《環(huán)境微生物學(xué)》和《大氣污染控制工程》實驗教案共39頁

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1、三、 《環(huán)境微生物學(xué)》和《大氣污染控制工程》部分 實驗一 水中細(xì)菌總數(shù)的測定 一、目的要求 l ．學(xué)習(xí)水樣的采取方法和水樣細(xì)菌總數(shù)測定的方法。 2．了解水源水的平板菌落計數(shù)的原則。 二、基本原理 本實驗應(yīng)用平板菌落計數(shù)技術(shù)測定水中細(xì)菌總數(shù)。由于水中細(xì)菌種類繁多， 它們對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大， 不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件 下， 使水中所有的細(xì)菌均能生長繁殖， 因此， 以一定的培養(yǎng)基平板上生長出來的 菌落， 計算出來的水中細(xì)菌總數(shù)僅是一種近似值。 目前一般是采用普通肉膏蛋白 胨瓊脂培養(yǎng)基。 三、器材 l ．培養(yǎng)基：肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，無菌水。 2 . 儀

2、器或其他用具：滅菌三角燒瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養(yǎng)皿，滅菌 吸管，滅菌試管等。 3 .玻璃器皿的洗滌和滅菌 3.1 玻璃器皿的洗滌 ①新購置的玻璃器皿，因含游離堿，應(yīng)先在此2%a酸中浸泡數(shù)小時，用自 來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗1-2 次并瀝干。 ②培養(yǎng)細(xì)菌的玻璃器皿， 應(yīng)先經(jīng)高壓蒸汽滅菌， 趁熱倒出培養(yǎng)基， 用熱肥皂 水或洗滌劑洗刷殘漬，再用清水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗1-2 次，瀝干。 ③洗滌劑吸管量，可先置3豚蘇液內(nèi)浸30min或高壓政策蒸汽滅菌，再用 洗滌劑洗滌，用清水及蒸餾水沖洗干凈。 ④洗滌染色瓶時，可在5%g白粉中浸泡24h后，再用常規(guī)方法洗滌干凈。

3、⑤含油脂的玻璃器皿，應(yīng)單獨(dú)高壓滅菌洗滌，趁熱倒出污物，置 100c干燥 箱內(nèi)烘 0.5h ，再放入5%碳酸氫鈉水中煮沸，先去脂再行常規(guī)洗滌。 3.2 玻璃器皿的滅菌 （ 1）高壓蒸汽滅菌 這是應(yīng)用研究最廣泛的滅菌方法， 滅菌是用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行。 手提式高 壓蒸汽滅菌器，使用方便，其操作方法主注意事項如下： ①打開鍋蓋或從加入口處向鍋內(nèi)加入適量的水。 ②加水后，將待滅菌器皿放入鍋內(nèi)，不要塞得過緊，以使鍋內(nèi)溫度均勻，再 將鍋蓋蓋好，擰緊螺旋，使其密封。 ③打開放氣閥， 打開熱源加熱至水沸騰， 讓鍋內(nèi)冷空氣充分逸出。 否則鍋內(nèi) 溫度達(dá)不到壓力表所指示的對應(yīng)溫度，滅菌不徹底。當(dāng)冷

4、空氣由排氣孔排盡后， 再關(guān)緊放氣活塞。等鍋內(nèi)蒸汽壓上升至所需壓力時，控制熱源，維持所需時間， 一般為 0.10343MPa(121C)表壓，保持 20min。 ④滅菌完畢，關(guān)閉熱源，必須待壓力自然降至“0”時，方可啟蓋取出滅菌 物品，否則易發(fā)生危險。 ( 2)干熱滅菌 實驗室中常用的還有熱空氣滅菌的方法， 即將洗干凈的待滅菌器皿均勻放入 恒溫干燥箱內(nèi)，便不得與內(nèi)層底板直接接觸。關(guān)閉箱門，開戶電源開關(guān)，用恒溫 調(diào)節(jié)器，使溫度上升至160-170 C,維持2h,即可達(dá)到滅菌目的。滅菌完畢后， 需關(guān)閉電源開關(guān)，待溫度降至50℃以下時，方可開門取物，否則玻璃器皿可因 驟冷而爆裂。

5、 4. 培養(yǎng)基的制備 配制一般培養(yǎng)基的主要程序可分為：調(diào)配、溶化、調(diào)節(jié)Ph、澄清過濾、分 裝、滅菌、鑒定等步驟。 ①調(diào)配：按培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱取各成分，用少量水溶解。對于肉膏之類粘、 膠狀物，可盛在小燒杯或表面皿中稱量，然后加水移入培養(yǎng)基中。此外，也可放 在稱量紙上稱量后直接放入水中， 這時如稍微加熱， 肉膏便會與稱量紙分離， 然 后立即取出紙片。 蛋白胨等極易吸潮物質(zhì)， 在稱取時動作要迅速。 此外， 維生素、 氨基酸、 無機(jī)鹽等微量成分， 可預(yù)先配制高深度的貯備液， 在配制培養(yǎng)基過程中 再按配方比例取一定量加入培養(yǎng)液中即可。 ②融化：將各成分混勻于水中，最好以流通蒸汽融化0.

6、5h,如在電爐上融 化應(yīng)隨時攪拌，如有瓊脂成分時，應(yīng)注意防止外溢。融化后，應(yīng)注意補(bǔ)充失去的 水分，補(bǔ)足至原體積。 制備大量培養(yǎng)基時，除玻璃器皿外，還可用搪瓷桶、鋁鍋等容器加熱融化， 但不可用鍋或鐵鍋，以免金屬離子進(jìn)入培養(yǎng)基中影響細(xì)菌生長。 ③調(diào)節(jié)pH值：一般細(xì)菌用的培養(yǎng)pH調(diào)整在6.8-7.2之間，但也有需要酸性 或堿性的培養(yǎng)基。 培養(yǎng)基高壓滅菌后， 壓滅菌后，pH值約降低0.1-0.2 ,故調(diào)節(jié)時應(yīng)比實際 需要的pH值高0.1-0.2。但有時也可降低0.4,因所使用的滅菌器不同而不同。 調(diào)節(jié)pH值，用鹽酸和氫氧化鈉，因為在相同pH值下，有機(jī)酸比無機(jī)更易抑制微 生物生長，因此，除非特

7、殊情況，最好不要用乙酸等有機(jī)酸來調(diào)節(jié)pH值。一般 用精密pH試紙調(diào)節(jié)（精確到0.1pH單位），必要時也可酸度計。調(diào)節(jié)時需注意 逐步滴加，勿使過酸或過堿而破壞培養(yǎng)基中某些組分。 ④過濾澄清：培養(yǎng)基配成后，一般都有沉渣或混濁，需過濾，使其清晰透明 方可使用。 液態(tài)培養(yǎng)基常用濾紙過濾； 固態(tài)培養(yǎng)基如瓊脂培養(yǎng)基， 加熱后需趁熱 用脫脂棉或多層紗布過濾。 ⑤分裝：將調(diào)節(jié)pH值后的培養(yǎng)基按需要趁熱分裝于三角瓶或試管內(nèi)，以免 瓊脂冷凝。分裝量不宜超過容器的 2/3 ，以免滅菌時外溢。分裝時應(yīng)注意勿使培 養(yǎng)基粘附于管口與瓶口部位，以免沾染棉塞而滋生雜菌。 基礎(chǔ)培養(yǎng)基一般常分裝于三角瓶內(nèi)，分裝的量應(yīng)根

