《DNA重組技術(shù)的基本工具》參考教案

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1、1.1DNA重組技術(shù)的基本工具 教學(xué) 教學(xué)內(nèi)容 教學(xué)手段 預(yù)期 過(guò)程 和方法 目標(biāo) 1創(chuàng)設(shè)情 師:1973年轉(zhuǎn)基因微生物一轉(zhuǎn)基因大 境,引入對(duì) 腸桿菌問(wèn)世;1980年第一個(gè)轉(zhuǎn)基因動(dòng) 基因重組技 物一轉(zhuǎn)基因小鼠誕生;1983年第一例 聯(lián)系舊知識(shí), 術(shù)工具的學(xué) 轉(zhuǎn)基因植物一轉(zhuǎn)基因煙茸出現(xiàn),實(shí)現(xiàn) 習(xí)。 了一種生物的某些性狀在另一種生物中的表達(dá)。 拿出兩種 使學(xué)生認(rèn)識(shí) 到基因工程 同學(xué)們,性狀的表達(dá)與我們從前學(xué)過(guò) 的什么過(guò)程后關(guān)? 生:與基因控制蛋白質(zhì)的合成有關(guān)。 師:假若這是一個(gè)DNA上的能指導(dǎo)合 成某種藥物蛋白的基

2、因(老師用手指 不同顏色的等寬的紙條。 學(xué)生討論。 也是建立任基因控制蛋白質(zhì)合成的基礎(chǔ)理論上的,不可割 出紙條上的該區(qū)段),而這是一條煙茸 裂。 的DNA(老師拿出另一紙條)。同學(xué)們分析,要實(shí)現(xiàn)藥物基因在煙茸中的表 第三個(gè)內(nèi) 抽象艾直觀,增強(qiáng)誘思的 達(dá),提前要做哪些關(guān)鍵工作? 咨不好回 效果。 生:1.要將藥物基因切割卜來(lái); 答,教師要 2.要將藥物基因整合到煙茸的DNA 引導(dǎo)。 上。 師:同學(xué)們說(shuō)得對(duì)!但還應(yīng)該實(shí)際考 使學(xué)生認(rèn)識(shí) 慮問(wèn)題,這兩條紙帶所代表的DNA是 在同一個(gè)細(xì)胞中嗎? 生:不是。

3、贊揚(yáng)也是教育的一種方式。 到科學(xué)的發(fā)展信賴于技術(shù)的創(chuàng)新。 師:所以這里就存在一個(gè)基因轉(zhuǎn)移的 實(shí)際問(wèn)題,誰(shuí)能具體說(shuō)一下? 生:就是如何將控制合成藥物的基因 轉(zhuǎn)入煙茸細(xì)胞的問(wèn)題。 師:同學(xué)們思考的問(wèn)題,正是科學(xué)家 們思考的問(wèn)題。剛才我們所探討的工 2.學(xué)習(xí)分子手術(shù) 刀”TS制酶。 作,都是在分子水平上進(jìn)行的,切割也好,連接也好,轉(zhuǎn)移也好,無(wú)一例外。中國(guó)有句俗語(yǔ)叫沒(méi)有金剛鉆兒,不攬瓷器活兒”??茖W(xué)家們?cè)趯?shí)施基因工程之前,苦苦求索,終于找到了實(shí)施基因工程的三種金剛鉆兒”,使基因工程的設(shè)想成為了現(xiàn)實(shí)。這三種金剛鉆兒”,一是準(zhǔn)確切割D

