2019版高考生物一輪復(fù)習(xí) 第十一單元 現(xiàn)代生物科技專題 第一講 基因工程練習(xí) 蘇教版.doc
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第一講 基因工程 [課時(shí)作業(yè)] 單獨(dú)成冊(cè) 1.(2018河北衡水調(diào)研)請(qǐng)回答利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育轉(zhuǎn)基因植物的相關(guān)問題: (1)培育轉(zhuǎn)基因植物過程的核心步驟是__________,其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中__________,并且可以通過復(fù)制遺傳給下一代,同時(shí),使目的基因表達(dá)和發(fā)揮作用。 (2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),可利用DNA連接酶連接被限制酶切開的__________鍵?;虮磉_(dá)載體的組成部分包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因、__________、復(fù)制原點(diǎn)等。 (3)組成基因表達(dá)載體的單體是__________?;虮磉_(dá)載體中的啟動(dòng)子是__________識(shí)別和結(jié)合的部位,這種結(jié)合完成后才能驅(qū)動(dòng)目的基因通過__________(填過程)合成mRNA。 (4)用兩種限制酶XbaⅠ和SacⅠ(兩種酶切出的黏性末端不同)切割某DNA,獲得含目的基因的片段。若利用該片段構(gòu)建基因表達(dá)載體,應(yīng)選用的Ti質(zhì)粒是如圖中的__________。 注:圖中箭頭所指的位置是限制酶識(shí)別和切割的位點(diǎn) 解析:(1)基因工程的核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體,目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并可以通過復(fù)制遺傳給下一代,同時(shí)使目的基因表達(dá)和發(fā)揮作用。(2)限制酶切開磷酸二酯鍵,DNA連接酶連接形成磷酸二酯鍵,基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因、標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)。(3)基因表達(dá)載體的單體是脫氧核苷酸,啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合部位,結(jié)合后啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。(4)目的基因兩端需要用限制酶XbaⅠ和SacⅠ切割,且目的基因必須連接到TDNA中,故甲符合要求。 答案:(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體 穩(wěn)定存在 (2)磷酸二酯 標(biāo)記基因 (3)脫氧核苷酸 RNA聚合酶 轉(zhuǎn)錄 (4)甲 2.閱讀如下資料: 資料甲:科學(xué)家將牛生長激素基因?qū)胄∈笫芫阎?,得到了體型巨大的“超級(jí)小鼠”;科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因煙草。 資料乙:T4溶菌酶在溫度較高時(shí)易失去活性。科學(xué)家對(duì)編碼T4溶菌酶的基因進(jìn)行了改造,使其表達(dá)的T4溶菌酶第3位的異亮氨酸變?yōu)榘腚装彼?,在該半胱氨酸與第97位的半胱氨酸之間形成了一個(gè)二硫鍵,提高了T4溶菌酶的耐熱性。 資料丙:兔甲和兔乙是同一物種的兩個(gè)雌性個(gè)體,科學(xué)家將兔甲受精卵發(fā)育成的胚胎移植到兔乙體內(nèi),成功產(chǎn)出兔甲的后代,證實(shí)了同一物種的胚胎可在不同個(gè)體的體內(nèi)發(fā)育。 回答下列問題: (1)資料甲屬于基因工程的范疇。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠的受精卵中常用________________法。構(gòu)建基因表達(dá)載體常用的工具酶是________________和________________。在培育有些轉(zhuǎn)基因植物時(shí),常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,農(nóng)桿菌的作用是_____________________________________________________________ _________________________________________________________________。 (2)資料乙中的技術(shù)屬于________________工程的范疇,該工程是指以分子生物學(xué)相關(guān)理論為基礎(chǔ),通過基因修飾或基因合成,對(duì)________進(jìn)行改造,或制造一種________的技術(shù)。在該實(shí)例中,引起T4溶菌酶空間結(jié)構(gòu)改變的原因是組成該酶肽鏈的________序列發(fā)生了改變。 (3)資料丙屬于胚胎工程的范疇。胚胎移植是指將獲得的早期胚胎移植到________種的、生理狀態(tài)相同的另一個(gè)雌性動(dòng)物體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育成新個(gè)體的技術(shù)。