HLAB檢測(cè)及其臨床應(yīng)用

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1、,,,,,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),2019/12/5,,?#?,,,,HLA-B27,及其臨床應(yīng)用,什么是,HLA,及,HLA-B27,MHC,、,HLA,、亞型、關(guān)聯(lián)、,RR,HLA-B27,與哪些疾病相關(guān),血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病 類(lèi)型及特點(diǎn),強(qiáng)直性脊柱炎 特點(diǎn)及其與,B27,關(guān)聯(lián)機(jī)制,HLA-B27,怎么檢測(cè),MLCT,、,ELISA,、,IMS-ELISA,、,FCM,、,PCR-SSP,1,HLA,相關(guān)概念,主要組織相容性抗原,主要組織相容性復(fù)合體（,,MHC,ⅠⅡⅢ,類(lèi),),：,H-2,,SLA HLA,MHC,、,HLA,

2、復(fù)合體,……,基因,MHC,分子、,HLA,分子,……,抗原,HLA,：,人類(lèi)白細(xì)胞抗原（,Human Leukocyte,Antigen,）,2,HLA,相關(guān)概念,,3,不同地區(qū),HLA-B27,亞型的流行病學(xué)分布,,歐洲、非洲,2705,、,2702,、,2707,東南亞（印尼、馬來(lái)西亞、泰國(guó)）,2706,、,2704,、,2705,中國(guó),、新加坡、日本,2704,、,2705,、,2707,HLA-B27,相關(guān)疾病,,4,疾病,HLA-B27,陽(yáng)性率,(%),強(qiáng)直性脊椎炎,>90,銀屑病性關(guān)節(jié)炎,,55,Reiter’s,綜合癥,37,反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎,,沙門(mén)氏菌感染,29.7,志賀氏菌感染

3、,20.7,耶爾森氏菌感染,17.6,淋病雙球菌感染,14.0,正常人群,,2,～,7,血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病共同特點(diǎn),RF,（一,）,家族,聚集,現(xiàn)象,與,HLA-B27,不同程度相關(guān),皆可影響脊柱，都有不同程度的骶髂關(guān)節(jié)炎，也可影響外周關(guān)節(jié),，下肢,關(guān)節(jié)多于上肢關(guān)節(jié)，且呈不對(duì)稱(chēng)性,。,與革,蘭氏陰性桿菌有一定,相關(guān)性：,,強(qiáng)直性脊柱炎,與,腸道肺炎克,雷白桿菌,相關(guān),Reiter,綜合征與,沙眼衣原體、,福氏痢疾桿菌,相關(guān),,反應(yīng),性關(guān)節(jié)炎與沙門(mén),桿菌,、,痢疾桿菌、耶爾森菌和,HP,相關(guān),5,血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病共同特點(diǎn),臨床上有很多共同或重疊之處：,眼炎，尿道炎，前列腺炎，,,口腔,、腸道和

4、生殖器潰瘍,,結(jié)節(jié),性紅斑，銀屑病樣,皮疹,,壞死,性膿皮病，,血栓性靜脈炎,基本,病理變化以肌腱端周?chē)晚g帶附著于骨的部位為主,(,附著端炎,),而非滑膜，也可發(fā)生在眼、主動(dòng)脈瓣、肺實(shí)質(zhì)和皮膚，而不同于以滑膜病變?yōu)橹鞯念?lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，而且無(wú)類(lèi)風(fēng)濕皮,下結(jié)節(jié)。,6,HLA-B27,相關(guān)疾?。簭?qiáng)直性脊柱炎,Ankylosing Spondylitis,，,AS,患病率：,0.3%,，,20-30,歲，男女,比例,10:1,，有家族傾向；,主要侵犯：中軸關(guān)節(jié)（骶髂關(guān)節(jié),、脊柱骨突、脊柱旁,軟組織）,可,伴,發(fā),外周,關(guān)節(jié),及,關(guān)節(jié),外,表現(xiàn)，嚴(yán)重,者發(fā)生脊柱畸形和,關(guān)節(jié)強(qiáng)直,B27,檢測(cè)可,作為有