4、NA的工具,分子手術(shù)刀”一限制酶;二是DNA片段的連接工具,分子縫合針”——DNA接酶;三是基因轉(zhuǎn)移工具,分子運(yùn)輸車”一基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體。下面我們就來(lái)學(xué)習(xí)這方面的內(nèi)容。 師:在進(jìn)入對(duì)限制酶的學(xué)習(xí)時(shí),你們可能最關(guān)心的是這種工具酶到哪里去尋找。我們不妨從以往學(xué)過(guò)的知識(shí)談起,引起思考。自然界中有各種生物,它們所處的環(huán)境不是真空。一些生物的DNA可能進(jìn)入另一種生物的細(xì)胞中。這種可能,同學(xué)們可用什么實(shí)例來(lái)說(shuō)明? 生:噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)。 師:那么現(xiàn)今存在的生物為什么沒(méi)有在長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程中被外源DNA的入侵而絕滅,仍能保持一種穩(wěn)定狀態(tài)呢? 生:生物體有的有免疫系統(tǒng),如動(dòng)物; 引導(dǎo)大家

5、思考。 學(xué)生討論。 討論中及時(shí)發(fā)現(xiàn)有創(chuàng)新思維的學(xué)生,鼓勵(lì)發(fā)表意見(jiàn)。學(xué)生再次議論。 及時(shí)鼓勵(lì) 學(xué)生。 以上教學(xué)也是將三種操作工具整合到一個(gè)完整的過(guò)程之中 將直白的教 學(xué)內(nèi)容變得 有思維力度 培養(yǎng)學(xué)生思 維的創(chuàng)造性。 以上教學(xué)改 變直白的教 學(xué)方式,通過(guò) 誘思,提高學(xué) 生的思維能 力。 引導(dǎo)學(xué)生與 DNA酶作對(duì) 比,在比較中 準(zhǔn)確認(rèn)識(shí)

6、限 制酶。 讓文字與插 圖結(jié)合,使抽 象的文字在 直觀的插圖 中得以體現(xiàn)。 學(xué)生看插 圖。 學(xué)生看書(shū) 有的有保護(hù)作用的組織、器官,如植 物。 師:那么作為單細(xì)胞的生物來(lái)講,怎 么會(huì)有那么復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)?它如 何來(lái)抵抗入侵的外源DNA,保護(hù)自身 學(xué)生看書(shū)呢? 生:只有讓外來(lái)的DNA失效,才能保 護(hù)自身。 師:那么怎樣才能讓DNA失效? 生:用DNA酶,因?yàn)樵诒匦拚n本中學(xué) 過(guò)。教師點(diǎn)撥 師:用DNA酶,那么生物自身的DNA不也要失效了嗎? 生:一種特殊的酶,能切割外來(lái)的DNA,而對(duì)自身不切割。 師:根據(jù)你們的分析可知,這種酶可能是一種不同于DNA酶的、我們

7、還沒(méi)有認(rèn)識(shí)的酶。我們討論至此,同學(xué)們是否有了從哪里獲得這種酶的意向?生:到單細(xì)胞的生物中去找。 師:科學(xué)家的基本意向也和同學(xué)們一樣。單細(xì)胞生物比多細(xì)胞生物更容易受到外源DNA的侵入。在長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程中,使其必須有處理外源DNA的酶??茖W(xué)家們經(jīng)過(guò)不懈的努力,終于從原核生物中分離純化出這種酶,叫做限制酶。迄今已從近300種微生物中分離出4000種限制酶。這種酶與我們以前知道的DNA酶的作用是不同 3.學(xué)習(xí)分 子縫合 針”——DN 連接酶。 的。請(qǐng)同學(xué)們看書(shū),學(xué)習(xí)限制酶特有的作用。 師:書(shū)中告訴我們這種特殊的酶有什么作用? 生:它們能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核甘酸序列,并且使

8、每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核甘酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)。 師:以上這句話,說(shuō)出了兩層意思。一是識(shí)別特定核甘酸序列。請(qǐng)同學(xué)們看圖,EcoRI只能識(shí)別GAATTC的核甘酸序列,SmaI只識(shí)別CCCGGG的核甘酸序列。第二層意思是從特定部A、,,…、一,、,一、, 位的兩個(gè)核甘酸之間切開(kāi)。請(qǐng)同學(xué)們看圖,EcoRI就從G和A之間切開(kāi),SmaI就從C和G之間切開(kāi)。 師:剛才我們提到科學(xué)家們已經(jīng)分離出4000多種限制酶。由于酶的不同,它們識(shí)別的特定核甘酸序列也不同,這樣就為我們切割DNA提供了多種特定的手術(shù)刀”。但它們切割DNA后形成的末端有兩種可能,請(qǐng)同學(xué)看圖回答。 生:一種形成黍占性末端,一種形成