在資料丙的實(shí)例中,兔甲稱為________體,兔乙稱為________體。 解析:(1)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法;構(gòu)建基因表達(dá)載體需要限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)目的基因所在的DNA和載體進(jìn)行切割,還需要DNA連接酶將目的基因與載體結(jié)合;農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的TDNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞,并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上,故可用農(nóng)桿菌感染植物,將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞。(2)資料乙中的技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程的范疇,通過改造基因,對(duì)T4溶菌酶這種蛋白質(zhì)進(jìn)行了改造,使組成該酶的氨基酸序列發(fā)生了改變,從而提高了T4溶菌酶的耐熱性。(3)由于同一物種的生理特性相同,因此進(jìn)行胚胎移植時(shí),受體與供體物種相同,易于成功;兔甲是提供胚胎的個(gè)體,稱為供體,兔乙是接受胚胎的個(gè)體,稱為受體。 答案:(1)顯微注射 限制性核酸內(nèi)切酶 DNA連接酶 農(nóng)桿菌可感染植物,將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中 (2)蛋白質(zhì) 現(xiàn)有的蛋白質(zhì) 新蛋白質(zhì) 氨基酸 (3)同 供 受 3.鐮刀型細(xì)胞貧血癥是一種單基因遺傳病,患者的血紅蛋白分子β肽鏈第6位氨基酸——谷氨酸被纈氨酸代替,導(dǎo)致功能異常。回答下列問題: (1)異常血紅蛋白的氨基酸序列改變的根本原因是編碼血紅蛋白基因的__________序列發(fā)生改變。 (2)將正常的血紅蛋白基因?qū)牖颊叩墓撬柙煅杉?xì)胞中,可以合成正常的血紅蛋白達(dá)到治療的目的。此操作__________(填“屬于”或“不屬于”)蛋白質(zhì)工程,理由是該操作__________________________________________________。 (3)用基因工程方法制備血紅蛋白時(shí),可先提取早期紅細(xì)胞中的__________,以其作為模板,在__________酶的作用下反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。cDNA與載體需在__________酶的作用下,拼接構(gòu)建基因表達(dá)載體,導(dǎo)入受體菌后進(jìn)行表達(dá)。 (4)檢測(cè)受體菌是否已合成血紅蛋白,可從受體菌中提取__________,用相應(yīng)的抗體進(jìn)行__________雜交,若出現(xiàn)雜交帶,則表明該受體菌已合成血紅蛋白。 解析:(1)基因是具有遺傳效應(yīng)的DNA片段,遺傳信息儲(chǔ)存在基因堿基對(duì)的排列順序中。(2)蛋白質(zhì)工程是指通過基因修飾或基因合成,對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求,故題中所述不屬于蛋白質(zhì)工程。(3)利用反轉(zhuǎn)錄法獲取目的基因時(shí),需先提取mRNA,在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。cDNA與載體需要在限制酶和DNA連接酶的作用下拼接構(gòu)建基因表達(dá)載體,才可導(dǎo)入受體菌。(4)檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),需要從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交。 答案:(1)堿基對(duì) (2)不屬于 沒有對(duì)現(xiàn)有的蛋白質(zhì)進(jìn)行改造 (3)mRNA 逆轉(zhuǎn)錄 限制酶和DNA連接 (4)蛋白質(zhì) 抗原—抗體 4.(2018山東淄博模擬)利用生物工程技術(shù)可從轉(zhuǎn)基因奶山羊乳汁中分離獲得人凝血因子Ⅳ,用于血友病的治療。請(qǐng)回答下列問題: (1)根據(jù)凝血因子Ⅳ基因上游和下游的堿基序列,可用__________技術(shù)獲取并擴(kuò)增基因。構(gòu)建該基因表達(dá)載體時(shí),所用到的工具酶是________________________, 該基因表達(dá)載體中,凝血因子Ⅳ基因的上游和下游分別是 ____________________________________________________________________。 (2)將目的基因表達(dá)載體導(dǎo)入奶山羊受精卵的常用方法是__________。受體細(xì)胞選用受精卵的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞大易操作、營養(yǎng)物質(zhì)含量高和_____________________。 (3)在體外胚胎培養(yǎng)時(shí),應(yīng)選用囊胚的__________進(jìn)行DNA分析,用于選擇雌性胚胎。此期的胚胎也適于胚胎分割移植,此技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是__________________。 (4)人凝血因子Ⅳ是一種胞外酶,該蛋白的加工是在__________等細(xì)胞器上進(jìn)行的。