2021版高考生物一輪復(fù)習(xí) 課后限時(shí)集訓(xùn)37 無(wú)菌操作技術(shù)實(shí)踐 蘇教版

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1、 課后限時(shí)集訓(xùn)37 無(wú)菌操作技術(shù)實(shí)踐 1．(2019·哈爾濱三中高三期末)下表是某種微生物培養(yǎng)基的配方表，請(qǐng)據(jù)表回答： 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 瓊脂 水 0.5 g 1 g 0.5 g 2 g 200 mL (1)此培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分有五類，其中蛋白胨提供的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是____________。 (2)在培養(yǎng)基制備過(guò)程中，各種成分溶化后分裝前，必須進(jìn)行的操作是____________。 (3)微生物培養(yǎng)最基本的要求是無(wú)菌操作，下列對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌消毒方法的正確順序依次是____________(填序號(hào))。 ①化學(xué)消毒?、诟邏?/p>

2、蒸汽滅菌　③干熱滅菌?、茏贤鉁缇、葑茻郎缇、薨褪舷痉? (4)巴氏消毒法與煮沸消毒法相比，其優(yōu)點(diǎn)是______________。 (5)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，最好選擇菌落數(shù)在________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。若統(tǒng)計(jì)出在一稀釋倍數(shù)為105的平板上的平均菌落數(shù)為30，所用稀釋液的體積為0.2 mL，則每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)為_(kāi)_______個(gè)。 (6)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是________。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌落，第二劃線區(qū)域的第一條線上無(wú)菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無(wú)菌落可能的操作失誤有___________________

3、_______________。 [解析]　(1)微生物培養(yǎng)基的成分包括碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子。蛋白胨可以為微生物提供碳源、氮源和生長(zhǎng)因子。 (2)配制培養(yǎng)基時(shí)為保證無(wú)菌，各種成分在溶化后分裝前必須進(jìn)行的操作是調(diào)節(jié)pH，然后再滅菌。 (3)培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌，培養(yǎng)皿常用干熱滅菌法滅菌，接種環(huán)常用灼燒滅菌，雙手應(yīng)用化學(xué)藥劑消毒，空氣可用紫外線殺菌，牛奶常用巴氏消毒法消毒，故對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌消毒方法的正確順序依次是②③⑤①④⑥。 (4)與煮沸消毒法相比，巴氏消毒法在較低溫度下，既可以殺死病菌，又能保持物品中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少和風(fēng)

4、味不變。 (5)使用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。若統(tǒng)計(jì)出在一稀釋倍數(shù)為105的平板上的平均菌落數(shù)為30，所用稀釋液的體積為0.2 mL，則每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)為30÷0.2×105＝1.5×107(個(gè))。 (6)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是接種環(huán)。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無(wú)菌落可能的操作失誤有：①接種環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始。 [答案]　(1)碳源、氮源、生長(zhǎng)因子　(2)調(diào)節(jié)pH　(3)②③⑤①④⑥　(

5、4)在達(dá)到消毒目的的同時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少　(5)30～300　1.5×107　(6)接種環(huán)　接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始 2．(2019·安徽省定遠(yuǎn)重點(diǎn)中學(xué)高三模擬)下表所示為某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基配方，請(qǐng)結(jié)合所學(xué)知識(shí)，回答下列相關(guān)問(wèn)題。 成分 含量 蛋白胨 10.0 g 乳糖 5.0 g 蔗糖 5.0 g K2HPO4 2.0 g 顯色劑(伊紅美藍(lán)) 0.2 g 瓊脂 12.0 g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL (1)根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基；若要分離能分解尿素的細(xì)菌，需對(duì)培養(yǎng)基做出

6、的最關(guān)鍵的調(diào)整是__________________；若還需鑒定分解尿素的細(xì)菌，需做出的調(diào)整是__________________。 (2)從培養(yǎng)基的成分上看，大腸桿菌的同化類型為_(kāi)_____。該培養(yǎng)基能否分離篩選出大腸桿菌？為什么？______________________________________。 (3)在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物時(shí)，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是____________，紫外線可對(duì)空氣進(jìn)行滅菌的原因是____________________________________。 (4)某同學(xué)嘗試純化大腸桿菌，其中一個(gè)平板的菌落分布如圖，推測(cè)該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是__