5、相關(guān)癥狀或高危人群,AS,早期的,篩選,方法！,AS,不是,RA,的一,種特殊類(lèi)型！,,7,,強(qiáng)直性脊柱炎,類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,地區(qū)分布,種族差異大,世界性,性別分布,男＞女,女＞男,年齡,20-30,30-50,家族史,明顯,不明顯,類(lèi)風(fēng)濕因子,（－）,（,?,）,HLA-B27,陰性的,AS,約,5-10%,的,AS,患者為,HLA-B27,陰性,AS,患者的,HLA-B27,陽(yáng)性率達(dá),90-95%,我國(guó)漢族人群,HLA-B27,陽(yáng)性率,2-7%,（,3,千萬(wàn),-1,億），,AS,患病率為,0.3%,（＞,4,百萬(wàn)），大部分,HLA-B27,陽(yáng)性者并不發(fā)生,AS,。,HLA-B27,與,AS,

6、8,,HLA-B27,與,AS,9,健康人群,HLA-B27,陽(yáng)性率及,AS,患病率各地區(qū)、種族有顯著的差異,HLA—B27,與強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病有很強(qiáng)的相關(guān)性,兩種錯(cuò)誤認(rèn)識(shí)：,HLA-B27,陽(yáng)性≠,AS,！,HLA-B27,陽(yáng)性不會(huì)轉(zhuǎn)陰！,,HLA-B27,陽(yáng)性率,AS,患病率,AS,患者,B27,陽(yáng)性率,中國(guó)人,2-7%,0.3%,90,～,95,%,歐洲白種人,4,～,13,％,1,％,80,～,100%,南非黑人,1,％,很低,22%,美國(guó)黑人,2,～,4,％,,57%,印地安人,9,～,50,％,6,～,12,％,80,～,100%,HLA-B27,與,AS,的關(guān)聯(lián)機(jī)制,連鎖不平衡

7、,學(xué)說(shuō),分子模擬,學(xué)說(shuō),關(guān)節(jié)源,性肽假說(shuō),其他：,T,細(xì)胞受體庫(kù)假說(shuō),,超抗原假說(shuō),B27,修飾因子假說(shuō),Cys67,模型,10,張谷香．醫(yī)學(xué)綜述，,2012,18(4):498-501,HLA,基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因處于緊密連鎖不平衡，而,HLA,基因本身并不是引起疾病的真正基因，僅僅是遺傳標(biāo)志。,B27,抗原與某些,G,（,-,）菌之間存在類(lèi)似的分子結(jié)構(gòu)，能發(fā)生分子模擬或交叉反應(yīng)，機(jī)體免疫系統(tǒng)把,B27,當(dāng)作病原體抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫損害。,認(rèn)為關(guān)節(jié)源性肽只存在于關(guān)節(jié)組織中，特異性地由,HLA—B27,提呈，正常情況下遞呈水平低，反應(yīng),T,細(xì)胞處于耐受狀態(tài)；當(dāng)某

8、些具有同源結(jié)構(gòu)蛋白的病毒或細(xì)菌感染時(shí)，則可致敏耐受的,T,細(xì)胞，從而識(shí)別以低水平遞呈的關(guān)節(jié)源性肽，引起自身免疫反應(yīng)而損傷組織。,HLA-B27,檢測(cè)方法及評(píng)價(jià),抗原水平,微量細(xì)胞毒法,84%,ELISA,IMS-ELISA 88%,流式細(xì)胞術(shù),法,93%,基因水平,PCR-SSP 96%,,11,微量細(xì)胞毒法（,microlymphocytotoxic test,，,MLCT,）,原理：如果受試者淋巴細(xì)胞,表面表達(dá),有相應(yīng)的,HLA-B27,抗原,，就可以與,B27,抗體結(jié)合，形成,Ag-Ab,復(fù)合物激活補(bǔ)體,，,發(fā)生,對(duì)細(xì)胞膜的破壞,及細(xì)胞殺傷