9、平末端。 師:那么這兩種末端是如何形成的呢?請(qǐng)從書(shū)中找到答案。 生:限制酶在它識(shí)別序列的中心位置兩側(cè)將DNA兩條單鏈分割開(kāi),就形成 學(xué)生看書(shū),接著議論。 教師點(diǎn)撥。 利用插圖。 看書(shū)學(xué)習(xí)。 將局部問(wèn)題整合到 實(shí)際工作 聯(lián)系舊知識(shí),提供一個(gè)比較的對(duì)象,在比較中加深對(duì)DNA連接酶的認(rèn)識(shí)。 提高學(xué)生思維的深刻性。 準(zhǔn)確認(rèn)識(shí)DNA連接酶的作用部位。 解決本課的難點(diǎn)。 4 .學(xué)習(xí)分 子運(yùn)輸 車”一基因 進(jìn)入受體細(xì) 胞的載體。 5 .布置作 業(yè)。 黏性末端,而從識(shí)別序列的中心位置 切開(kāi)就產(chǎn)生平末端。 師:切斷的DNA片段要與受體細(xì)胞的 DNA連接,同學(xué)們根據(jù)以往

10、學(xué)習(xí)的經(jīng) 驗(yàn),能說(shuō)出用什么酶嗎? 生:用DNA復(fù)制中的DNA聚合酶。 師:同學(xué)們想到用DNA聚合酶是很正 常的,但是現(xiàn)在我們學(xué)習(xí)的這種連接 與DNA復(fù)制中的連接有所不同。請(qǐng)看 書(shū)后議論,由同學(xué)來(lái)回答。 生:DNA連接酶是將雙鏈的DNA片 段連接起來(lái),而DNA聚合酶則是將一 個(gè)個(gè)脫氧核甘酸連接起來(lái)。 師:同學(xué)們說(shuō)得對(duì),但還不深刻。比 如剛才說(shuō)DNA連接酶是將雙鏈的 的全過(guò)程 中思考。 學(xué)生討論 學(xué)生歸納 提出問(wèn)題,誘 導(dǎo)思考,解決 難點(diǎn)。 培養(yǎng)思維的 廣闊性。 培養(yǎng)學(xué)生的 歸納能力。 DNA片段連接起來(lái),就是說(shuō)DNA連接酶是同時(shí)連接雙鏈的切口,而DNA聚合酶只是在單鏈上

11、將一個(gè)個(gè)脫氧核甘酸連接起來(lái)。相同之處都是通過(guò)形成磷酸二酯鍵來(lái)連接的。請(qǐng)同學(xué)們?cè)趫D中正確指出其位置。 師:開(kāi)始時(shí),我們學(xué)習(xí)了限制酶切割后有兩種不同的結(jié)果,一種產(chǎn)生黏性末端,一種產(chǎn)生平末端。那么恢復(fù)它們的連接,所用DNA連接酶是否可以不加選擇?同學(xué)們應(yīng)從書(shū)中求得真知,自己解答這個(gè)問(wèn)題。 學(xué)生結(jié)合 插圖尋找 課內(nèi)與課 外結(jié)合。 利用插圖加 深對(duì)載體必 須具備條件 的認(rèn)識(shí)。 體現(xiàn)基礎(chǔ)知 識(shí)的準(zhǔn)確運(yùn) 用。在運(yùn)用中 加深對(duì)基礎(chǔ) 知識(shí)的深層 生:應(yīng)該有所選擇。因?yàn)镋coliDNA連接酶只能將雙鏈DNA片段黏性末端 之間連接起來(lái),不能將雙鏈DNA片段平末端之間連接起來(lái)。T4DNA連接酶既可