人凝血因子Ⅳ只在乳腺細(xì)胞合成的原因是_____________________________。 解析:(1)可利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因;構(gòu)建該基因表達(dá)載體時(shí),通常用同種限制酶切割含有目的基因的DNA和運(yùn)載體,再用DNA連接酶將目的基因與切開的運(yùn)載體連接起來,因此所用到的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。凝血因子Ⅳ基因?yàn)槟康幕?,在基因表達(dá)載體中,啟動(dòng)子位于目的基因的首端,終止子位于目的基因的尾端。(2)顯微注射技術(shù)是將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞的常用方法;受精卵作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞全能性高,細(xì)胞大易操作、營養(yǎng)物質(zhì)含量高等。(3)在體外胚胎培養(yǎng)時(shí),可選取囊胚的滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析性別鑒定。胚胎分割有利于提高胚胎的利用率,胚胎移植可以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛力。(4)分泌蛋白是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器上進(jìn)行加工的;基因的選擇性表達(dá)使人凝血因子Ⅳ只在乳腺細(xì)胞合成。 答案:(1)PCR 限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶 啟動(dòng)子和終止子 (2)顯微注射法 細(xì)胞全能性高 (3)滋養(yǎng)層細(xì)胞 充分發(fā)揮雌性動(dòng)物的繁殖潛力(或快速大量繁殖) (4)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體 基因的選擇性表達(dá) 5.(2018廣西桂林調(diào)研)將外源基因整合到葉綠體基因組中并成功表達(dá),這就是葉綠體轉(zhuǎn)基因技術(shù),該技術(shù)能有效改良植物的品質(zhì),請(qǐng)回答下列問題: (1)若要在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增外源基因,可采用PCR技術(shù),該技術(shù)利用了__________的原理。 (2)對(duì)大多數(shù)高等植物而言,與傳統(tǒng)的細(xì)胞核轉(zhuǎn)基因相比,葉綠體轉(zhuǎn)基因更穩(wěn)定,因其不會(huì)隨__________(填“花粉”或“卵細(xì)胞”)傳給后代,從而保持了__________(填“父本”或“母本”)的遺傳特性。 (3)利用________________處理植物體細(xì)胞可得到原生質(zhì)體,再通過__________法將目的基因?qū)朐|(zhì)體,當(dāng)原生質(zhì)體再長出______時(shí),便可通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)出相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因幼苗。 (4)一個(gè)完整的基因表達(dá)載體應(yīng)該包括啟動(dòng)子、________________等,啟動(dòng)子位于基因的首端,它是__________________________,有它才能啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。 解析:(1)PCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制。(2)葉綠體基因只能隨母本產(chǎn)生的卵細(xì)胞遺傳,不能隨花粉遺傳給后代,從而保持了母本的遺傳特性。(3)根據(jù)酶的專一性,用纖維素酶和果膠酶去除植物細(xì)胞的細(xì)胞壁,受體細(xì)胞為植物細(xì)胞時(shí),常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法或基因槍法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。(4)一個(gè)完整的基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因、標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn),啟動(dòng)子是RNA聚合酶結(jié)合和識(shí)別的部位。 答案:(1)DNA雙鏈復(fù)制 (2)花粉 母本 (3)纖維素酶和果膠酶 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化(或基因槍) 細(xì)胞壁 (4)目的基因、標(biāo)記基因、終止子 RNA聚合酶結(jié)合和識(shí)別的部位 6.家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)目的基因的能力,科研人員將人的干擾素基因?qū)爰倚Q細(xì)胞并進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng),可以提取干擾素用于制藥。 (1)某限制酶能專一性地識(shí)別DNA上GAATTC序列,并在特定位點(diǎn)切割某化學(xué)鍵,該化學(xué)鍵的名稱是__________。 (2)人的干擾素基因一般來自cDNA文庫,其屬于__________(填“基因組”或“部分基因”)文庫。 (3)基因工程操作過程的核心步驟是___________________________________。 啟動(dòng)子位于基因的__________,是__________識(shí)別和結(jié)合的部位。 (4)將目的基因?qū)爰倚Q細(xì)胞的常用方法是_____________________________。 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后,首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物________________,這是目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵。 (5)通過PCR技術(shù)可大量獲取目的基因,PCR技術(shù)的原理是__________。 解析:(1)限制酶可識(shí)別和切割DNA片段中特定的磷酸二酯鍵。(2)cDNA是利用mRNA反轉(zhuǎn)錄得到的,只含有該生物的部分基因。(3)啟動(dòng)子位于目的基因的首端,是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。(4)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用的方法是顯微注射法,目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是轉(zhuǎn)基因生物的(染色體)DNA是否插入了目的基因。(5)PCR技術(shù)利用了體內(nèi)DNA復(fù)制的原理大量擴(kuò)增目的基因。 答案:(1)磷酸二酯鍵 (2)部分基因 (3)基因表達(dá)載體的構(gòu)建 首端 RNA聚合酶 (4)顯微注射法 (染色體)DNA是否插入了目的基因 (5)DNA復(fù)制 7.科學(xué)家通過利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù)改造Rubisco酶基因,提高了光合作用過程中Rubisco酶對(duì)CO2的親和力,從而顯著提高了植物的光合作用速率。請(qǐng)回答下列問題: (1)PCR過程所依據(jù)的原理是__________,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根據(jù)這一序列合成__________;擴(kuò)增過程需要加入__________酶。 (2)啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,其作用是________________。目的基因能在不同生物體內(nèi)正常表達(dá)原來的蛋白質(zhì),說明整個(gè)生物界__________。 (3)可利用定點(diǎn)突變的DNA構(gòu)建基因表達(dá)載體。常用__________將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞,還需用到植物細(xì)胞工程中的__________技術(shù),來最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。 解析:(1)PCR依據(jù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制原理,要依據(jù)目的基因兩端已知的脫氧核苷酸序列合成引物,擴(kuò)增過程需要加入耐高溫的DNA聚合酶(或Taq酶)。(2)啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合部位,能驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄出mRNA;因生物界共用一套遺傳密碼,所以目的基因可以在不同細(xì)胞內(nèi)表達(dá)合成出相同的蛋白質(zhì)。(3)常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞,借助于植物組織培養(yǎng)技術(shù),獲得轉(zhuǎn)基因植物。 答案:(1)DNA雙鏈復(fù)制 引物 耐高溫的DNA聚合(或Taq) (2)RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合部位,驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄出mRNA 共用一套密碼子 (3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 植物組織培養(yǎng) 8.通過基因工程的方法,科學(xué)家采用花粉管通道法將毒蛋白基因轉(zhuǎn)入棉花植株并獲得成功表達(dá)。棉鈴蟲吃了這種轉(zhuǎn)基因棉花的植株后就會(huì)死亡?;ǚ酃芡ǖ婪ㄊ侵咐弥参锘ǚ勖劝l(fā)時(shí)形成的花粉管通道將毒蛋白基因送入胚囊,進(jìn)而導(dǎo)入尚不具備細(xì)胞壁的合子或早期胚體細(xì)胞中,借助天然的種胚系統(tǒng),形成含有目的基因的種胚。請(qǐng)回答下列問題: (1)基因工程中常用的“剪刀”是指________;常用的“針線”是指__________。 (2)利用花粉管通道法將毒蛋白基因?qū)朊藁?xì)胞,此過程是基因工程操作步驟中的第三步,即__________,又稱為__________。獲取目的基因時(shí),如果基因比較小,__________已知,則可以通過DNA合成儀用化學(xué)方法直接合成。 (3)該目的基因在導(dǎo)入受體細(xì)胞前需要與載體結(jié)合,目前經(jīng)常使用的載體是__________,重組的該結(jié)構(gòu)除了目的基因之外,還有__________、__________、__________和復(fù)制原點(diǎn)等結(jié)構(gòu)。這是基因工程操作步驟中的第二步,該步驟是基因工程的__________。 (4)基因工程操作的第四步是目的基因的檢測(cè)與鑒定,其中分子水平的檢測(cè)又分三步:首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因,采用的技術(shù)是__________;其次還要檢測(cè)__________,方法同樣是采用分子雜交技術(shù);最后檢測(cè)__________,方法是__________雜交技術(shù)。 (5)為了使毒蛋白只出現(xiàn)在棉花葉肉細(xì)胞中,在進(jìn)行基因工程第二步時(shí)應(yīng)該加上__________等調(diào)控組件。 解析:(1)基因工程中常用的“剪刀”是指限制酶;常用的“針線”是指DNA連接酶,連接目的基因和運(yùn)載體形成重組DNA。(2)基因工程的基本操作步驟主要包括四步:①目的基因的獲??;②基因表達(dá)載體的構(gòu)建;③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞;④目的基因的檢測(cè)與鑒定。其中目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞屬于第三步,即轉(zhuǎn)化過程;在獲取目的基因時(shí),如果目的基因比較小,核苷酸序列又已知,則可以通過DNA合成儀人工合成。(3)基因工程中最常用的運(yùn)載體是質(zhì)粒,可以將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。構(gòu)建基因表達(dá)載體是基因工程的核心步驟,該表達(dá)載體的組成包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。(4)DNA上是否插入了目的基因的檢測(cè)方法是DNA分子雜交技術(shù);目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA的檢測(cè)方法是分子雜交技術(shù);目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法是抗原—抗體雜交技術(shù)。(5)為了使毒蛋白只出現(xiàn)在棉花葉肉細(xì)胞中,應(yīng)在目的基因前加上葉肉蛋白基因啟動(dòng)子,構(gòu)建成基因表達(dá)載體。 答案:(1)限制酶 DNA連接酶 (2)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 轉(zhuǎn)化 核苷酸序列 (3)質(zhì)?!?dòng)子 終止子 標(biāo)記基因 核心 (4)DNA分子雜交技術(shù) 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA 目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 抗原—抗體 (5)葉肉蛋白基因啟動(dòng)子 9.回答以下有關(guān)基因工程的知識(shí): (1)獲取目的基因時(shí),可從基因文庫中直接提取,而基因文庫包括________和________,其中要用到反轉(zhuǎn)錄技術(shù)的是________。 (2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),用限制酶Ⅰ切割質(zhì)粒載體可產(chǎn)生“”的片段,該限制酶識(shí)別的核苷酸序列是_________,用限制酶Ⅱ切割含有目的基因的DNA,兩種酶切割DNA產(chǎn)生的末端能拼接在一起,則限制酶Ⅱ必須具有________的特點(diǎn)。 (3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞時(shí),如果受體細(xì)胞是水稻(單子葉植物)細(xì)胞,則常用的方法是______________;如果受體細(xì)胞是大腸桿菌,則需要用鈣離子處理,處理后的細(xì)胞具有______________的特點(diǎn)。 (4)檢測(cè)與鑒定目的基因時(shí),檢測(cè)目的基因在真核細(xì)胞中能否穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是______________。鑒定目的基因是否成功表達(dá),除了分子水平檢測(cè)外,還可以從________水平進(jìn)行鑒定。 解析:cDNA文庫中的DNA是由mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶催化合成的;一個(gè)完整的基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、目的基因和復(fù)制原點(diǎn)等;將目的基因?qū)雴巫尤~植物細(xì)胞內(nèi)常用的方法是基因槍法。 答案:(1)基因組文庫 部分基因文庫(如cDNA文庫) cDNA文庫 (2) 切割產(chǎn)生的DNA片段末端與限制酶Ⅰ切割產(chǎn)生的相同 (3)基因槍法 容易從周圍環(huán)境吸收DNA分子 (4)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體上是否插入了目的基因 (生物)個(gè)體- 1.請(qǐng)仔細(xì)閱讀文檔,確保文檔完整性,對(duì)于不預(yù)覽、不比對(duì)內(nèi)容而直接下載帶來的問題本站不予受理。
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