7、__________________________。 [解析]　(1)伊紅美藍(lán)是鑒定大腸桿菌的試劑，因此該培養(yǎng)基從用途上屬于鑒別培養(yǎng)基；若要分離能分解尿素的細(xì)菌，則需要保證培養(yǎng)基中以尿素為唯一氮源，即將蛋白胨換成尿素；若要鑒定分解尿素的細(xì)菌，需要使用酚紅指示劑。 (2)大腸桿菌需要從培養(yǎng)基中獲得碳源，因此其同化作用類型是異養(yǎng)型；由于表格中的培養(yǎng)基中的碳源種類很多，可供多種微生物生存，因此該培養(yǎng)基不能分離篩選出大腸桿菌。 (3)微生物培養(yǎng)時(shí)，關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的感染；空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能讓蛋白質(zhì)變性，同時(shí)還能破壞DNA的結(jié)構(gòu)。 (4)由圖乙可知，該同學(xué)采用的是稀

8、釋涂布平板法，但菌落比較集中，沒(méi)有分散開(kāi)來(lái)，可能是涂布不均勻?qū)е碌摹? [答案]　(1)鑒別　將蛋白胨換成尿素　將伊紅美藍(lán)換成酚紅　(2)異養(yǎng)型　不能，原因是培養(yǎng)基中的碳源種類很多，可供多種微生物生存　(3)防止外來(lái)雜菌的入侵　紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能破壞DNA的結(jié)構(gòu)　(4)涂布不均勻 3．(2019·山西太原高三模擬)實(shí)驗(yàn)室有4個(gè)人培養(yǎng)的細(xì)胞相繼污染，污染類型相同，細(xì)胞污染后快速變混，大量的團(tuán)狀圓泡狀的微生物懸浮，中間透亮。請(qǐng)依據(jù)細(xì)胞外觀形態(tài)特征鑒定是細(xì)菌污染還是酵母菌污染，并提出預(yù)防再次污染的方案。 (1)鑒定細(xì)菌污染還是酵母菌污染，在顯微鏡下觀察，可根據(jù)______________

9、____進(jìn)行鑒定；也可以肉眼觀察菌落的________等方面來(lái)鑒定(至少答出兩項(xiàng))。 (2)①對(duì)于原有的材料、試劑等，應(yīng)如何處理？ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________。 ②再一次實(shí)驗(yàn)操作中應(yīng)注意__________________________。 ③制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，操作順序?yàn)椋? _________________________________________

10、____________________ _____________________________________________________________。 (3)除上述外，若家常泡菜制作時(shí)，亞硝酸鹽含量先變高后變低，含量自然變低的原因是________________________________。 根據(jù)這個(gè)道理，我們?nèi)斯そ档推浜康拇胧┦莀_______________。 [解析]　(1)細(xì)菌為原核細(xì)胞，酵母菌為真核細(xì)胞，顯微鏡觀察有無(wú)成形的細(xì)胞核可鑒定二者。也可依據(jù)菌落的特征鑒定，即菌落的形狀、大小、隆起程度、顏色等。 (2)①因?yàn)樵瓉?lái)的材料、試劑均已污染，因此應(yīng)放

11、棄所有培養(yǎng)液、胰蛋白酶，為防止造成二次污染，應(yīng)對(duì)這些材料、試劑等滅菌處理。 ②再一次實(shí)驗(yàn)操作中應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室滅菌程序要正確。 ③制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的操作順序?yàn)椋河?jì)算、稱重、溶化、滅菌、倒平板。 (3)由于亞硝酸鹽具有不穩(wěn)定、易氧化成硝酸鹽等特點(diǎn)，在制作泡菜時(shí)亞硝酸鹽含量會(huì)自然變低?？赏ㄟ^(guò)加熱等措施降低其含量。 [答案]　(1)有無(wú)成形的細(xì)胞核　形狀、大小、隆起程度、顏色(至少答兩項(xiàng)) (2)①將所有培養(yǎng)液，胰蛋白酶等進(jìn)行滅菌處理并丟棄 ②實(shí)驗(yàn)室滅菌程序(高壓鍋的溫度，是否質(zhì)檢過(guò)，滅菌周期的持續(xù)時(shí)間等)正確(或保證無(wú)菌操作)?、塾?jì)算、稱重、溶化、滅菌、倒平板 (3)亞硝酸鹽不