8、據(jù)使用目的和要求決定， 但必須定量分裝，以便滅菌后使用。 瓊脂斜面分裝量為試管容量的 1/5 ，滅菌后須趁熱放置成斜面，斜面長度約 為試管長度的 2/3 。 半固體培養(yǎng)基分裝量約占試管長度的 1/3 ，滅菌后趁熱直立，待冷卻凝固。 高層瓊脂分裝量約為試管長度的 1/3 ，滅菌后直立凝固待用。 瓊脂平板是將滅菌后的培養(yǎng)基，冷卻至50℃左右，在無菌條件下傾入滅菌 平皿內(nèi)。內(nèi)徑9cm的平皿傾注培養(yǎng)基約15ml左右，使培養(yǎng)基平鋪于皿底部，凝 固后即成。 傾注培養(yǎng)基時， 切勿將皿蓋全部啟開， 以免空氣中塵埃及細(xì)菌落入。 新制成的培養(yǎng)平板， 表面水分較多， 不利于細(xì)菌的分離， 通常應(yīng)將平皿

9、倒扣 置于37c培養(yǎng)多!內(nèi)約30min,待平板干燥后使用。 ⑥滅菌：加熱配制培養(yǎng)基后，在 2h內(nèi)進(jìn)行了滅菌處理。不要把未滅菌的培 養(yǎng)基冷藏或存放。絕大多數(shù)培養(yǎng)基都應(yīng)放在高壓滅菌器內(nèi)于 121℃滅菌，并應(yīng) 在達(dá)到這一溫度后持續(xù)15min。 糖類液態(tài)培養(yǎng)基或含有其他特殊成分的培養(yǎng)基， 高壓蒸汽滅菌會使其分解，一用濾膜過濾滅菌。或者將不耐熱物質(zhì)用其他方法 滅菌（如流通蒸汽滅菌）后，再加入已滅菌的培養(yǎng)基中。 ⑦保存：配制好的培養(yǎng)基，不宜保存過久，以少量勤配制為宜。每批應(yīng)注明 制作日期。已滅菌的培養(yǎng)基可在4-10 ℃存放 1 個月。存放時應(yīng)避免陽光直射， 并且要避免雜菌浸入和液體蒸發(fā)。

10、 當(dāng)發(fā)酵管中的液體培養(yǎng)基存放在冰箱或者適中的低溫時， 可能有空氣溶解進(jìn) 去， 以致在37℃培養(yǎng)時，會在管內(nèi)形成空氣泡。 因此， 凡存放在低溫的發(fā)酵管， 使用前應(yīng)先予以培養(yǎng)過夜，棄去有氣泡的管子。 液態(tài)培養(yǎng)基在室溫下存放超過一周，可能有水分蒸發(fā)，如果管內(nèi)液體損失 10%，應(yīng)棄去不用。 5. 各種培養(yǎng)基的成分與制備 為減少配制中的誤差，盡量選用市售已配好的綜合培養(yǎng)基。 （ 1）營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 蛋白凍 10g牛肉浸膏3g 氯化鈉5 g瓊脂15-20 g 蒸餾水1000ml 將上述成分混勻后，調(diào)節(jié)pH為7.4-7.6 ,過濾去除沉淀，分裝于玻璃容器 121 ℃高壓蒸汽滅菌 （

11、 2）乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 蛋白陳 10g 氯化鈉 5 g 1.6 ％溴甲酚紫乙醇溶液 蒸餾水 1000ml 將蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氧化鈉加熱溶解于 昌、乳糖、 15min,貯存于暗處備用 牛肉浸膏 乳糖 1ml 氧化鈉加熱溶解于 3g 5g 1000 ml 蒸餾水中，調(diào)節(jié) 1ml， 充分混勻， 分裝于含有倒 pH為7.2-7.4 ,再加入1.6 %澳甲酚紫乙醇溶液 置的小玻璃管的試管中，于高壓蒸汽滅菌器中，在115℃高壓蒸汽滅菌20min， 貯于暗處備用。 此培養(yǎng)基適用于檢驗大腸菌群時作發(fā)酵試驗用。 根據(jù)實際需要， 也可按上述 配方比例（除

12、蒸餾水外）配成二倍、三倍或五倍濃縮的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，制 法同上。 蛋白陳 10g 瓊脂 20-30 g 無水亞硫酸鈉 5ml 5％堿性品紅乙醇溶液 3）品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基（多管發(fā)酵用） 乳糖 10g 磷酸氫二鉀3.5 g 蒸餾水1000ml 1.1- ml ①貯備培養(yǎng)基：先將瓊脂加至900 ml蒸儲水中，加熱溶解，然后加入磷酸 氫二鉀及蛋白陳，渴勻使其溶解，再以蒸儲水補(bǔ)足至1000 ml,調(diào)節(jié)pH為 1.2- 7.4 。 趁熱用脫脂棉或多層紗布過濾， 再加入乳糖， 混勻后定量分裝于燒瓶 內(nèi)，置高壓蒸汽器中，在115c高壓蒸汽滅菌20min。貯于暗處備用。 ②平板培

13、養(yǎng)基： 將上述貯備培養(yǎng)基加熱融化。 以無菌操作， 根據(jù)瓶內(nèi)培養(yǎng)基 的容量，用滅菌吸管按1： 50 的比例吸取一定量的5％堿性品紅乙醇溶液置于 滅菌空試管中； 再按 1： 200 的比例稱取所需的無水亞硫酸鈉置于另一滅菌空試 管內(nèi)，加滅菌水少許使其溶解，再置于沸水浴中煮沸 10min 滅菌。用滅菌吸管 吸取已滅菌的亞硫酸鈉溶液，滴加于堿性品紅乙醇溶液內(nèi)至深紅色褪成淡紅色 為止（不宜多加）。將此混合液全部加入已融化的貯備培養(yǎng)基內(nèi)，并充分混勻 （防止產(chǎn)生氣泡）。立即將此種培養(yǎng)基適量（約 15 ml ）傾入已滅菌的空平皿 內(nèi)，待其冷卻凝固后，倒置冰箱內(nèi)備用。此種已制成的培養(yǎng)基于冰箱內(nèi)保存

14、不 宜超過兩周，如培養(yǎng)基已由淡紅色變成深紅色，則不能再用。 （4）伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（ERBW養(yǎng)基） 蛋白陳 10g乳糖 10g 瓊脂20 g磷酸氫二鉀2.0 g 蒸餾水1000ml2％伊紅（曙紅）水溶液20ml 0.5 ％美藍(lán)（亞甲基藍(lán)）水溶液13 ml ①貯備培養(yǎng)基：先將瓊脂加至900 ml蒸儲水中，加熱溶解，然后加入磷酸 氫二鉀及蛋白陳，渴勻使其溶解，再以蒸儲水補(bǔ)足至1000 ml,調(diào)節(jié)pH為 1.3- 7.4 。 趁熱用脫脂棉或多層紗布過濾， 再加入乳糖， 混勻后定量分裝于燒瓶 內(nèi)，置高壓蒸汽器中，在115c高壓蒸汽滅菌20min。貯于暗處備用。 ②平板培養(yǎng)基： 將上

15、述貯備培養(yǎng)基加熱融化。 以無菌操作， 根據(jù)瓶內(nèi)培養(yǎng)基 的容量， 用滅菌吸管按比例吸取一定量的2％伊紅水溶液及0.5 ％美藍(lán)水溶液加 入已融化的培養(yǎng)基內(nèi)，并充分混勻(防止產(chǎn)生氣泡)。當(dāng)混合好的培養(yǎng)基冷卻 至 45℃，便立即將此種培養(yǎng)基適量(約15 ml )傾入已滅菌的空平皿內(nèi)，待其 冷卻凝固后，倒置冰箱內(nèi)備用。 四、操作步驟 l ．水樣的采取 (1) 自來水：先將自來水龍頭用火焰燒灼 3min 滅菌，再開放水龍頭使水流 5min 后，以滅菌三角燒瓶接取水樣，以待分析。 (2)池水、河水或湖水：應(yīng)取距水面10?15cm的深層水樣，先將滅菌的帶玻 璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻

16、轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿 后，將瓶塞蓋好，再從水中取出，最好立即檢查，否則需放入冰箱中保存 2．細(xì)菌總數(shù)測定 (2) 自來水 ①用滅菌吸管吸取1m1 水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中。共做兩個平皿。 ②分別傾注約15mL己溶化并冷卻到45c左右的肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基，并 立即在桌上作平面旋搖，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。 ③另取一空的滅菌培養(yǎng)皿，傾注肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基15mL作空自對照。 ④培養(yǎng)基凝固后，倒置于37c 溫箱中，培養(yǎng)24h,進(jìn)行菌落計數(shù)。 ⑤兩個平板的平均菌落數(shù)即為 1m1 水樣的細(xì)菌總數(shù)。 (3) 池水、河水或湖水等 ①稀釋水樣： 取 3 個滅菌空試管，

17、 分別加入 9m1 滅菌水。 取 1m1 水樣注入第 一管 9m1 滅菌水內(nèi)、 搖勻， 再自第一管取1m1 至下一管滅菌水內(nèi)， 如此稀釋到第 三管，稀釋度分別為 10-1 、 10-2 與 10-3 。稀釋倍數(shù)看水樣污濁程度而定，以培 養(yǎng)后平板的菌落數(shù)在30?300個之間的稀釋度最為合適，若三個稀釋度的菌數(shù)均 多到無法計數(shù)或少到無法計數(shù)，則需繼續(xù)稀釋或減小稀釋倍數(shù)。 一般中等污穢水樣，取10-1 、 10-2 、 10-3 三個連續(xù)稀釋度，污穢嚴(yán)重的取 10-2、 10-3、 10-4 三個連續(xù)稀釋度。 ②自最后三個稀釋度的試管中各取lmL 稀釋水加入空的滅菌培養(yǎng)皿中， 每一 稀

18、釋度做兩個培養(yǎng)皿。 ③各傾注 15ml 已溶化并冷卻至45℃左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，立即放 在桌上搖勻。 ④凝固后倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。 3．菌落計數(shù)方法 (1) 先計算相同稀釋度的平均菌落數(shù)。若其中一個平板有較大片狀菌苔生長 時， 則不應(yīng)采用， 而應(yīng)以無片狀菌苔生長的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。 若 片狀菌苔的大小不到平板的一半， 而其余的一半菌落分布又很均勻時， 則可將此 一半的菌落數(shù)乘2 以代表全平板的菌落數(shù)，然后再計算該稀釋度的平均菌落數(shù)。 (2) 首先選擇平均菌落數(shù)在30~300 之間的， 當(dāng)只有一個稀釋度的平均菌落數(shù) 符合此范圍時，則以該平均菌落

19、數(shù)乘其稀釋倍數(shù)即為該水樣的細(xì)菌總數(shù)。 (3)若有兩個稀釋度的平均菌落數(shù)均在30?300之間，則按兩者菌落總數(shù)之 比值來決定。若其比值小于2，應(yīng)采取兩者的平均數(shù)；若大于2，則取其中較小 的菌落總數(shù)。 (4) 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落 數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。 (5) 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30， 則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù) 乘以稀釋倍數(shù)。 (6)若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30?300之間，則以最近300或30 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。 五、實驗報告 1．結(jié)果 ( 1)自來水 ( 2)池水、河水或湖水等 2．思考題 (

20、1)從自來水的細(xì)菌總數(shù)結(jié)果來看，是否合乎飲用水的標(biāo)準(zhǔn)？ ( 2）你所測的水源水的污穢程度如何？ ( 3）國家對自來水的細(xì)菌總數(shù)有一標(biāo)準(zhǔn)，那么各地能否自行設(shè)計其測定條 件（諸如培養(yǎng)溫度，培養(yǎng)時間等）來測定水樣總數(shù)呢？為什么？ 實驗二、實驗室環(huán)境和人體表面微生物的檢查 一、目的要求 1.證明實驗室環(huán)境與體表存在微生物。 2．比較來自不同場所與不同條件下細(xì)菌的數(shù)量和類型。 3．觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征。 4．體會無菌操作的重要性。 二、基本原理 平板培養(yǎng)基含有細(xì)菌生長所需要的營養(yǎng)成分， 當(dāng)取自不同來源的樣品接種于 培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)1?2d內(nèi)每一菌體即能通過很

21、多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行 繁殖， 形成一個可見的細(xì)胞群體集落， 稱為菌落。 每一種細(xì)菌所形成的菌落都有 它自己的特點(diǎn)，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑， 邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等。 因此，可通過平板培養(yǎng)來檢查環(huán)境中細(xì)菌的數(shù)量和類型。 三、器材 l ．培養(yǎng)基：肉膏蛋白胨瓊脂平板。 2．儀器或其他用具：無菌水，滅菌棉簽（ 裝在試管內(nèi) ） ，接種環(huán)，試管架， 酒精燈或煤氣燈，記號筆，廢物缸。 四、操作步驟 每組在“實驗室”和“人體”兩大部分中各選擇一個內(nèi)容做實驗， 或由教師 指定分配，最后結(jié)果供全班討論。 l ．寫標(biāo)

22、簽 任何一個實驗， 在動手操作前均需首先將器皿用記號筆做上記號， 寫上班級、 姓名、 日期， 本次實驗還要寫上樣品來源（ 如實驗室空氣或無菌室空氣或頭發(fā)等） ， 字盡量小些，寫在皿底的一邊，不要寫在當(dāng)中，以免影響觀察結(jié)果。 培養(yǎng)皿的記號一般寫在皿底上。 如果寫在皿蓋上， 同時觀察兩個以上培養(yǎng)皿 的結(jié)果，打開皿蓋時，容易混淆。 2 ．實驗室細(xì)菌檢查 （1） 空氣 ： 將一個肉膏蛋白胨瓊脂平板放在當(dāng)時做實驗的實驗室， 移去皿蓋， 使瓊脂培養(yǎng)基表面暴露在空氣中； 將另一肉膏蛋白胨瓊脂平板放在無菌室或無人 走動的其他實驗室，移去皿蓋。 lh 后蓋上兩個皿蓋。 （2） 實驗臺和門的旋鈕

23、 ①用記號筆在皿底外面中央畫一直線，再在此線中間處畫一垂直線。 ②取棉簽： 左手拿裝有棉簽的試管， 在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無 名指夾持棉塞（ 或試管帽 ） ， 將其取出， 將管口很快地通過煤氣燈（ 或酒精燈 ） 的火 焰，燒灼管口；輕輕地傾斜試管，用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出。塞回 棉塞 （ 或試管帽 ） ，并將空試管放在試管梁上。 ③弄濕棉簽：左手取滅菌水試管，如上法撥出棉塞（或試管帽）并燒灼管口， 將棉簽插入水中， 再提出水面， 在管壁上擠壓一下以除去過多的水分， 小心將棉 簽取出，燒灼管口，塞回棉塞（ 或試管帽 ） ，并將滅菌水試管放在試管梁上。 ④取樣

