的細菌數(shù)，上述培養(yǎng)基中還需要添加的成分是________，接種時應采用________________法，該方法接種培養(yǎng)后的菌落，不可能是圖中的________。 (3)從土壤中分離出分解尿素的細菌后，要對其做進一步的鑒定，可在上述培養(yǎng)基中加入__

36、______指示劑，培養(yǎng)該菌后，如果指示劑變________，可初步鑒定該種細菌能夠分解尿素。 (4)某同學用0.1 mL稀釋液在稀釋倍數(shù)為106的平板中測得菌落數(shù)的平均值為163，則每毫升樣品中的細菌數(shù)是________個。 答案：(1)選擇　以尿素為唯一的氮源 (2)瓊脂　稀釋涂布平板　D (3)酚紅　紅 (4)1.63×109 2．(2017·江西贛中南五校第一次聯(lián)考)如表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方，請根據(jù)表格和所學知識回答下列相關問題： 成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 指示劑 瓊脂 含量(g) 10.0 5.0 5.0 2

37、.0 0.2 12.0 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL (1)從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于________。 (2)若根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于________(填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基。若要用上述培養(yǎng)基來篩選出土壤中的尿素分解菌，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分必需怎樣更改？________________，并用________作為指示劑。 (3)在微生物培養(yǎng)的過程中，為防止雜菌污染，需要對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行________；操作者的雙手需要進行清洗和________。 (4)圖1和圖2是培養(yǎng)某細菌的結(jié)果圖，其對應的接種方法分別是：________和________

38、，這兩種方法接種后培養(yǎng)基上都可以得到由單個細胞繁殖所形成的________。圖1所用的接種方法可用來對活菌進行計數(shù)。此外，測定微生物數(shù)目的另一種方法是________。 (5)以下過程中所利用的主要微生物的細胞結(jié)構(gòu)與大腸桿菌較相似的有________。 A．制作果酒　　　　　　 B．由果酒制作果醋 C．制作泡菜 D．制作腐乳 解析：(1)大腸桿菌只能從環(huán)境中攝取有機物，不能自己合成有機物，屬于分解者。(2)該培養(yǎng)基中含有指示劑，屬于鑒別培養(yǎng)基。尿素分解菌可以分解尿素，而其他微生物不能，因此可將培養(yǎng)基中的蛋白胨改為尿素用于篩選土壤中的尿素分解菌，并用酚紅作為指示劑，尿素分解菌分解尿

39、素產(chǎn)生了氨可使酚紅變紅。(3)培養(yǎng)微生物時，培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿需要滅菌，操作者雙手需要進行消毒。(4)圖1采用的是稀釋涂布平板法，圖2采用的是平板劃線法。單個微生物細胞繁殖所形成的細胞群叫菌落。(5)A、B、C、D中所用到的微生物主要是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌、毛霉，醋酸菌、大腸桿菌和乳酸菌都是原核細胞，結(jié)構(gòu)相似。 答案：(1)分解者　(2)鑒別　將蛋白胨改成尿素　酚紅 (3)滅菌　消毒　(4)稀釋涂布平板法　平板劃線法　菌落　顯微鏡直接計數(shù)法　(5)BC 3．臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素

40、的敏感性?；卮鹣铝袉栴}： (1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用________法或________法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。 (2)取該單菌落適當稀釋，用________法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使其均勻生長，布滿平板。 (3)為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素A________；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素B________；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，

41、說明______________________________；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的________。 (4)根據(jù)上述實驗結(jié)果，為達到抗菌目的，最好應選用抗生素________。 解析：(1)實驗室中對微生物純化培養(yǎng)時，常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)若讓已經(jīng)獲得的單個菌落在固體培養(yǎng)基上大量且均勻繁殖，常用玻璃涂布器把稀釋的菌液均勻涂滿整個平板。(3)對某種抗生素越敏感的致病菌，在該抗生素存在的范圍內(nèi)，越不易生存，形成的透明圈就越大。但是，如果在透明圈中還有菌落生存，則說明這個菌