12、穩(wěn)定、易氧化成硝酸鹽等　對(duì)腌制液加熱等 4．(2019·濮陽(yáng)市高三二模)英國(guó)每日郵報(bào)報(bào)道，科研人員偶然篩選出一種可以“吃塑料”的細(xì)菌(F6菌)，它能夠在30 ℃下經(jīng)過(guò)6個(gè)星期完全降解PET(聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯)薄膜。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，這種細(xì)菌以PET作為碳源，其中ISF6酶在降解過(guò)程中起著決定性的作用。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)根據(jù)報(bào)道信息可知，要篩選出F6菌，必須配制以________作為唯一碳源的固體培養(yǎng)基，該選擇培養(yǎng)基中應(yīng)添加________使其呈固態(tài)，在培養(yǎng)基各成分溶化后分裝前，應(yīng)進(jìn)行________和滅菌操作。 (2)為保證培養(yǎng)基上能均勻地生長(zhǎng)出一層F6菌，首先需要用______

13、__法對(duì)樣液進(jìn)行梯度稀釋，然后取不同稀釋度的樣品0.1 mL涂布到固體培養(yǎng)基上，將平板________后放入恒溫箱培養(yǎng)。PET粉末呈白色，不溶于水，F(xiàn)6菌將PET降解后，高效降解PET的F6菌菌落周圍會(huì)出現(xiàn)________。若接種24 h后發(fā)現(xiàn)某個(gè)培養(yǎng)基上沒(méi)有出現(xiàn)任何菌落，則最可能的原因是______________。 (3)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行________處理后，才能扔掉。 [解析]　(1)固體培養(yǎng)基需加入瓊脂等凝固劑，F(xiàn)6菌以PET作為碳源，因此其培養(yǎng)基應(yīng)以PET為唯一碳源來(lái)源。在培養(yǎng)基各成分溶化后分裝前，應(yīng)先調(diào)pH再滅菌。 (2)為保證培養(yǎng)基上能均勻地生長(zhǎng)出單層F

14、6菌菌落，采用稀釋涂布平板法對(duì)樣液進(jìn)行梯度稀釋。為避免皿蓋上的水滴落入培養(yǎng)基及皿底上培養(yǎng)基中水分的迅速蒸發(fā)，應(yīng)對(duì)平板進(jìn)行倒置。高效降解PET的F6菌菌落周圍會(huì)出現(xiàn)直徑大的透明圈。若涂布器灼燒滅菌后未經(jīng)冷卻便進(jìn)行涂布操作，則會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基上不出現(xiàn)任何菌落。 (3)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理后，才能倒掉。 [答案]　(1)PET　瓊脂　調(diào)pH　(2)稀釋涂布平板　倒置　直徑大的透明圈　涂布器未冷卻　(3)滅菌 5．(2019·石嘴山市高三期末)對(duì)硝基苯酚(PNP)的顏色為黃色，若其被分解則顏色消失，屬于硝基苯酚類有機(jī)化合物的一種，主要來(lái)源于農(nóng)藥、醫(yī)藥、染料、塑料等生產(chǎn)企業(yè)的排放

15、，并廣泛分布于環(huán)境中，對(duì)植物、微生物和動(dòng)物均有毒性。某生物興趣小組提出從污水廠曝氣池長(zhǎng)期馴化的污泥中分離出對(duì)硝基苯酚降解菌并研究其降解特性。回答下列問(wèn)題： (1)分離對(duì)硝基苯酚降解菌的選擇培養(yǎng)基成分有NH4NO3、KH2PO4、K2HPO4、NaCl、FeSO4、MgSO4·7H2O、PNP和瓊脂，試從成分分析該選擇培養(yǎng)基能起到篩選作用的原因是______________________________________。 (2)利用________________(填接種方法)分離、純化可得到單一的對(duì)硝基苯酚降解菌菌落，可以將在菌落周圍是否產(chǎn)生________作為篩選標(biāo)記。 (3)若分離

