《免疫學(xué)的應(yīng)用》PPT課件.ppt

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1、第十章 免疫學(xué)的應(yīng)用,7/7/2020,2,第一節(jié) 免疫診斷與檢測,一、免疫診斷試劑 免疫診斷是應(yīng)用已知診斷試劑，對患病動物進(jìn)行抗原或抗體的測定，從而診斷疾病。 用微生物制成抗原診斷液，即利用細(xì)菌或病毒經(jīng)過培養(yǎng)后，將菌體（病毒）滅活（或?qū)⒕w裂解）后制成。應(yīng)用凝集反應(yīng)的有：布氏桿菌試管凝集抗原、雞白痢桿菌有色抗原；用于補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的鼻疽桿菌、布氏桿菌補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)抗原。用于變態(tài)反應(yīng)變應(yīng)原，如結(jié)核菌素、鼻疽菌素，則是用細(xì)菌培養(yǎng)、濃縮、裂解、抽提而制成診斷液。,7/7/2020,3,診斷血清是用抗原免疫動物而制成的，一般采用給動物多次注射抗原，然后采集免疫動物血液，分離血清，加入一定防腐劑而制成

2、。 免疫血清經(jīng)過提純后得到IgG，再用酶、熒光染料、放射性同位素標(biāo)記，制成標(biāo)記抗體。我國一些生物制品廠作為商品進(jìn)行生產(chǎn)的，有用辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體，如豬瘟酶標(biāo)抗體、羊抗兔酶標(biāo)抗體。用熒光染料標(biāo)記抗體，有豬瘟熒光抗體、雞新城疫熒光抗體。用同位素標(biāo)記的抗體，有測定動物激素含量的試劑盒等。,7/7/2020,4,二、免疫診斷與檢測的應(yīng)用,（一）用于家畜傳染病的檢疫 1.用血清學(xué)方法診斷疫病 利用抗原抗體反應(yīng)的特異性、敏感性來診斷疾病。用已知抗原診斷液，檢查患病動物血清中是否存在有相應(yīng)的特異性抗體，借以診斷傳染病。亦可用已知診斷血清或標(biāo)記抗體，檢查動物體內(nèi)及排泄物中是否存在特異性抗原，用

3、以檢查病原體的存在。常用的血清學(xué)診斷方法有沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)等。,7/7/2020,5,2.用變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行家畜的檢疫 用變應(yīng)原如結(jié)核菌素，給牛點(diǎn)眼或皮內(nèi)注射，看其是否發(fā)生炎癥反應(yīng)來判定其是否感染結(jié)核桿菌。用鼻疽菌素給馬點(diǎn)眼，檢查是否感染了馬鼻疽桿菌。此外，還有檢查布氏病的布氏桿菌水解素等。,7/7/2020,6,（二）用于病原的分型與鑒定 用已知抗血清或不同型的單因子血清，對分離的病原菌進(jìn)行鑒定，以確診該病原。用單因子血清分析細(xì)菌的抗原組分，確定細(xì)菌的類型，如用沙門氏菌的單因子血清分析待檢沙門氏菌的菌體抗原及鞭毛抗原的種類，從而確定該菌屬何種沙門氏菌。,7/7/20

4、20,7,（三）細(xì)胞免疫功能的檢測 動物機(jī)體對疾病的抵抗力，決定于機(jī)體的免疫狀態(tài)，其免疫力的強(qiáng)弱除了抗體外，還有細(xì)胞免疫功能。測定細(xì)胞免疫功能，能說明機(jī)體的總體免疫力，對疫病的預(yù)防及治療具有重要的指導(dǎo)意義。,7/7/2020,8,1.E玫瑰花環(huán)試驗(yàn) T淋巴細(xì)胞有綿羊紅細(xì)胞的受體，將紅細(xì)胞加入T細(xì)胞中，則幾個(gè)紅細(xì)胞結(jié)合于T細(xì)胞表面形成花環(huán)，這種花環(huán)稱E玫瑰花環(huán)，可用以測定T細(xì)胞數(shù)。如人、豬T細(xì)胞可與綿羊紅細(xì)胞形成花環(huán)。,7/7/2020,9,2.EA玫瑰花環(huán)試驗(yàn) B細(xì)胞膜上有抗體受體，雞紅細(xì)胞與抗雞紅細(xì)胞的抗體結(jié)合后，能結(jié)合在B細(xì)胞表面而形成花環(huán)，這種花環(huán)可用于B細(xì)胞的測定。 3.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)