24、：將濕棉簽在實驗臺面或門旋鈕上擦拭約2cm2的范圍。 ⑤接種： 在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫， 再將棉簽伸 人，在瓊脂表面頂端接種，即滾動一下，立即閉合皿蓋。并按圖 27-2E和F,將 原放棉簽的空試管撥出棉塞（ 或試管帽 ） ， 燒灼管口， 插入用過的棉簽， 將試管放 回試管架。 ⑥劃線：另取接種環(huán)在火焰上滅菌，按圖3—3方法進(jìn)行劃線，整個劃線操 作均要求無菌操作，即靠近火焰，而且動作要快。 3 ．人體細(xì)菌的檢查 （ 1）手指 （ 洗手前與洗手后 ） ①分別在兩個瓊脂平板上標(biāo)明洗手前與洗手后（ 班級、姓名．日期 ） 。 ②移去皿蓋， 將未洗過的手指在瓊脂

25、平板的表面，輕輕地來回劃線， 蓋上皿 蓋。 ③用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中沖洗干凈，干燥后，在另一瓊脂平板 表面來回移動，蓋上皿蓋。 （2） 頭發(fā) ：在揭開皿蓋的瓊脂平板的上方，用手將頭發(fā)用力搖動數(shù)次，使細(xì) 菌降落到玻脂平板表面，然后蓋上皿蓋。 A. 接種時，用左手將平皿開啟一縫； B.棉簽伸入平板接種； C.用己滅菌并冷卻了的接種環(huán)劃線； D.第二部分劃線； E. 最后部分劃線 (3)咳嗽：將去皿蓋的瓊脂平板放在離口約 6?8cm處，對著瓊脂表面用力咳 嗽，然后蓋上皿蓋。 (4) 鼻腔 ①按照實驗臺檢查法的步驟②和③，取出棉簽，并將其弄濕。 ②用濕棉簽在鼻腔內(nèi)

26、滾動數(shù)次。 ③按實驗臺檢查法的步驟⑤和⑥，接種與劃線，然后蓋上皿蓋。 4.將所有的瓊脂平板翻轉(zhuǎn)，使皿底朝上，放37c培養(yǎng)箱，培養(yǎng)1?2d。 五、結(jié)果記錄方法 (1) 菌落計數(shù)在劃線的平板上，如果菌落很多而重疊，則數(shù)平板最后 1/4 面積內(nèi)的菌落數(shù)。不是劃線的平板，也一分為四，數(shù)l/4 面積的菌落數(shù)。 (2) 根據(jù)菌落大小、形狀、高度、干濕等特征觀察不同的菌落類型。 但要注 意， 如果細(xì)菌數(shù)量太多， 會使很多菌落生長在一起， 或者限制了菌落生長而變得 很小，因而外觀不典型，故觀察菌落的特點(diǎn)時，要選擇分離得很開的單個菌落。 菌落特征描寫方法如下： ①大小：大、中、小、針尖狀?？?/p>

27、先將整個平板上的菌落粗略觀察一下，再 決定大、中、小的標(biāo)準(zhǔn)，或由教師指出一個大小范圍。 ②顏色：黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。 ③干濕情況：干燥、濕潤、粘稠。 ④形態(tài)：圓形、不規(guī)則等。 ⑤高度：扁平、隆起、凹下。 ⑥透明程度：透明、半透明、不透明。 ⑦邊緣：整齊、不整齊。 六、菌落總數(shù)計算方法 T— 平皿暴露時間 (分鐘 ) 七、實驗報告 1．結(jié)果 ( 1)將你自已的平板結(jié)果記錄于下表中。 ( 2)與其他同學(xué)所做的結(jié)果進(jìn)行比較 2．思考題 (1) 比較各種來源的樣品，哪一種樣品的平板菌落數(shù)與菌落類型最多？ (2) 人多的實驗室與無菌室 ( 或無人走

28、動的實驗室 ) 相比，平板上的菌落數(shù)與 菌落類型有什么區(qū)別？你能解釋一下造成這種區(qū)別的原因嗎？ (3) 洗手前后的手指平板，菌落數(shù)有無區(qū)別？ (4) 通過本次實驗，在防止培養(yǎng)物的污染與防止細(xì)菌的擴(kuò)散方面，你學(xué)到些 什么？有什么體會。 實驗三 大氣環(huán)境中 TSP 的測定 一、目的要求 大氣環(huán)境中 TSP 是一種常規(guī)的污染物，它們對人體健康、植被生態(tài)和能見 度等都有著非常重要的直接和間接影響。因此，對TSP 污染物的濃度監(jiān)測是環(huán) 境監(jiān)測中一項重要的工作。 本實驗在校園中及附近的工業(yè)區(qū)、 公路傍進(jìn)行采樣分析。 通過本實驗， 應(yīng)達(dá) 到以下目的： (1 )掌握重量量測定大氣環(huán)境中

29、TSP濃度的方法； (2) 了解TSP污染物對人體健康的危害； (3 )學(xué)習(xí)環(huán)境監(jiān)測中質(zhì)量控制和保證的概念。 二、基本原理 通過具有一定切割特性的采樣器， 以恒速抽取一定體積的空氣， 空氣中粒徑 小于100仙m的懸浮顆粒物被截留在已恒重的濾膜上。根據(jù)采樣前、后濾膜質(zhì)量 之差及采樣體積， 計算總懸浮顆粒物的濃度。 濾膜經(jīng)處理后， 可再進(jìn)行組分分析。 本方法適用于大流量或中流量總懸浮顆粒物采樣器 (簡稱采樣器) 進(jìn)行空氣 中總懸浮顆粒物的測定。 方法的檢測限為0.001mg/m3。 總懸浮顆粒物含量過高或 霧天采樣使濾膜阻力大于 10kPa 時，本方法不適用。 三、實驗儀器和材

30、料 (1)大流量或中流量采樣器：1臺，應(yīng)按HYQ 1.1-89《總懸浮顆粒物采 樣器技術(shù)要求（暫行） 》的規(guī)定。 （2）大流量孔口流量計： 1 個， 量程 0.7-1.4m 3/min ，流量分辨率0.01 m3/min ， 精度優(yōu)于±2％。 （ 3）中流量孔口流量計： 1 個，量程 70-160L/min ，流量分辨率1 L /min ， 精度優(yōu)于±2％。 （ 4） U型管壓差計：1個，最小刻度0.1hPa。 （ 5） X 光看片機(jī)： 1 臺，用于檢查濾膜有無缺損。 （ 6）打號機(jī)： 1 臺，用于在濾膜及濾袋上打號。 （ 7）鑷子： 1 個，用于夾取濾膜。 （ 8）超細(xì)玻

31、璃纖維濾膜：10片，對0.3 ^m標(biāo)準(zhǔn)粒子的截留效率不低于99%, 在氣流速度為 0.45m/s 時，單張濾膜阻力不大于 3.5kPa ，在同樣氣流速度下， 抽取經(jīng)高效過濾器凈化的空氣5h, 1 cm2濾膜失重不大于0.012 mg。 （ 9）濾膜袋： 10 個，用于存放采樣后對折的采塵濾膜，袋面印有編號、采 樣日期、采樣地點(diǎn)、采樣人等項欄目。 （ 10）濾膜保存盒：1 個，用于保存、運(yùn)送濾膜，保證濾膜在采樣前處于平 展不受折狀態(tài)。 （ 11）恒溫恒濕箱：1 臺，箱內(nèi)空氣溫度要求在15-30℃范圍內(nèi)可調(diào)，控溫 精度± 1℃；箱內(nèi)空氣相對濕度控制在（ 50± 5）％，恒溫恒濕箱可連續(xù)