16、純化后得到了兩個(gè)菌落，這兩個(gè)菌落的形態(tài)、大小、光澤度、顏色等________(填“一定”或“不一定”)相同。 (4)研究不同的糖類對(duì)硝基苯酚降解菌降解PNP的效率的影響，得到的結(jié)果如表所示： 加入糖類 葡萄糖 蔗糖 淀粉 麥芽糖 空白對(duì)照 降解率 99% 98% 70% 95% 90% 從表中可得出的結(jié)論是_______________________。 [解析]　(1)對(duì)硝基苯酚(PNP)屬于硝基苯酚類有機(jī)化合物的一種，有機(jī)物含碳，同時(shí)培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基需要具有碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽和水。故分離對(duì)硝基苯酚降解菌的選擇培養(yǎng)基成分有NH4NO3、KH2PO4、K2HP

17、O4、NaCl、FeSO4、MgSO4·7H2O、PNP和瓊脂；該選擇培養(yǎng)基能起到篩選作用的原因是PNP作為培養(yǎng)基中唯一的碳源可以將能降解PNP的細(xì)菌分離出來(lái)。 (2)常用的接種微生物的方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，故利用稀釋涂布平板法或平板劃線法分離純化，可得到單一的對(duì)硝基苯酚降解菌菌落。對(duì)硝基苯酚(PNP)顏色為黃色，若被分解則顏色消失，故可以將在菌落周圍產(chǎn)生透明圈作為篩選標(biāo)記。 (3)若分離、純化后得到了兩個(gè)菌落，這兩個(gè)菌落的形態(tài)、大小、光澤度、顏色等不一定相同。 (4)從表中可看出加入葡萄糖、蔗糖和麥芽糖的降解率均高于空白對(duì)照組的，加入淀粉的降解率低于空白對(duì)照組的，故可以得出

18、的結(jié)論是除淀粉外，葡萄糖、蔗糖和麥芽糖均可促進(jìn)PNP的降解。 [答案]　(1)PNP作為培養(yǎng)基中唯一的碳源可以將能降解PNP的細(xì)菌分離出來(lái)　(2)稀釋涂布平板法或平板劃線法　透明圈　(3)不一定　(4)除淀粉外，葡萄糖、蔗糖和麥芽糖均可促進(jìn)PNP的降解 6．(2019·貴陽(yáng)高三質(zhì)檢)脂肪酶能催化天然植物油脂(甘油三酯)水解，產(chǎn)生脂肪酸和甘油。研究人員欲從某地環(huán)境中篩選含低溫堿性脂肪酶的菌株，以溴甲酚紫為指示劑(溴甲酚紫隨油脂分解紫色變淺)進(jìn)行系列實(shí)驗(yàn)操作。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)自然界中能合成低溫堿性脂肪酶的微生物較少，研究人員應(yīng)在____________________的環(huán)境取土樣。

19、 (2)若樣品中含油脂分解菌很少，應(yīng)配制________(填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)。 (3)為了篩選出菌株，可將適量的__________________指示劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色一段時(shí)間后，如果菌落周圍的現(xiàn)象是________，則說(shuō)明此種菌能夠產(chǎn)生脂肪酶。 (4)研究人員在分別確定脂肪酶菌株生長(zhǎng)的最適碳源濃度和氮源濃度之后，還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)并確定適合于脂肪酶菌株生長(zhǎng)的碳源和氮源濃度的最佳組合。以a和b分別代表碳源和氮源的濃度，假設(shè)酶活性a1>a2>a3；b1>b2>b3，據(jù)此形成下列兩種方案，你認(rèn)為其中較為合理的方案是________， 請(qǐng)說(shuō)明理由______

20、_______________________________________________________。 方案一：a1和b1，a2和b2、a3和b3分別組合，根據(jù)酶活性取其中的最佳組合。 方案二：a1分別與每種氮源濃度組合以及b1分別與每種碳源濃度組合，根據(jù)酶活性取其中的最佳組合。 [解析]　(1)耐低溫富含堿性脂肪酶的微生物應(yīng)生活在低溫、鹽堿地、含油脂的環(huán)境中。 (2)液體培養(yǎng)基比固體培養(yǎng)基更適宜微生物的生長(zhǎng)，所以若樣品中含油脂分解菌很少，應(yīng)配制液體培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，可獲得大量菌體。 (3)根據(jù)題干信息，如果在培養(yǎng)基中滴加溴甲酚紫，隨著油脂分解，在菌落周圍溴甲酚紫將隨油脂