5、化試驗(yàn) T細(xì)胞在植物血凝素(PHA)作用下，轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，T細(xì)胞轉(zhuǎn)換率高，則T細(xì)胞的免疫活性強(qiáng)，可用以測定T細(xì)胞的功能。,7/7/2020,10,4.抑制移動試驗(yàn) 機(jī)體中的致敏淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，能釋放抑制移動因子，使白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞停留在抗原作用的部位，增強(qiáng)對抗原作用的免疫能力。此試驗(yàn)可用毛細(xì)管法或瓊脂糖平皿法。 5.淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn) 測定淋巴細(xì)胞殺傷能力，以測定機(jī)體的免疫力。,7/7/2020,11,第二節(jié) 免疫預(yù)防及免疫治療,免疫學(xué)應(yīng)用的一個(gè)重要目標(biāo)是免疫預(yù)防及免疫治療，就是利用人工自動免疫與人工被動免疫兩方面。 人工自動免疫是給動物注射（或吸入、飲服）一定種類的疫（菌）苗或類毒素

6、，使其產(chǎn)生對該種微生物的抵抗力，以達(dá)到預(yù)防傳染的目的。 人工被動免疫是給動物注射免疫血清（或病愈動物血清），使動物獲得免疫性，用于緊急預(yù)防或治療傳染病。,7/7/2020,12,一、免疫預(yù)防,（一）疫苗的種類 動物機(jī)體獲得對某種傳染病的免疫力可通過4種途徑： 天然主動獲得自然感染病愈（免疫時(shí)間長）。 人工主動獲得接種疫苗（較長）。 天然被動獲得幼畜從初乳獲得母源抗體； 幼禽從卵黃獲得母源抗體(短)。 人工被動獲得人工注射免疫血清或高免蛋黃（短）。 疫苗概念：給動物進(jìn)行人工主動免疫的生物制品。,7/7/2020,13,1.活疫苗 簡稱活苗.有強(qiáng)毒苗、弱毒苗和異源苗三種。強(qiáng)毒苗是應(yīng)用最

7、早的疫苗種類。使用強(qiáng)毒進(jìn)行免疫有較大的危險(xiǎn)性，非情況特殊不宜采用。 弱毒苗是目前應(yīng)用最廣泛的疫苗，,7/7/2020,14,特點(diǎn)： （1）注射后可在動物體內(nèi)短期繁殖 （2）用量少，不需佐劑 （3）可誘導(dǎo)體液免疫、細(xì)胞免疫,刺激機(jī)體產(chǎn)生干擾素 （4）研究過程較長，保存條件要求凍干冷藏，毒力有返強(qiáng)的潛在危險(xiǎn) 異源苗是用具有共同保護(hù)抗原的不同種病毒制備的疫苗。例如用火雞皰疹病毒（HVT）接種雞，預(yù)防雞馬立克氏病，用鴿痘病毒預(yù)防雞痘，等等。,7/7/2020,15,2.死苗（滅活苗、滅能苗） 研制：選擇毒力強(qiáng)、免疫原性好的毒株大量培養(yǎng),加0.4%左右甲醛滅活，保留免疫原性+佐劑。 特點(diǎn)：