32、工作。 （ 12）總懸浮顆粒物大盤天平：1 臺，用于大流量采樣器濾膜稱量，稱量范 圍》10g,感量1 mg,標(biāo)準(zhǔn)差0 2 mg。 （ 13）分析天平：1臺，用于中流量采樣濾膜稱量，稱量范圍》10g,感量 0.1 mg ,標(biāo)準(zhǔn)差0 0.2 mg。 四、實驗方法和步驟 1 .采樣器的流量校準(zhǔn) 新購置或維修后的采樣器在啟用前， 須進(jìn)行流量校準(zhǔn)。 其校準(zhǔn)方法按儀器使 用說明書進(jìn)行。 2 . 總懸浮顆粒物含量測試 （1）濾膜準(zhǔn)備：①每張濾膜均需用X光看片機(jī)進(jìn)行檢查，不得有針孔或任 何缺陷。 在選中的濾膜光滑表面的兩個對角上打印編號。 濾膜袋上打印同樣編號 備用。②將濾膜放在恒溫恒濕箱

33、中平衡24h,平衡溫度取15-30C中任一點(diǎn)，記 錄下平衡溫度與濕度。 ③在上述平衡長期保持下稱量濾膜， 大流量采樣器濾膜稱 量精確到1 mg,中流量采樣器濾膜稱量精確到0.1 mg。記錄下濾膜質(zhì)量mo（g） < ④稱量好的濾膜平展地放在濾膜保存盒中,采樣前不得將濾膜彎曲或折疊。 （2）安放濾膜及采樣：①打開采樣頭頂蓋，取出濾膜夾。用清潔干布擦去 采樣頭內(nèi)及濾膜夾上的灰塵。 ②將已編號并稱量過的濾膜絨面向上， 放在濾膜支 持網(wǎng)上，放上濾膜夾，對正，擰緊，使不漏氣。安裝好采樣頭頂蓋，按照采樣器 使用使用說明，設(shè)置采樣時間，即可啟動采樣。③樣品采完后，打開采樣頭，用 鑷子輕輕取下濾

34、膜，采樣面向上，將濾膜對折，放入號碼相同的濾膜袋中。取濾 膜時，如發(fā)現(xiàn)濾膜損壞，或濾膜上塵的邊緣輪廓不清晰、濾膜安裝歪斜（說明漏 氣） ，則本次采樣作廢，需重新采樣（記錄表格見附錄C） 。 （ 3）塵膜的平衡及稱量：塵膜在恒溫恒濕箱中，與二次濾膜平衡條件相同 的溫度、濕度下，平衡24h0在上述平衡條件下稱量濾膜，大流量采樣器濾膜稱 量精確到1 mg,中流量采樣器濾膜稱量精確到0.1 mg。記錄下濾膜質(zhì)量 m（g） （記錄表格見附錄D）。濾膜增重，大流量濾膜不小于100 mg,中流量濾膜不小 于 10 mg。 （ 4）計算： 式中： t ――累積采樣時間， min； QN——采

35、樣器平均抽氣流量，即式（1-3）或式（1-4） Qn或QMn的計算值; K-―常數(shù)，大流量采樣器 K=1x 106,中流量采樣器K=1x 1090 （ 5）測試方法的再現(xiàn)性：當(dāng)兩臺總懸浮顆粒物采樣器安放位置相距不大于 4m,不少于2m時，同時采樣測定總懸浮顆粒物含量，相對偏差不大于15%。 五、數(shù)據(jù)記錄與處理 按下表進(jìn)行。 六、問題分析與討論 1 .大氣環(huán)境中的TSP 的主要污染來源有哪些？ 2 .大氣環(huán)境中的TSP有哪些危害？ 3 .如何預(yù)防TSP 的污染？ 實驗四 空氣中甲醛污染的測定監(jiān)測 一、目的要求 室內(nèi)空氣污染對人體健康的影響最為顯著， 與大氣環(huán)境相比有其特殊

36、性。 室 內(nèi)空氣污染監(jiān)測是評價居住環(huán)境的一項重要工作。 本實驗選擇剛裝修完和裝修已久的不同房間， 或者在一個剛裝修完房間的不 同通風(fēng)條件下，進(jìn)行采樣分析。通過本實驗達(dá)到以下目的： （ 1）掌握酚試劑分光光度法測定空氣中甲醛濃度的方法； （ 2）初步了解影響室內(nèi)空氣質(zhì)量的因素。 二、基本原理 甲醛與酚試劑反應(yīng)生成嗪， 在高鐵分子存在下， 嗪與酚試劑的氧化產(chǎn)物反應(yīng) 生成藍(lán)綠色化合物，在波長630nm 處，用分光光度法測定。 采樣體積為5mL時，村法檢出限為0.02 Ng/m3,當(dāng)采樣體積為10L時，最 低檢出濃度為0.01mg/m3。 三、實驗儀器和試劑 1．儀器 （ 1）

37、大型氣泡吸收管： 10 只， 10mL 。 （ 2）空氣采樣器：1 臺，流量范圍 0-2L/min 。 （ 3）具塞比色管：10 只，10mL 。 （ 4）分光光度計：1 臺。 2．試劑 （1）吸收液：稱取0.10g 酚試劑（3-甲基 -苯并噻唑胺，C6H4SN（CH3）C： NNH2.HC1,簡稱MBTH）,溶于水中，稀釋至100mL,即為吸收原液，貯存于 棕色瓶中，在冰箱內(nèi)可以穩(wěn)定3 天。采樣時取5.0mL 原液加入95mL ，即為吸收 液。 （2）硫酸鐵銨溶液（10g/L） ：稱取1.0g 硫酸鐵銨，用 0.10mol/L 鹽酸溶液 溶解，并稀釋至100mL 。 （

38、3）硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.10mol/L）:稱取26g硫代硫酸鈉（Na2s2O3.5H2O） 和 0.2無水碳酸鈉溶于 1000mL 水中，加入 10mL 異戊醇，充分混合，貯存于棕 色瓶中。 （ 4 ）甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液：量取10mL 濃度為36％ -38％的甲醛，用水稀釋至 500mL,用碘量法標(biāo)定甲醛溶液濃度。使用時，先用水稀釋至每毫升含10.0 Ng 甲醛的溶液，然后立即吸收10.00 mL 此稀釋液于 100容量瓶中，加 5.0 吸收原 液，用水稀釋至標(biāo)線。此溶液每毫升含1.0 Ng甲醛。放置30min后，用此溶液 配制標(biāo)準(zhǔn)色列，此標(biāo)準(zhǔn)溶液可穩(wěn)定24h。 標(biāo)定方法：吸取5.

39、00mL甲醛溶液于250mLM量瓶中，加入40.00mL0.10mol/L 碘溶液，立即逐滴加入濃度為30%的氫氧化鈉溶液，至顏色褪至淡黃色為止。放 置10min,用5.0mL鹽酸溶液（1:5）酸化（空白滴定時需多加 2mL。置暗處放 10min,加入100-150mL水，用0.1mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡黃色， 加 1.0mL新配制的5%￡粉指標(biāo)劑，繼續(xù)滴定至藍(lán)色剛剛褪去。 加取5mLzK,同上述方法進(jìn)行空白滴定。 按下式計算甲醛溶液濃度： 式中： f ――被標(biāo)定的溶液的濃度， g/L ； V。、V——分別為滴定空白溶液、甲醛溶液所消耗的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液體 積， m