42、落的細菌耐藥性很強。(4)通過(3)可知，在應用時，要想殺死某致病菌，就得選擇能使該致病菌大量死亡，即產(chǎn)生的透明圈大的那種抗生素。 答案：(1)平板劃線　稀釋涂布平板　(2)稀釋涂布平板 (3)敏感　不敏感　該致病菌對C的敏感性比對A的弱　耐藥菌　(4)A 4．(2017·廣西四市第一次聯(lián)考)如圖是某細菌純化培養(yǎng)過程中劃線接種的培養(yǎng)結(jié)果。回答問題： (1)在________(填圖中編號)區(qū)域出現(xiàn)了單個菌落，產(chǎn)生每個菌落的最初細菌數(shù)目是________個。據(jù)圖分析，在培養(yǎng)基上劃線接種時，劃線的順序依次是______(用編號表示)。 (2)如表是某微生物培養(yǎng)基的成分。 編號 成分

43、 含量 編號 成分 含量 ① 粉狀硫 10 g ② (NH4)2SO4 0.4 g ③ K2HPO4 4 g ④ MgSO4 9.25 g ⑤ FeSO4 0.5 g ⑥ CaCl2 0.5 g ⑦ H2O 100 mL ①若培養(yǎng)從土壤中分離出來的自生固氮菌，該培養(yǎng)基應添加________，去除________。 ②若要鑒別纖維素分解菌，可用________法，若要鑒別尿素分解菌，可在培養(yǎng)液中加入 _________________________________________________________________

44、_______。 解析：(1)從圖中可知，②號區(qū)域出現(xiàn)了單個菌落；1個菌落由1個細菌繁殖形成；根據(jù)菌落數(shù)量可判斷，劃線的順序依次是①→③→②。(2)①自生固氮菌是異養(yǎng)生物，它可固定大氣中的N2，因而培養(yǎng)基中應添加碳源去掉氮源。②鑒別纖維素分解菌可用剛果紅染色法，要鑒別尿素分解菌，可在培養(yǎng)液中加入酚紅指示劑。 答案：(1)②　1?、佟邸凇?2)①碳源　氮源　②剛果紅染色　酚紅指示劑 5. (2017·重慶八中高三適應性考試)欲從土壤中篩選出能產(chǎn)生脲酶的微生物并予以純化計數(shù)，采用了如圖所示的基本操作流程。請回答下列問題： (1)取得土樣后應先用________(填試劑)對土壤進行梯

45、度稀釋，然后將稀釋液涂布在平面培養(yǎng)基上，這種選擇培養(yǎng)基在營養(yǎng)組成上的重要特點是__________________。在這樣的培養(yǎng)基上長出的細菌________(填“一定”或“不一定”)都能產(chǎn)生脲酶。若在平板中加入酚紅，目的菌落出現(xiàn)的變化是__________________。 (2)若要對相應微生物進行計數(shù)，一個稀釋度應涂布2到3個平板，并計算________。若稀釋度不夠高，所得的數(shù)據(jù)與實際值比較應________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。經(jīng)涂布獲得的菌落可以采用平板劃線法進一步純化，每次劃線后接種環(huán)必須________，才能再次用于劃線。獲得的純化菌種可以保存在試管中，塞上棉塞或

46、蓋上封口膜，不能密封，原因是______________________。 答案：(1)無菌水　氮源只有尿素　不一定　菌落周圍出現(xiàn)紅圈　(2)平均值　偏小　灼燒　細菌有氧呼吸需要氣體流通 6．苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請回答下列問題： (1)②中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應加入________作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基________(A.影響；B.不影響)細菌的數(shù)量，如果要測定②中活細菌數(shù)量，常

47、采用________________法。 (2)④為對照，微生物在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________； 使用法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細菌時進行倒置培養(yǎng)的原因是 _____________________________________________________

48、___________________。 (3)實驗過程中如何防止其他微生物的污染？ ________________________________________________________________________。 答案：(1)苯酚　A　稀釋涂布平板 (2)④的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基加入苯酚作為碳源　稀釋涂布平板法或平板劃線　防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基 (3)培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過程無菌操作 7．(高考新課標全國卷Ⅱ改編)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作?；卮鹣铝袉?/p>

49、題： (1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是 ________________________________________________________________________； 然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為________個。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌，操作時，接種環(huán)通過__________滅菌。在第二次及以后的劃線時，總是從上