8、（1）研制時(shí)間較短，安全，可常溫保存。 （2）免疫原性較差，只產(chǎn)生體液免疫，效果比弱毒疫苗差。 （3）用量較大，須加入適當(dāng)?shù)淖魟?7/7/2020,16,3.類毒素外毒素的滅活苗 研制：液體大量培養(yǎng)產(chǎn)毒細(xì)菌,去除菌體， 提取外毒素+甲醛，滅活成類毒素+佐劑。 應(yīng)用：(1)直接作疫苗注射 (2)反復(fù)注射免疫馬匹，制備抗毒素血清。 4.多價(jià)苗同種病原微生物多種血清型毒株 制成的疫苗(例如大腸桿菌多價(jià)苗、禽流感多價(jià)苗) 。,,7/7/2020,17,多聯(lián)苗不同種病原微生物聯(lián)合制成的疫苗 例:新支二聯(lián)苗(新城疫病毒+傳染性支氣管炎毒)。 豬瘟-豬丹毒-豬肺疫三聯(lián)苗 犬瘟熱/腺病毒/傳染性肝炎/副

9、流感/細(xì)小病毒 鉤端螺旋體六聯(lián)苗。 特點(diǎn):一針防多種病，節(jié)約人力、物力 注意:疫苗不能任意混合注射，可能互相干擾。,7/7/2020,18,5.亞單位疫苗提取細(xì)菌或病毒結(jié)構(gòu)中的有效抗原+佐劑 例如：豬大腸桿菌菌毛K88苗 禽巴氏桿菌微莢膜苗 特點(diǎn)：安全，成本高,7/7/2020,19,6.基因工程疫苗 A .基因工程亞單位苗 基因工程亞單位疫苗是用DNA重組技術(shù)，將編碼病原微生物保護(hù)性抗原的基因?qū)胧荏w菌（如大腸桿菌）或細(xì)胞，使其在受體細(xì)胞中高效表達(dá)，分泌保護(hù)性抗原肽鏈，然后提取保護(hù)性抗原肽鏈，加入佐劑即制成基因工程亞單位疫苗。如預(yù)防仔豬和犢牛下痢的大腸桿菌菌毛基因工程疫苗，是一個(gè)成功

10、的例子。,7/7/2020,20,B .基因工程活載體苗 是用基因工程技術(shù)將保護(hù)性抗原基因（目的基因）轉(zhuǎn)移到載體中，使之表達(dá)。痘病毒、腺病毒和皰疹病毒等都可以用作載體。國外已研制出以腺病毒為載體的乙肝疫苗和以皰疹病毒為載體的新城疫疫苗等。,7/7/2020,21,C .基因缺失苗 是用基因工程技術(shù)將強(qiáng)毒株毒力相關(guān)的基因切除構(gòu)建的活疫苗。此種疫苗安全性好，不易返祖；其免疫接種與強(qiáng)毒感染相似，機(jī)體可對病毒的多種抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答；免疫力堅(jiān)實(shí)，免疫期長，尤其是適于局部接種，誘導(dǎo)產(chǎn)生黏膜免疫力，因而是較理想的疫苗。目前已有多種基因缺失疫苗問世，豬偽狂犬病基因缺失疫苗已商品化并普遍使用。,7/7/20

11、20,22,7. 診斷液 概念：用于診斷傳染病或寄生蟲病的生物制品 類型： 診斷抗原 診斷抗體 凍干補(bǔ)體 制備： 用已知細(xì)菌病 用已知細(xì)菌病毒高 豚鼠血清 毒等滅活制成 免血清,標(biāo)記抗體等 用途： 檢血清抗體,診 鑒定抗原,診斷急性 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 斷慢性傳染病 傳染病 例： 布氏桿菌抗原 沙門氏菌因子血清、 雞白痢抗原 豬瘟熒光抗體 結(jié)核菌素,,,,7/7/2020,23,8、免疫血清 概念：用已知病原免疫動物制備的高效價(jià)抗血清。 類型： 抗毒素、抗菌血清、抗病毒血清。 用途：免疫治療或作短期被動免疫 例：破傷