40、L； cNa2S2O3 ――硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，； 15.0 ――與 1L 1mol/L 的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液等當(dāng)量的甲醛質(zhì)量， g。 四、采樣與測定 1 .采樣 用內(nèi)裝5.00mL吸收液的氣泡吸收管，以0.5l/min流量，采氣10L 2 . 測定 （1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取8支10mL比色管，按表2-1配制標(biāo)準(zhǔn)系列。然后 向各管中加入1%硫酸鐵錢溶液0.40mL,搖勻。在室溫下（8-35 C）顯色20min。 在波長630nm處，用1cm比色皿，以水作為參比溶液，測定吸光度。以吸光度對 甲醛含量（①g）,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 （ 2）樣品的測定：采樣后，將樣品溶液移入比色皿中，

41、用少量吸收液洗滌 吸收管、洗滌液并入比色兒，使總體積為5.0mL。室溫下（8-35 C）放置80min 后，以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。 表 2-1 甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列 管號01234567 /mL 00.10 0.200.40 0.60 0.801.001.50 吸收液 /mL 5.00 4.90 4.80 4.60 4.40 4.20 4.00 3.50 甲醛含量/ ag 0.10 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.50 mg/m3； 五、實驗結(jié)果計算 式中： f ――空氣中甲醛的含量， mi樣品中甲醛含量，g g;

42、 Vn標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下米樣體積，L 六、實驗注意事項 1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時與樣品測定時溫差不超過2℃。 （ 2） 標(biāo)定甲醛時，在搖動下逐滴加入 30％氫氧化鈉溶液， 至顏色明顯減退， 再搖片刻，待褪成淡黃色，放置后應(yīng)褪至無色。若堿加入量過多，則5mLit酸溶 液（ 1： 5）不足以使溶液酸化。 （ 3）當(dāng)與二氧化硫共存時，會使結(jié)果偏低?？梢栽诓蓸訒r，使氣樣先通過 裝有硫酸錳濾紙的過濾器，排除干擾。 實驗五 大氣環(huán)境中氮氧化物的測定 ――鹽酸萘乙二胺分光光度法 一、目的要求 空氣中氮氧化物的種類很多，如亞硝酸、硝酸、N2O、 NO、 NO2、 N2O4、 N2O5 等。其中NO

43、2 和 NO 是大氣中的主要污染物質(zhì)。通常所指的氮氧化物即為 中NO2和NO。 測定環(huán)境中的氮氧化物常用的化學(xué)分析法為鹽酸萘乙二胺分光光度法， 其采 樣與顯色同時進(jìn)行，操作簡便、方法靈敏，目前被國內(nèi)外普遍采用。 鹽酸萘乙二胺分光光度法有兩種采樣方法： 方法一吸收液用量少， 適用于短 時間采樣，測定空氣中氮氧化物的短時濃度；方法二吸收液用量大，適用于 24 小時連續(xù)采樣，測定空氣中氮氧化物的日平均濃度。 二、實驗原理 二氧化氮被吸收液吸收后， 生成亞硝酸和硝酸。 其中亞硝酸與對氨基苯磺酸 起重氮化反應(yīng)，再與鹽酸萘乙二胺偶合，呈玫瑰紅色，根據(jù)顏色深淺，于波長 540 處用分光光

44、度法測定。反應(yīng)方程式如下： 空氣中的氮氧化物包括NO 及 NO2 等。在測定氮氧化物時，應(yīng)先用三氧化 銘將NO氧化成NO2,然后測定NO2的濃度。 短時間采樣（方法一）檢出限為0.01 Ng/mL （按與吸光度0.01相對應(yīng)的亞 硝酸根含量計） ，當(dāng)采樣體積為 6L 時，氮氧化物（以二氧化氮計）的最低檢出 濃度為0.01 mg/m3。24采樣（方法二）檢出限為0.01 mg/L （按與吸光度0.01相 對應(yīng)的亞硝酸根含量計） ，當(dāng)用 50 mL 吸收液， 24 h 采氣樣 288 L 時，氮氧化物 （發(fā)二氧化氮計）的最低檢出濃度為0.002mg/m3。 三、實驗儀器和試劑 1．儀

45、器 （ 1）多孔玻板吸收管： 10 只，用于短時間采樣， 10 mL。 （ 2）多孔板吸收瓶：10 個，用于 24 h 采樣，75mL。 （ 3）雙球玻璃管：10 只。 （ 4）恒溫自動連續(xù)空氣采樣器：1 臺，流量范圍 0-1 L/min 。 （ 5）分光光度計：1 臺。 （ 6）具塞比色管：10 只。用于短時間采樣，10 mL。 （ 7）具塞比色管： 10 只。用于 24 h 采樣， 25 mL。 （ 8）容量瓶： 10 只。用于 24 h 采樣， 50 mL。 （ 9）移液管：若干，各種。 2．試劑 所用試劑 均用不含亞硝酸根的重蒸餾水配制， 即所配吸收液的吸光度不超

46、 過 0.005。 （1）吸收原液：稱取5.0 g對氨基苯磺酸，通過玻璃小漏斗直接加入1000 mL容量瓶中，加入50 mL冰乙酸和900 mL水的混合溶液，蓋塞振搖使其溶解， 待對氨基苯磺酸完全溶解后，加入 0.050 g 鹽酸萘乙二胺溶解后，用水稀釋至標(biāo) 線。此為吸收原液，貯于棕色瓶中，在冰箱中可保存兩個月。保存時岢用聚四氟 乙烯生料帶密封瓶口，以防止》仰不愧天民吸收液接觸。 （ 2）采樣用吸收液：按4 份吸收原液和 1 份水的比例混合。 （ 3）三氧化兒－海砂（河砂）氧化管：篩取20-40 目海砂（河砂） ，用鹽酸 溶液（1:2）浸泡一夜，再用水沖洗至中性，烘干。把三氧化銘及海

47、砂（河砂） 按質(zhì)量比1: 20混合，加少量水調(diào)勻，放在紅外燈下或烘箱里于105c烘干，烘 干過程中應(yīng)攪拌幾次。制備好的三氧化銘-海砂是松散的， 若黏在一起，說明三 氧化銘比例太大，可適當(dāng)增加一些砂子，重新制備。 稱取約三氧化銘-海砂裝入雙球玻璃管中，兩端用少量脫指棉塞好，并用乳 膠管或塑料管制的小帽將密封。使用時氧化管與吸收管之間用一小段乳膠管連 接，采集的氣體盡可能少和乳膠管接觸，以防止氮氧化物被吸附。 （4）亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取 0.1500 g粒狀亞硝酸鈉（NaNO2,預(yù)先在 干燥器內(nèi)放置24 h以上）,溶解于水，移入1000 mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線。 此溶液每毫升10

48、0.0仙g含亞硝酸根（NO2-）,貯存于棕色瓶并保存冰箱中，可穩(wěn) 定3個月。 （5）亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：臨用前，吸取5.00 mLE備7于100 mL容量瓶中， 用水稀釋至標(biāo)線。此溶液每毫升含 5.0 pg亞硝酸根（NG）。 四、采樣與測定 1 .采樣 短時間采樣：將一支內(nèi)裝5.00 mL吸收液的多孔玻板吸收管進(jìn)氣口與氧化管 連接，并使氧化管稍微向下傾斜，以免當(dāng)濕空氣將氧化劑（Cr2O3）弄濕時，污 染后面的吸收液。以0.2-0.3 L/min流量，避光采樣至吸收液呈微紅色為止， 記下 采樣時間，密封好采樣管，帶回實驗室，當(dāng)日測定。采樣時，若吸收液不變色， 米樣量應(yīng)不少于6L。 長時