21、的分解紫色變淺，說(shuō)明此種菌能夠產(chǎn)生脂肪酶。 (4)方案一為兩個(gè)濃度的簡(jiǎn)單組合，組合類型太少，組合類型中的酶活性不一定最高；方案二用最佳碳源濃度a1與各氮源濃度組合，選出最佳氮源濃度，再用最佳氮源濃度b1，與各碳源濃度組合，擴(kuò)大組合范圍，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，根據(jù)酶活性篩選出最佳碳源和氮源的組合方案。 [答案]　(1)低溫、鹽堿地、被油污染(或含油脂)　(2)液體　(3)溴甲酚紫　菌落周圍紫色變淺　(4)二　方案一為兩個(gè)濃度的簡(jiǎn)單組合，酶活性不一定最高；方案二用最佳碳源濃度與各氮源濃度組合，再用最佳氮源濃度，與各碳源濃度組合擴(kuò)大組合范圍，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，根據(jù)酶活性篩選出最佳組合方案 7．(2019·梅州

22、市高三檢測(cè))凝乳酶是干酪和干酪素生產(chǎn)過(guò)程中的關(guān)鍵酶，動(dòng)植物及微生物均能產(chǎn)生。由于微生物具有資源豐富、生長(zhǎng)周期短、受氣候等因素限制小等特點(diǎn)，微生物凝乳酶成為研究熱點(diǎn)。為獲得凝乳酶高產(chǎn)菌株，科研人員進(jìn)行了以下分離、篩選、鑒定工作。培養(yǎng)基配方表： 酪蛋白 牛肉膏 Na2HPO4 NaCl 瓊脂 蒸餾水 10 g 3 g 2 g 5 g 15 g 加至1 000 mL (1)從作用上看，該培養(yǎng)基屬于________(填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基。 (2)科研人員將牧區(qū)采集的土壤樣品放入無(wú)菌水中，振蕩混勻，制成懸液。為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進(jìn)行_________

23、_，用__________法接種于上述培養(yǎng)基上。接種后的培養(yǎng)基以__________狀態(tài)放入培養(yǎng)箱。 (3)在涂布接種前，科研人員隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先進(jìn)行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是__________________________________。 (4)在稀釋倍數(shù)為106下涂布了三個(gè)平板(每次取0.1 mL)，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為240、250、260，則稀釋前1 mL菌液中所含此菌數(shù)量為_(kāi)_______________個(gè)。 (5)挑選菌落時(shí)以白色沉淀圈大且透明圈小者為佳。將獲得的菌株進(jìn)行液體培養(yǎng)后，從培養(yǎng)液的________(填“上清液”或“沉淀物”)獲得粗提的凝乳酶。將一

24、定量的粗提凝乳酶與適量酪蛋白溶液混合，一定時(shí)間后測(cè)定吸光值來(lái)測(cè)定酶活性。進(jìn)行吸光值測(cè)定時(shí)，需將________與等量酪蛋白溶液混合，作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)照。 [解析]　(1)由于實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖谦@得凝乳酶高產(chǎn)菌株，凝乳酶能使乳中酪蛋白凝聚成乳酪，所以培養(yǎng)基中需要加入酪蛋白，從作用上看該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。 (2)為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進(jìn)行梯度稀釋，并用涂布平板法接種于固體培養(yǎng)基上。為防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，接種后的培養(yǎng)基應(yīng)以倒置狀態(tài)放入培養(yǎng)箱。 (3)在涂布接種前，取若干滅菌后的空白平板培養(yǎng)一段時(shí)間，其目的是檢驗(yàn)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。 (4)三個(gè)平板菌落的平