50、一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能

51、提高培養(yǎng)液中________的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高________的利用率。 解析：(1)為了檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，隨機取滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間。0.1 mL稀釋液中平均有(39＋38＋37)/3＝38個活菌，則每毫升稀釋液中活菌的數(shù)目為38/0.1＝380個，則稀釋前每毫升水樣中活菌數(shù)目為380×100＝3.8×104個，則每升水樣中活菌數(shù)目為3.8×104×1 000＝3.8×107個。(2)接種環(huán)、接種針等金屬用具可直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，以達到迅速徹底滅菌的目的。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，其目

52、的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落。(3)比較圖A和圖B可以看出：A培養(yǎng)基中細菌的分布呈線性，是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果；B培養(yǎng)基中細菌均勻分布，是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)振蕩培養(yǎng)可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高了營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。 答案：(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格　3.8×107 (2)灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落 (3)B　(4)溶解氧　營養(yǎng)物質(zhì) 8．某校生物興趣小組同學為了從某品牌酸奶中分離乳酸菌并檢測其耐藥情況，設計了如下實驗流程(如圖所示)。據(jù)流

53、程圖分析回答下列問題： →→→ (1)配制細菌培養(yǎng)基：為了挑選到乳酸菌，必須在配制好的細菌培養(yǎng)基中特別加入一定量的碳酸鈣，乳酸菌在________(生理過程)中產(chǎn)生的乳酸能與不溶性的碳酸鈣生成可溶性的乳酸鈣，從而在菌落周圍形成溶鈣圈。從物理性質(zhì)角度分析，這種培養(yǎng)基屬于________(填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基。 (2)滅菌：在利用高壓蒸汽滅菌鍋對培養(yǎng)基滅菌時，把鍋內(nèi)水加熱煮沸，必須 ________________________________________________________________________ 后，將鍋密閉，繼續(xù)加熱以保證鍋內(nèi)氣壓上升為100 kP

54、a，溫度達到121 ℃。滅菌后的培養(yǎng)基應適當冷卻后，在酒精燈 ________________________________________________________________________倒平板。 (3)分離乳酸菌：用平板劃線法將酸奶接種到細菌培養(yǎng)基上，在________(填“有氧”或“無氧”)條件下培養(yǎng)。其中， ________________________________________________________________________ 的菌落即為乳酸菌的菌落。 (4)乳酸菌耐藥性檢測：檢測乳酸菌對青霉素、四環(huán)素的耐藥性。 ①準備培養(yǎng)基：取三組

55、細菌固體平板培養(yǎng)基并編號1、2、3，依次加入等量的 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 ②接種：向三組培養(yǎng)基中分別接種待檢測的乳酸菌菌種。 ③培養(yǎng)并觀察：將接種后的三組培養(yǎng)基和一個 ________________________________________________________________________ _

56、_______都置于適宜溫度等條件下培養(yǎng)若干天，觀察比較培養(yǎng)基中菌落生長情況。 ④結(jié)果分析。 Ⅰ.若1、2、3號培養(yǎng)基上菌落生長情況相同，則乳酸菌既能抗青霉素，也能抗四環(huán)素。 Ⅱ.若 ________________________________________________________________________， 則乳酸菌能抗青霉素，不抗四環(huán)素。 Ⅲ.若 ________________________________________________________________________， 則乳酸菌不抗青霉素，能抗四環(huán)素。 Ⅳ.若 ________________________________________________________________________， 則乳酸菌既不抗青霉素，也不抗四環(huán)素。 答案：(1)無氧呼吸　固體 (2)將其中的冷空氣徹底排除　火焰附近 (3)無氧　周圍形成溶鈣圈 (4)①青霉素、四環(huán)素和無菌水 ③未接種的培養(yǎng)基 ④Ⅱ.1、3號培養(yǎng)基上菌落生長情況相同，2號培養(yǎng)基上菌落生長不正常 Ⅲ.2、3號培養(yǎng)基上菌落生長情況相同，1號培養(yǎng)基上菌落生長不正常 Ⅳ.3號培養(yǎng)基上菌落生長情況正常，1、2號培養(yǎng)基上菌落生長不正常 20