49、間采樣：將一個內(nèi)裝50 mL吸收液的多孔玻板吸收瓶進(jìn)氣口與氧化 管連接，并使氧化管稍微向下傾斜，以免當(dāng)濕空氣將氧化劑（Cr2O3）弄濕時， 污染后面的吸收液。用恒溫、自動連續(xù)空氣采樣器以0.2 L/min流量采樣24h, 采氣體積約為288 Lo采樣后，將樣品帶回實驗室，如當(dāng)天不測定，樣品溶液保 存在冰箱中，于3天內(nèi)測定。 2 .測定 （1）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別取7支10 mL或25 mL具塞比色管，按表1-1和 表1-2分別配制短時間和24 h采樣的標(biāo)系列。 二 呂勺 0 1 2 3 4 5 6 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液/mL 0 0.10 0.20 0.30

50、0.40 0.50 0.60 吸收原液/mL 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 水/mL 1.00 0.90 0.80 0.70 0.60 0.50 0.40 亞硝酸根含量/pg 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 表1-1亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列（短時間采樣） 表1-2亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列（24 h采樣） 二 呂勺 0 1 2 3 4 5 6 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液/mL 0 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 吸收原液/mL 20.00

51、 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 水/mL 5.00 4.50 4.00 3.50 3.00 2.50 2.00 亞硝酸根含量/pg 0 2.5 5.0 7.5 10.00 12.5 15.0 各管搖勻后，避開直射陽光，放置 15 min,在波長處540 nm,用1 cm比色 皿，以水為參比，測定吸光度。以吸光度對亞硝酸根含量（ Ng）,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 或用最小二乘法計算回歸方程式： 式中：y——標(biāo)準(zhǔn)溶7吸光度（A）與試劑空白液吸光度（Ao）之差； x——亞硝酸根含量，； b——回歸方程式的斜率； a——

52、回歸方程式的截距。 （2）樣品測定： ①對短時間采樣，采樣后，放置15 min,將樣品溶液移入1 cm比色皿中， 用繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測定試劑空白液和樣品溶液的吸光度。 若樣品沉淪的吸 光度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定上限，可用吸收液稀釋后，再測定吸光度，計算結(jié)果應(yīng) 乘以稀釋倍數(shù)。 ②對24 h采樣，采樣后，將樣品溶液移入 50 mL具塞比色管中或容量瓶中， 用少量吸收液洗滌吸收瓶，使樣品溶液定容至 50.0 mL混勻，放置。將樣品移 入1 cm比色皿，用繪制曲線的方法測定樣品溶液的吸光度。若樣品溶液的吸光 度超過曲線測定上限，可用吸收液稀釋后再測定吸光度。 五、實驗結(jié)果計算 式中：NO2—

53、—空氣中NO2的含量，mg/m3; A ——樣品溶液吸光度； A0 ——試劑空白液吸光度； BS ——校正因子(1/b); 0.76 ——(氣)換為(液)的系數(shù)； b ——回歸方程式的斜率； Vt ——樣品溶液總體積， VS ——測定時所取樣品溶液體積， Vn ——標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下的采樣體積 k ——采樣時溶液的體積與繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時溶液體積的比值，短時間采 樣為1,采樣時為2。 六、實驗注意事項 (1)吸收液應(yīng)避光，并避免長時間暴露于空氣中，以防止光照使吸收液顯 色或吸收空氣中的氮氧化物而使試劑空白值偏高。 (2)氧化管適于在相對濕度為 30%-70%時使用，當(dāng)空氣中相對

54、濕度大于 70%時，應(yīng)勤換氧化管；相對濕度小于 30%時，則在使用前用經(jīng)過水面的潮濕 空氣通過氧化管，平衡1小時。使用過程中，應(yīng)注意氧化管是否吸濕引起板結(jié)或 變綠。若板結(jié)，會使采樣系統(tǒng)阻力增大，影響流量；若普綠則表示氧化管已失效。 (3)亞硝酸鈉固體應(yīng)妥善保存。氧化成硝酸鈉或呈粉末狀的試劑都不適用 直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。若無顆粒狀亞硝酸鈉試劑，則可用高鈕酸鉀容量法標(biāo)定出亞 硝酸鈉貯備液的準(zhǔn)確濃度后，再稀釋成每毫升含 5.0 Ng亞硝酸根的標(biāo)準(zhǔn)溶液。 (4)在20c時，以5 mL樣品計，其標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率 b為(0.190 ±0.003)x10 6 吸光度/g ,要求截距的絕對值a 0.008,

55、若斜率達(dá)不到要求，應(yīng)檢查亞硝酸鈉 試劑的質(zhì)量及標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制，重新配制標(biāo)準(zhǔn)溶液；若截距達(dá)不到要求，應(yīng)檢查 蒸儲水及試劑質(zhì)量，重新配制吸收液。性能好的分光光度計的靈敏度高， 斜率略 高于0.193。 (5)吸收液若受三氧化銘污染，溶液呈黃棕色，該樣品應(yīng)報廢。 (6)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時，應(yīng)以均勻、緩慢的速度向各管中加亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使 用液，否則將影響曲線的特性。 （ 7） 空氣中二氧化硫濃度為氮氧化物濃度的 10 倍時， 對氮氧化物的測定無 干擾； 30 倍時，使顏色有少許減退。 實驗六 環(huán)境空氣中SO2 濃度的測定 ――鹽酸副玫瑰苯胺法 一、目的要求 空氣中的硫氧化物有二氧化硫、硫

56、化氫、二硫化碳、羰甚佳硫、硫酸、硫酸 鹽及微量有機(jī)硫等。 在環(huán)境監(jiān)測中， 對二氧化硫的測定具有代表性， 其污染源多 來自煤和礦物油的燃燒等。 空氣中二氧化硫的測定方法較多， 主要有分光光度法、 紫外熒光法、 氣相色 譜法、電導(dǎo)法、庫侖滴定法等。下面重點(diǎn)鹽酸副玫瑰苯胺法介紹。 二、實驗原理 鹽酸副玫瑰苯胺法系國際上采用的標(biāo)準(zhǔn)方法。 其靈敏度高， 適用于瞬時采樣， 樣品采集后穩(wěn)定。缺點(diǎn)是使用四氯汞鉀吸收液，毒性較大。 該法有兩種操作方法： 方法一所用的鹽酸副玫瑰苯胺使用液含磷酸量少， 最 后溶液的 pH 為 1.6± 0.1，其靈敏度較高，但試劑空白值高；方法二所用的鹽酸 副玫

57、瑰苯胺使用液含磷量多，最后溶液的 pH 為 1.2± 0.1，其靈敏度低，但試劑 空白值低。方法一的溶液呈紅紫色，最大吸收峰在548 nm 處；方法二的溶液呈 藍(lán)紫色，最大吸收峰在575 nm 處。目前我國多采用方法二。 二氧化硫被四氯汞鉀溶液吸收形成穩(wěn)定的絡(luò)合物， 再與甲醛及副玫瑰苯受作 用，生成玫瑰紫色化合物。在波長548nm 處（方法一）或575 nm 處（方法二） 測定，根據(jù)顏色深淺比色定量。反應(yīng)式如下： [HgCl4]2- + SO2 + H2O - [HgCl2SO3]2- + 2 Cl-+ 2 H+ [HgCl2SO3]2- + HCHO + 2 H+ f HgCl

58、2 + HOCHSOH 最低檢出限： 方法一：當(dāng)采樣體積為30L時，最低檢出濃度為0.025 Ng/m3。 方法二：當(dāng)采樣體積為 10L 時，最低檢出濃度為0.04mg/m3。 三、實驗儀器和試劑 1．儀器 （ 1）多孔玻板吸收管： 10 個，用于短時間采樣， 10mL ?；蚨嗫装逦掌浚? 10個，用于24h采樣，75-125mL （2）空氣采樣器：1 臺，流量0-1L/min 。 （ 3）分光光度計：1 臺。 （4）具塞比色管：10 mL， 10只。 （5）容量瓶：25 mL， 10個。 （ 6）移液管：若干，各種。 2．試劑 （1）四氯甲汞（TCM）吸收液（0.