12、風(fēng)抗毒素、小鵝瘟血清、鴨肝炎血清。,7/7/2020,24,（二）免疫途徑,接種疫苗的途徑有滴鼻、點(diǎn)眼、刺種、注射、飲水和氣霧等，應(yīng)根據(jù)疫苗的類型、疫病的特點(diǎn)及免疫程序來選擇每次免疫的接種途徑。例如滅活疫苗、類毒素和亞單位疫苗都不能經(jīng)消化道接種，一般用于肌肉或皮下注射。注射時(shí)應(yīng)選擇活動量小的易于注射的部位，如家畜頸部皮下、家禽胸部肌肉等。,7/7/2020,25,1.滴鼻與點(diǎn)眼 免疫效果較好，僅用于接種弱毒疫苗，可直接刺激眼底哈德腺和結(jié)膜下彌散淋巴組織。另外還可刺激鼻、咽、口腔黏膜和扁桃體等，產(chǎn)生局部免疫。據(jù)報(bào)道，在新城疫免疫中，滴鼻和點(diǎn)眼產(chǎn)生的抗體效價(jià)比飲水接種高4倍，而且免疫期也長。但

13、該方法比較麻煩，費(fèi)勞力，因而對大群雞免疫很困難。,7/7/2020,26,2.飲水免疫 是最方便的疫苗接種方法，適用于大型雞群，但只有當(dāng)疫苗接觸到鼻咽部黏膜時(shí)才引起免疫反應(yīng)，當(dāng)其進(jìn)入腺胃時(shí)在較酸的環(huán)境中很快死亡，失去作用。飲水免疫的免疫效果較差，不適于初次免疫。,7/7/2020,27,3.刺種與注射 也是常用的免疫方法，適用于某些弱毒苗如雞痘與雞馬立克氏病免疫。另外，滅活苗的免疫也必須用注射的方法進(jìn)行。刺種與注射方法免疫確實(shí)，效果好。,7/7/2020,28,4.氣霧免疫 分為噴霧（Spray）免疫和氣溶膠（Aerosol）免疫兩種方式。噴霧免疫的霧粒大小為10100m，氣溶膠為<

14、150m。在新城疫免疫中，氣霧免疫效果較好，不僅可誘導(dǎo)產(chǎn)生循環(huán)抗體，而且也可以產(chǎn)生局部免疫力。但氣霧免疫會造成一定程度的應(yīng)激反應(yīng)，容易引起呼吸道感染。試驗(yàn)證明，氣霧引起的應(yīng)激反應(yīng)程度與霧粒的大小成反比，因此在有呼吸道病史的雞場，更適于采用較大霧滴氣霧免疫。,7/7/2020,29,（三）免疫程序,免疫程序概念： 不同畜群、禽群應(yīng)該接種的各種疫苗的最適計(jì)劃。包括各種疫苗的一免、二免、三免的安排。,7/7/2020,30,制訂免疫程序的基本原則： 1 .一免注意幼畜（禽）母源抗體水平。 2 .二免、三免注意原有抗體水平。 3 .注意疫病在本地區(qū)的流行情況及規(guī)律、疫苗的種類、性質(zhì)和免疫途徑等。 4 .注意畜群健康情況。,7/7/2020,31,二 免疫治療 （一）高免疫血清及免疫球蛋白的制備及應(yīng)用 給傳染病病畜注射抗該病原的高免血清或病愈動物的血清，能起到治療作用。,7/7/2020,32,（二）單克隆抗體 單克隆抗體是從一個(gè)細(xì)胞經(jīng)無性繁殖而來的具有同一基因型的細(xì)胞群。其概念是：由個(gè)克隆化的淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞所產(chǎn)生的高度同質(zhì)性的抗體，成為單克隆抗體。 單克隆抗體目前應(yīng)用于制備標(biāo)準(zhǔn)診斷劑及治療用的高效價(jià)血清，同時(shí)應(yīng)用于免疫機(jī)制的探討及抗原決定簇的研究。,7/7/2020,33,單克隆抗體的制備過程,