急性經(jīng)口毒性試驗

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1、急性經(jīng)口毒性試驗急性經(jīng)口毒性試驗2.3.1.1 目的 （1)檢測消毒劑對實驗動物的急性毒性作用和強度。（2)為亞急（慢）性毒性等試驗提供劑量選擇的依據(jù)。2.3.1.2 實驗動物 小鼠或大鼠任選一種，雌雄各半。小鼠體重 18g22g，大鼠體重 180g220g，根據(jù)不同的計算 LD50方法，選用適當?shù)膭游飻?shù)量。2.3.1.3 試驗分組 如應(yīng)用概率單位-對數(shù)圖解法計算 LD50，隨機分為 5 個6 個劑量組。通常最高劑量組的動物死亡率應(yīng)90%，最低劑量組動物死亡率應(yīng)10%?？上纫暂^大的組距較少量動物進行預(yù)試，找出其粗略致死劑量范圍，然后再設(shè)計正式試驗的劑量分組。2.3.1.4 操作程序 （1）動物

2、的準備：試驗前，一般禁食過夜，不限制飲水。（2）受試物的配制：常以水或食用植物油為溶劑配制成溶液，或采用 0.5%羧甲基纖維素配制成混懸液。灌胃給予受試物的最大容量，小鼠不超過 0.2ml/10g 體重，大鼠不超過 1.0ml/100g 體重。（3）染毒方法：用灌胃方式將受試物一次給予動物。若受試物毒性很低，一次灌胃容量太大，可在 24h 內(nèi)分成 2 次3 次給予，其總劑量作為一日劑量計算。（4）染毒后觀察動物的中毒表現(xiàn)和死亡數(shù)及死亡時間，并對死亡動物和觀察期滿處死動物進行尸體解剖，肉眼觀察，發(fā)現(xiàn)有異常的組織或臟器，尚需進一步作組織病理學(xué)檢查。觀察時間 14d。2.3.1.5 LD50 的計算

3、方法 根據(jù)給受試物后 14d 內(nèi)的各劑量組動物死亡率計算 LD50(半數(shù)致死劑量)。2.3.1.5.1 概率單位-對數(shù)圖解法：（1）根據(jù)各劑量組動物死亡率，從表 2-9 中查各組的概率單位。因死亡率為 0%和 100%的概率單位，與所試動物數(shù)有關(guān)，故需另在表2-10 中查找。例如：對死亡率為 45%的概率單位，可查表 2-9。先在表的左側(cè)縱標目上找到 40，而后在表的上行橫標目處找到 5，兩者交叉點處的 4.87，即為 45%的概率單位。又如:某組用 10 只實驗動物，如果全部存活(死亡率為 0%)，查表 2-10，其概率單位為 3.04。表 2-9 百分率-概率單位換算表%0 1 2 3 4

4、 5 6 7 8 9 0 .2.67 2.95 3.12 3.25 3.36 3.45 3.52 3.59 3.66 10 3.72 3.77 3.82 3.87 3.92 3.96 4.01 4.05 4.08 4.12 20 4.16 4.19 4.23 4.26 4.29 4.33 4.36 4.39 4.42 4.45 30 4.48 4.50 4.53 4.56 4.59 4.61 4.64 4.67 4.69 4.72 40 4.75 4.77 4.80 4.82 4.85 4.87 4.90 4.92 4.95 4.97 50 5.00 5.03 5.05 5.08 5.10 5

5、.13 5.15 5.18 5.20 5.23 60 5.25 2.28 5.31 5.33 5.36 5.39 5.41 5.44 5.47 5.50 70 5.52 5.55 5.58 5.61 5.64 5.67 5.71 5.74 5.77 5.81 80 5.84 5.88 5.92 5.95 5.99 6.04 6.08 6.13 6.18 6.23 90 6.28 6.34 6.41 6.48 6.55 6.64 6.75 6.88 7.05 7.33 注:橫標目數(shù)字為死亡率的個位數(shù)，縱標目數(shù)字為死亡率的十位數(shù)。表 2-10 相應(yīng)于反應(yīng)率為 0及 100的概率單位 該組動物數(shù) 反

6、應(yīng)率 該組動物數(shù) 反應(yīng)率 0%100%0%100%.11 3.00 7.00 2 3.85 6.15 12 2.97 7.03 3 3.62 6.38 13 2.93,7.07 4 3.47 6.53 14 2.90 7.10 5 3.36 6.64 15 2.87 7.13 6 3.27 6.73 16 2.85 7.15 7 3.20 6.80 17 2.82 7.18 8 3.13 6.87 18 2.80 7.20 9 3.09 6.91 19 2.78 7.22 10 3.04 6.96 20 2.76 7.24 （2)用方格紙繪散點圖，橫軸表示劑量的對數(shù)值(X)，縱軸為概率單位值(

7、Y)，將各組數(shù)值點在圖上。（3)按各點的分布趨勢，用直尺繪出一條最適合于各點的直線，使線上方的點到線的總距離與線下方的點到線的總距離相近，此線應(yīng)盡量靠近概率單位為 5 的點及附近的點。（4）查出求概率單位 5 處的劑量對數(shù)，其反對數(shù)即為 LD50。按下列公式計算 LD50 的 95%可信限。S=(X2 X1)/(Y2 Y1)Sm=S/(N/2)-1/2 LD50 對數(shù)值的 95%可信限=log LD50 1.96Sm (上式結(jié)果，經(jīng)反對數(shù)變換后，可得 LD50 的 95%可信限)Sm 為 LD50的標準誤；S 為標準差；X1、X2 分別為機率單位等于 4(Y1)和 6(Y2)時相應(yīng)的劑量對數(shù)值

8、；N為 Y1(=4)及 Y2(=6)相應(yīng)的死亡率間所用的動物數(shù)。2.3.1.5.2 一次最大限度試驗：如 20 只動物(雌雄各半)一次灌胃劑量 5000mg/kg 體重，在14d 內(nèi)又無死亡，可判定 LD50大于 5000mg/kg 體重。2.3.1.5.3 其他方法：如霍恩(Horn)法、寇氏(Karber)法等。2.3.1.6 評價規(guī)定 消毒劑的毒性評價：LD50大于 5000mg/kg 體重者屬實際無毒；LD50為 501mg/kg5000mg/kg 體重者屬低毒；LD50為 51mg/kg500mg/kg 體重者屬中等毒；LD50為 1mg/kg50mg/kg 體重者屬高毒；LD50小于 1mg/kg 體重者屬劇毒。注：為評價消毒劑在實際應(yīng)用時對人體的安全性，當產(chǎn)品原形LD505000mg/kg 體重時，需增做消毒劑最高應(yīng)用液濃度 5 倍溶液的急性經(jīng)口毒性試驗，并計算其 LD50。