59、04mol/L）:稱取的 10.9 g 的 HgCl2、6.0 g 的KCl和0.070 g的NazEDTA,溶解于水，稀釋至1000 mL,在密閉容器中貯存， 可 6 穩(wěn)定個月，如發(fā)現(xiàn)有沉淀，不可再用。 （ 2）甲醛溶液（2.0 g/L） ：每天新配。 （3）氨基磺酸胺溶液（6.0 g/L） ：每天新配。 （4）鹽酸副玫瑰苯胺（PRA ，即對品紅）貯備液（2 g/L ） ：稱取經(jīng)提純的 0.20g對品紅，溶解于100 mL濃度為1.0 mol/L的鹽酸溶液中。 （5） 對品紅使用液（0.016%） ： 吸取 2 g/L 對品紅貯備液20.00 mL 于 250 mL 容量瓶中，力

60、口 3 mol/L磷酸溶液25 mL,用水稀釋至標(biāo)線，至少放置 24h方可使 用，存于暗處，可穩(wěn)定9 個月。 （6）碘貯備液（0.010 mol/L）。 （7）碘溶液（0.010 mol/L）。 （ 8）淀粉指示劑（ 3 g/L ） 。 （9）碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.0 g/L）:用優(yōu)級純KIO3于110c烘干2 h后配制。 （ 10）鹽酸溶液（1.2 mol/L ） 。 （ 11）硫代硫酸鈉溶液（ 0.1 mol/L ） ：用碘量法標(biāo)定其濃度。 （ 12）硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.01mol/L）。 （13）亞硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.20 g的Na2SO3及NazEDTA,溶解于2

61、00 mL 新煮沸并已冷卻的水中，輕輕搖勻，放置2-3h 后標(biāo)定，此溶液相當(dāng)于每毫升含 320-400仙 g 的 SO20 （ 14）磷酸溶液（3mol/L ） 。 四、采樣與測定 1．采樣 短時間采樣：20 min-1 h,采用多孔玻板吸收管，內(nèi)裝10 mL （方法一）或5 mL （方法二）四氯甲汞吸收液，流量為 0.5 L/min,采樣體積依大氣中SO2濃度 增減。本法可測25-1000仙g/m3范圍的SO2。如采用方法二，一般避光采樣10-20L。 長時間采樣：24 h,采用125 mL多孔玻板吸收瓶，內(nèi)裝50 mL甲氯汞鉀吸 收液，采樣流量為 0.2-0.3 L/min

62、。 2．測定 （ 1）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：配制0.10%亞硫酸鈉水溶液，用碘量標(biāo)定其濃度，用 四氯汞鉀溶液稀釋，配成2.0Ng/mL的SO2標(biāo)準(zhǔn)溶液，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。方法 一、方法二的標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍分別為：以 25 mL計為1-20仙g,以7.5 mL計 為1.2-5.4仙g0斜率分別為0.030±0.002及0.077± 0.005。試劑空白值，方法一 不應(yīng)大于吸光度0.170，方法二不應(yīng)大于吸光度0.050。 （ 2）樣品的測定：分別按下述步驟進(jìn)行。 方法一： 采樣后將樣品放置20 min。取10.00 mL樣品移入25 mL容量瓶， 加入1.00 mL 0.6%氨基磺酸胺?§液，

63、放置10min。再力口 2.00 mL 0.2%甲醛溶液及 5.00 mL 0.016%對品紅溶液，用水稀釋至標(biāo)線。 于 20℃顯色30 min， 生成紫紅色 化合物，用1 cm比色皿，在波長548 nm處，以水為參比，測定吸光度。 方法二： 采樣后將樣品放置20 min。 取 5 mL 樣品移入比色管， 加入 0.50mL 0.6%氨基磺酸胺溶液，放置10 min 后，再加 0.50 mL 0.2%甲醛溶液及1.50 mL 0.016%對品紅使用液，搖勻。于 20c顯色20 min,生成藍(lán)紫色化合物，用1 cm 比色皿，于 575 nm 波長處，以水作參比，測定吸光度。 數(shù)據(jù)記錄格

64、式見附錄E。 在測定每批樣品時，至少要加入一個已知濃度的SO2 控制樣，同時測定，以保證計算因子（標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率的倒數(shù)）的可靠性。 五、實驗結(jié)果計算 氣體中的濃度由下式計算： 式中： ―― SO2 濃度，mg/m3； A——樣品顯色液吸光度； Ao——試劑空白液吸光度； B 0——計算因子，Ng/吸光度； Vn 換算成標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下的采樣體積, L。 六、實驗注意事項 (1)溫度對顯色有影響：溫度越高，空白值越大，溫度高時發(fā)色快，褪色 也快，最好使用恒溫水浴控制顯色溫度。 樣品的測定溫度和繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的溫度 之差不應(yīng)超過± 2C。 (2)對品紅試劑必須提純后方可使用，否則期

65、中所含雜質(zhì)會引起試劑空白 值增高，使方法靈敏度降低。0.2 %對品紅溶液現(xiàn)已有經(jīng)提純合格的產(chǎn)品出售， 可直接購買使用。 (3)四氯汞鉀溶液為劇毒試劑，使用時應(yīng)小心。如濺到皮膚上，應(yīng)立即用 水沖洗。使用過的廢液要集中處理，以免污染一半。含四氯汞鉀廢液的處理方法： 在每升廢液中加約10g磷酸鈉至中性，再加10 g鋅粒，于黑布罩下攪拌24 h后, 將上層精液倒入玻璃缸內(nèi)，滴加飽和硫化鈉溶液，至不再產(chǎn)生沉淀為止，棄去溶 液，將沉淀物轉(zhuǎn)入一適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)貯存匯總處理。此法可去除廢水中99%的汞。 (4)對本法有干擾物質(zhì)還有氮氧化物、臭氧、鈕、鐵、銘等。采樣后放置 20 min使臭氧自行分解；加入氨基

66、磺酸俊可消除氮氧化物的干擾； 加入磷酸和乙 二胺四乙酸二鈉鹽可消除或減小某些重金屬的干擾。 附錄E SO2濃度測定記錄表 測定次數(shù) 米樣流里/ (L,min-1) 采樣時間/ * Min 采樣體積/ Vn/L 樣品 吸光度 空白液 吸光度 SO2濃度 p /(mg.m-3) 注：*中流量采樣時間單位為min,大流量采樣時間單位則為h 實驗七、旋風(fēng)除塵器性能實驗 一、實驗?zāi)康? 1、掌握除塵器性能測定的基本方法。 2、了解除塵器運(yùn)行工況對其效率和阻力的影響。 3、了解煙塵采樣器的工作原理和使用方法。 二、實驗要求 1、實驗前認(rèn)真閱讀實驗教材，掌握與實驗相關(guān)的基本理論知識。 2、熟練掌握實驗內(nèi)容、方法和步驟，按規(guī)定進(jìn)行實驗操作。 3、觀察旋風(fēng)除塵器內(nèi)氣流流動現(xiàn)象，在某一工況下測定除塵器處理風(fēng)量、 除塵器的壓力損失以及除塵效率。 4、記錄、分析、計算實驗數(shù)據(jù)，提交實驗報告。 三、實驗儀器、 1、除塵器性能測定實驗臺、2、皮托管、3微壓計、4、天平（精度0.01克）、 4、秒表、5、煙塵采樣器，6、3#濾筒若