25、均數(shù)為(240＋250＋260)÷3＝250，稀釋倍數(shù)為106，每次取0.1 mL，所以稀釋前1 mL菌液中所含細(xì)菌數(shù)為250÷0.1×106＝2.5×109(個(gè))。 (5)挑選菌落時(shí)凝乳效果較好的為白色沉淀圈大且透明圈小的。將獲得的菌株進(jìn)行液體培養(yǎng)后，從培養(yǎng)液的上清液獲得粗提的凝乳酶。將一定量的粗提凝乳酶與適量酪蛋白溶液混合，一定時(shí)間后測(cè)定吸光值來(lái)測(cè)定酶活性。進(jìn)行吸光值測(cè)定時(shí)，需將等量失活的粗提凝乳酶與等量酪蛋白溶液混合，作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)照。 [答案]　(1)選擇　(2)梯度稀釋　(稀釋)涂布平板　倒置　(3)檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格　(4)2.5×109　(5)上清液　等量失活的粗提凝乳

26、酶 8．(2019·安徽省皖江名校聯(lián)盟高三摸底)某生物興趣小組探究不同C/N的值對(duì)谷氨酸棒狀桿菌數(shù)量和產(chǎn)物產(chǎn)生的影響，記錄其結(jié)果如下表。回答下列問(wèn)題： 分組 發(fā)酵條件 谷氨酸棒狀桿菌繁殖速度 單個(gè)菌體產(chǎn)谷氨酸量 第一組 通入無(wú)菌空氣、C∶N＝3∶1 較慢 較多 第二組 通入無(wú)菌空氣、C∶N＝4∶1 較快 較少 (1)該興趣小組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)所用培養(yǎng)基除了能為谷氨酸棒狀桿菌提供碳源和氮源外，還能提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是________。 (2)統(tǒng)計(jì)待測(cè)培養(yǎng)液中谷氨酸棒狀桿菌的數(shù)量，可采用的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和稀釋涂布平板法。 ①利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)過(guò)程：取第二組的

27、100倍的稀釋液0.1 mL滴加到計(jì)數(shù)板(由25×16＝400個(gè)小室組成，容納液體總體積為0.1 mm3)，在計(jì)數(shù)室內(nèi)共有菌體48個(gè)，則1 mL的第二組發(fā)酵液中有菌體________個(gè)。用該方法測(cè)定的微生物數(shù)量大于實(shí)際的活菌數(shù)，原因是__________________。 ②利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往比實(shí)際值______(填“偏大”或“偏小”)，原因是____________________________________。 (3)根據(jù)表中信息可知，培養(yǎng)過(guò)程中需先將碳氮比設(shè)為4∶1，目的是____________________，然后將發(fā)酵液中碳氮比改為3∶1繼續(xù)培養(yǎng)，目的是____

28、____________________________。 [解析]　(1)谷氨酸棒狀桿菌等微生物的培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分包括碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽。 (2)①根據(jù)提供的數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，1 mL的第二組發(fā)酵液中菌體數(shù)＝48÷(0.1×10－3)×100＝4.8×107(個(gè))；由于計(jì)數(shù)的菌體數(shù)量包括了死亡的菌體，所以用該方法測(cè)定的微生物數(shù)量大于實(shí)際的活菌數(shù)。 ②在利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌體數(shù)量時(shí)，由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起共同形成一個(gè)菌落，所以統(tǒng)計(jì)的數(shù)值比真實(shí)值要小。 (3)分析表格相關(guān)信息可知：C/N值較低時(shí)有利于谷氨酸棒狀桿菌產(chǎn)生谷氨酸，C/N值較高時(shí)有利于谷氨酸棒狀桿菌繁殖，因此培養(yǎng)過(guò)程中需先將碳氮比設(shè)為4∶1，目的是有利于谷氨酸棒狀桿菌的繁殖，然后將發(fā)酵液中碳氮比改為3∶1繼續(xù)培養(yǎng)的目的是有利于提高單個(gè)菌體產(chǎn)谷氨酸的量。 [答案]　(1)水和無(wú)機(jī)鹽　(2)①4.8×107　計(jì)數(shù)的菌體數(shù)量包括了死亡的菌體　②偏小　兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起共同形成一個(gè)菌落　(3)有利于谷氨酸棒狀桿菌的繁殖(或有利于增加谷氨酸棒狀桿菌的數(shù)量)　有利于提高單個(gè)菌體產(chǎn)谷氨酸的量 8