12、縫合”雙鏈黏性末端,也可縫合”雙鏈DNA的平末端,但平末端之間連接的效率比較低。 師:?jiǎn)渭兊腄NA片段是很難導(dǎo)入受體細(xì)胞的,所以我們將切割卜來(lái)的目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞就需要有一個(gè)分子運(yùn)輸車”幫助。不是任何的分子運(yùn)輸車”都可以用來(lái)作目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體的。其中的理由要從實(shí)際情況出發(fā)考慮才能清楚。卜向老師提出四個(gè)問(wèn)題供大家思考。 1 .假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制將怎樣? 2 .作為載體沒(méi)有切割位點(diǎn)將怎樣? 3 .目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞,你如何去察覺(jué)? 4 .如果載體對(duì)受體細(xì)胞肩害將怎樣?不能分離會(huì)怎樣? 生:1.導(dǎo)入受體細(xì)胞的目的基因/、能復(fù)制,將在細(xì)胞增殖中丟失。 5

13、 .載體沒(méi)有切割位點(diǎn),外源的目的基因不可能插入。 6 .如果載體上有遺傳標(biāo)記基因,這樣,在載體進(jìn)入受體細(xì)胞后,就可通過(guò)標(biāo)記基因的表達(dá)來(lái)檢測(cè)。 7 .載體對(duì)受體肩害,將影響受體細(xì)胞新陳代謝,進(jìn)而使轉(zhuǎn)入的目的基因也無(wú) 立足之地。載體不能分離,就不能獲得更多帶有目的基因的載體。 師:可見(jiàn)以上內(nèi)容,都是在選擇合適載體時(shí)必須考慮的。請(qǐng)同學(xué)們閱讀課文,歸納出充當(dāng)基因進(jìn)入受體細(xì)胞載體的必要條件。 生:1.能自我復(fù)制; 2 .有切割位點(diǎn); 3 .有遺傳標(biāo)記基因; 4 .對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害、易分離。 師:目前通常利用的載體是質(zhì)粒”。質(zhì)粒是能友好”寄宿在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的小型的環(huán)狀DNA

14、。卜間讓我們通過(guò)插圖T來(lái)認(rèn)識(shí)質(zhì)粒,尤其要在質(zhì)粒載體結(jié)構(gòu)模式圖上找出剛才歸納幾個(gè)條件的具體體現(xiàn)。 生:找到復(fù)制原點(diǎn)”一說(shuō)明質(zhì)粒能復(fù)制并能帶著插入的目的基因T復(fù)制。 找到目的基因的插入位點(diǎn)”一說(shuō)明質(zhì)粒肩切割位點(diǎn)。 找到氨節(jié)青霉素抗性基因”一說(shuō)明有標(biāo)記基因的存在,將來(lái)口」用含青毒素的培養(yǎng)基鑒別。 找到此質(zhì)粒來(lái)自大腸桿菌一說(shuō)明沒(méi)有危害,大腸桿菌是非致病菌,大腸桿菌分裂快,也便于從大量復(fù)制個(gè)體中分離出來(lái)。 1.完成書(shū)后練習(xí)題。 2.認(rèn)真完成模擬制作DNA?組模 型。希望大家動(dòng)手、動(dòng)腦協(xié)調(diào)配合,體會(huì)每一步驟在基因重組中的真實(shí)含義。最后結(jié)束時(shí)加強(qiáng)反思,回答書(shū)中提出的兩個(gè)問(wèn)題。 經(jīng)典例題剖析 下圖表示限制酶切割某DNA的過(guò)程,從圖中可知,該限制酶能識(shí)別的堿基序列 及切點(diǎn)是() A.CTTAAG,切點(diǎn)在C和T之間B.CTTAAG,切點(diǎn)在G和A之間 C.GAATTC,切點(diǎn)在G和A之間D.CTTAAC,切點(diǎn)在C和T之間 【解析】由圖不難看出該限制酶識(shí)別的堿基序列是GAATTC,切點(diǎn)是G與A之間。 答案C

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