9、作用，通過(guò),染色法觀(guān)察，死細(xì)胞的細(xì)胞,膜通透性,改變，染料能夠進(jìn)入使之著色，而活細(xì)胞細(xì)胞膜,完整不被染色,。根據(jù)死細(xì)胞占全部細(xì)胞的百分比，可以判斷,受試者,淋巴細(xì)胞表面是否,存在,HLA-B27,抗原及其與抗體的,反應(yīng),強(qiáng)度,。,優(yōu)點(diǎn),：不需特殊儀器設(shè)備，,易于操作，一般的實(shí)驗(yàn)室都可開(kāi)展。,缺點(diǎn),：標(biāo)本存放不能超過(guò),8,小時(shí)；感染可以使細(xì)胞膜,表面的,B27,分子的數(shù)量或結(jié)構(gòu),改變，影響,MLCT,的結(jié)果，易出現(xiàn),假,陰性。,12,J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189,ELISA,原理：應(yīng)用雙

10、抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本,中,HLA-B27,水平。用純化,的,B27,抗體,包被微孔板,，依次,加入,HLA-B27,抗原（待檢標(biāo)本）、,生物素化,的抗,HLA-B27,抗體、,HRP,標(biāo)記的親和素,，形成雙抗體夾心反應(yīng)，經(jīng)過(guò),徹底洗滌后,用底物,TMB,顯色。,TMB,在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并,在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品,中的,HLA-B27,呈正相關(guān),。,其,結(jié)果,與,MLCT,法符合率,為,99,％，且,不,受感染因素的影響，重復(fù)性,好,。,13,瞿良等．實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，,2005,19(21):2190-2191,磁珠酶聯(lián)免疫分析（,IMS-ELI

11、SA,）,磁,珠分離,與,ELISA,結(jié)合,B27,單抗標(biāo)記磁珠,HRP,標(biāo)記,CD45,單抗,,通過(guò)磁場(chǎng)分離游離相,優(yōu)點(diǎn)：,反應(yīng)時(shí)間短（,1,小時(shí)完成）,對(duì),標(biāo)本新鮮度要求不,高,2,～,8,℃,靜,置,4 d,之內(nèi),可用,14,楊雅瓊等．現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，,2002,17(2):60-62,流式細(xì)胞術(shù)法,利用熒光標(biāo)記的,HLA-B27,單克隆抗體，與細(xì)胞表面的,B27,抗原結(jié)合，使結(jié)合后的淋巴細(xì)胞具有一定的熒光強(qiáng)度，這種熒光強(qiáng)度可由流式細(xì)胞儀測(cè)得的通道值來(lái)反映，以其值的高低判斷,HLA-B27,抗原表達(dá)百分比,，從而,判斷,HLA-B27,是否陽(yáng)性,。,優(yōu)點(diǎn)：全自動(dòng)儀器檢測(cè)，,減少了人為因

12、素的影響,，重復(fù)性,高，結(jié)果判斷準(zhǔn)確,，為,目前較為理想的,方法，國(guó)外,已將,FCM,法檢測(cè),HLA-B27,作為,AS,診斷的常規(guī)檢測(cè)方法。,缺點(diǎn)：儀器,昂貴，目前,只在,較大醫(yī)院應(yīng)用，且熒光易淬滅,。,15,Levering WH,，,et al. J],．,Cytometry B Clin Cytom,，,2003,54(1):28-38,．,PCR-SSP,通過(guò),設(shè)計(jì)基因序列,特異的,引物,SSP,，特異性的擴(kuò)增出標(biāo)本中的,HLA-B27,基因片段，以,瓊脂糖凝膠電泳,分析,PCR,擴(kuò)增產(chǎn)物,，若出現(xiàn),目的條,帶則表示,HLA-B27,為陽(yáng)性。,優(yōu)點(diǎn)：基因水平的檢測(cè),,直接對(duì),HLA-B27,原基因進(jìn)行擴(kuò)增分型，靈敏度高，特異性,強(qiáng)。,缺點(diǎn)：耗時(shí)長(zhǎng)，需要跑電泳，需要特定,的實(shí)驗(yàn)儀器及嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)條件，,在,臨,床,上普遍開(kāi)展此,項(xiàng)檢查,有一定的,難處。,16,Olerup O,．,Tissue Antigens,，,1994,43(4):253-256,,,17,萬(wàn)事有其本源,，,而,不是去教條,的,接受,其存在。,