《生物：11《DNA重組技術(shù)的基本工具》課件.ppt》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《生物：11《DNA重組技術(shù)的基本工具》課件.ppt（46頁珍藏版）》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。
1、基 因 工 程 每100kg 豬或牛的胰腺中僅可提取45g。 1979年 ， 美 國 將 人 的 胰 島 素 基 因 重 組 到 大 腸 桿 菌內(nèi) ， 實(shí) 現(xiàn) 了 細(xì) 菌 生 產(chǎn) 胰 島 素 ， 大 大 降 低 了 生 產(chǎn) 成 本 。治療糖尿病特效藥 據(jù)WTO調(diào)查： 2005年全世界約有糖尿病患者1.8億人，我國約6000萬。 問題探討：蘇云金芽孢桿菌含有一種可以合成毒蛋白的基因。讓細(xì)菌的毒蛋白基因在棉花細(xì)胞中表達(dá)，可培育出抵抗棉鈴蟲害的抗蟲棉。想一想需要做哪些關(guān)鍵工作？蘇 云 金 芽 孢 桿 菌 普 通 棉 花 抗 蟲 棉 一 、 限 制 性 核 酸 內(nèi) 切 酶 “ 分 子 手 術(shù) 刀 ”v
2、 1.主要來源：v種類與命名：v作用特點(diǎn)：v 4.限制酶識別序列 v 5.作用結(jié)果： 種 類 與 命 名 ： 現(xiàn)在已經(jīng)從約300種微生物中分離出了約4000種限制性內(nèi)切酶(限制酶)。粘 質(zhì) 沙 雷 氏 桿 菌（ Serratia marcesens練 習(xí) ： 流 感 嗜 血 桿 菌 的 d菌 株( Haemophilus influenzae d )中 先 后 分 離 到 3種 限 制 酶 ， 則 分別 命 名 為 :Hind、 Hind和 Hind T12345 A1234 5HHHH H O T12345 A1234 5HHHH OH 2O + O 限 制 酶 DNA解 旋 酶區(qū) 別 切
3、割 特 定 的 核 苷 酸 序 列的 磷 酸 二 酯 鍵 將 DNA兩 條 鏈 的 氫 鍵打 開 形 成 兩 條 單 鏈限 制 酶 DNA水 解 酶區(qū) 別 切 割 特 定 的 核 苷 酸 序 列的 磷 酸 二 酯 鍵 ， 形 成 片段 的 DNA. 切 割 磷 酸 二 酯 鍵 ， 形 成單 個(gè) 的 脫 氧 核 苷 酸 。 能 被 限 制 性 內(nèi) 切 酶 特異 性 識 別 的 切 割 部 位都 具 有 回 文 序 列 ：在 切 割 部 位 ， 一 條 鏈正 向 讀 的 堿 基 順 序 與另 一 條 鏈 反 向 讀 的 順序 完 全 一 致 。 黏 性 末 端 黏 性 末 端 黏 性 末 端 黏
4、性 末 端 平 末 端 平 末 端 同 一 種 DNA聚 合 酶 DNA連 接 酶區(qū) 別 1區(qū) 別 2相 同 點(diǎn) 1)只 能 將 單 個(gè) 核 苷 酸 連接 到 已 有 的 核 酸 片 段 上 ，形 成 磷 酸 二 酯 鍵形 成 磷 酸 二 酯 鍵 1)在 兩 個(gè) DNA片 段 之間 形 成 磷 酸 二 酯 鍵2)以 一 條 DNA鏈 為 模 板 ，連 接 成 一 條 互 補(bǔ)的 DNA鏈 2)將 DNA雙 鏈 上 的 兩個(gè) 缺 口 同 時(shí) 連 接 起 來 ，不 需 要 模 板 二 、 “ 分 子 縫 合 針 ” DNA連 接 酶催 化 磷 酸 二 酯 鍵 形 成 類 型 三 、 “ 分 子 運(yùn)
5、輸 車 ” 基 因 進(jìn) 入 受 體 細(xì) 胞 的 載體 載 體 需 要 的 條 件 ： 有 1多 個(gè) 限 制 酶 切 點(diǎn) 對 受 體 細(xì) 胞 無 害 導(dǎo) 入 基 因 能 在 受 體 細(xì) 胞 中 復(fù) 制 、 表 達(dá) 有 某 些 標(biāo) 記 基 因 ， 便 于 篩 選 常 用 運(yùn) 載 體 ： 細(xì) 菌 的 質(zhì) 粒 噬 菌 體 衍 生 物 或 某 些 動 植 物 病 毒假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物能有預(yù)想的效果嗎？作為分子運(yùn)輸車載體，如果沒有切割位點(diǎn)將會怎樣？霍亂菌的質(zhì)粒多個(gè)限制酶切點(diǎn)，你會用它來做分子運(yùn)輸車嗎？目的基因有沒有進(jìn)入受體細(xì)胞，如何去發(fā)現(xiàn)？ 1.在基因工程中，切割運(yùn)載體和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ）A.同種限制酶 B. 兩種限制酶C.同種連接酶 D. 兩種連接酶A課 堂 練 習(xí) 課 堂 練 習(xí) 課 堂 練 習(xí) 下 課 了 !
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