高度靈敏，高度可重復(fù)的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)系統(tǒng)摘要本研究，我們已經(jīng)開發(fā)出一種新型激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)（LIF）系統(tǒng)，這是特別好，比如在毛細(xì)管電泳和微芯片為基礎(chǔ)的分離和微反應(yīng)器裝置，如微流體過程測(cè)量的理想選擇。為了獲得高性能的系統(tǒng)，我們作為測(cè)量探頭以及一個(gè)物鏡致動(dòng)器是在一個(gè)光軸的垂直和水平方向振搗根據(jù)一個(gè)簡(jiǎn)單的方法，市售的光學(xué)讀取頭。我們的系統(tǒng)優(yōu)于傳統(tǒng)的系統(tǒng)，因?yàn)樗哂懈哽`敏度和高重復(fù)性，它可以在不復(fù)雜，昂貴的高精密組件和檢測(cè)探頭定位裝置實(shí)施。關(guān)鍵詞：激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)，激光頭，音圈電機(jī)，振動(dòng)的方法，無需微調(diào)，靈敏度高，重現(xiàn)性高，成本低，結(jié)構(gòu)緊湊，微流體設(shè)備。1 引言最近，使用小芯片生化分析性能吸引了比傳統(tǒng)的系統(tǒng)，因?yàn)樗脑S多優(yōu)點(diǎn)相當(dāng)?shù)闹匾?。該芯片最具吸引力的特點(diǎn)是它的體積小。它的使用，確保反應(yīng)快速，高效分離，減少了樣品和分析所需的試劑可觀。由于這種出色的功能，芯片也吸引了諸如環(huán)境監(jiān)測(cè)，生命科學(xué)和醫(yī)療保健領(lǐng)域相當(dāng)重視，因?yàn)樵谶@些領(lǐng)域中使用的分析樣品的數(shù)量相當(dāng)小[1,2]。但是，這些芯片體積小，同時(shí)要求非常高的檢測(cè)靈敏度。 1 0957-0233/08/085404 10 $之間在微流體器件測(cè)量用于檢測(cè)計(jì)劃的不同類型的 30.00，激光誘導(dǎo)熒光（LIF）方法被認(rèn)為是最敏感的方法[3-5 J.目前，有各種 LIF 系統(tǒng)可供選擇，包括一個(gè)單分子在液體中的敏感性LIF 顯微鏡。但是，它是非常困難的發(fā)展離不開一個(gè)快速的檢測(cè)靈敏度下降，小型和廉價(jià)的 LIF 系統(tǒng)。 ? 2008 IOP 出版印刷有限公司在英國的實(shí)際執(zhí)行，特別是在諸如醫(yī)療實(shí)驗(yàn)室免疫分析技術(shù)，測(cè)試芯片必須是一次性使用的芯片?？梢杂袃煞N類型的 LIF 系統(tǒng)，一個(gè)系統(tǒng)，一個(gè)設(shè)備和一個(gè)集成芯片熒光檢測(cè)系統(tǒng)組成（“綜合型” ）[6]或微芯片和檢測(cè)系統(tǒng)（“分離式” ） 。后者的制度，如一次性使用的試紙，并使用自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，保證了便于分析實(shí)現(xiàn)的簡(jiǎn)單處理的技術(shù)優(yōu)勢(shì)。然而，在“分離式”系統(tǒng)，就很難保持相同的芯片之間以及與不同的芯片檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)量的相對(duì)位置，這會(huì)導(dǎo)致大量的實(shí)驗(yàn)誤差。在傳統(tǒng)的方法，高精度掃描階段是必要的，以便調(diào)整之間的芯片和檢測(cè)探頭適當(dāng)?shù)南鄬?duì)位置。這一要求導(dǎo)致非常昂貴，大，重型設(shè)備。這種情況也使得它很難投入實(shí)際使用這個(gè)系統(tǒng)。因此有必要開發(fā)一種廉價(jià)和緊湊的系統(tǒng)，有一個(gè)簡(jiǎn)單的機(jī)制和高靈敏度和高重復(fù)性。為了達(dá)到這個(gè)目的，我們開發(fā)了具有高靈敏度和高重復(fù)性相對(duì)便宜，緊湊的 LIF 系統(tǒng)。我們的系統(tǒng)使用了高數(shù)字化 1 光圈鏡頭作為測(cè)量探頭市售的激光頭。此外，物鏡致動(dòng)器是使用，它是在沿光軸的垂直和水平方向振動(dòng)駕駛在適當(dāng)?shù)念l率，同時(shí)用一個(gè)簡(jiǎn)單的方法方向的執(zhí)行機(jī)構(gòu)。例如，如果我們應(yīng)用在微流體器件測(cè)量我們的系統(tǒng)中，光束焦點(diǎn)將移動(dòng)在垂直和水平方向，然后掃描整個(gè)二維的微節(jié)在高速設(shè)備。因此，人們可以看到，測(cè)量結(jié)果可以用高靈敏度，高重復(fù)性和無之間的采樣位置，芯片和檢測(cè)頭微調(diào)獲得。因此，我們的微分析系統(tǒng)具有較高的性能，成本和空間效益。圖 1 設(shè)計(jì)試驗(yàn)裝置：（一）頂視圖和（b）側(cè)視圖。2 系統(tǒng)描述2.1。微流體測(cè)試裝置在本節(jié)中，我們描述了微流體裝置，是用來評(píng)估我們系統(tǒng)的性能。大多數(shù)微流體器件制作在玻璃或硅。然而，許多是在聚合物基微流體器件的研究，目前正專注于寶 1 vdimethyl 氧化硅甲烷（PDMS） ，由于其成本低，易于操作。此外，一些研究報(bào)告 PDMS 為基礎(chǔ)的微流體裝置[7-9]，PDMS 是光學(xué)透明的波長范圍從 235 運(yùn)行到近紅外范圍內(nèi)，因此在整個(gè)可見光區(qū)的光學(xué)檢測(cè)是可能的。 PDMS 的自體熒光也低比其他聚合物。該測(cè)試設(shè)備制造過程的基礎(chǔ)上，PDMS [11-14]副本成型技術(shù)。我們將這個(gè)過程解釋下。首先，為微流體設(shè)備主是發(fā)達(dá)國家使用標(biāo)準(zhǔn)光刻和濕法化學(xué)蝕刻技術(shù)：（1）通道的設(shè)計(jì)是由使用 Adobe Illustrator 10.0.3，然后印在透明薄膜是用作遮罩了。一個(gè)積極的光致抗蝕劑薄層（。PMER P - RZ300：東京Ohka 工業(yè)株式會(huì)社，日本神奈川縣）是在空白面具板（Cr/CrQ2，50 納米; ULVAC 設(shè)備銷售公司，日本東京。 ）表面涂層旋和隨后暴露于長波的長度約 2 UL通過與載玻片對(duì)準(zhǔn)透明度分鐘 traviolet 燈。 （2）取得 20 / XM 厚的微結(jié)構(gòu)，光致抗蝕劑被允許發(fā)展中的顯影液（PMER P - 1S;東京 Ohka 興業(yè)）的另外 2 分鐘。與渠道設(shè)計(jì)模板進(jìn)一步烘烤在 85 15 熱板，以加強(qiáng)粘連分鐘 C 和隨后逐漸冷卻 1-2 小時(shí)至室溫在這個(gè)過程中，所有的光阻去除除了抵制在定義的渠道領(lǐng)域。 （3）為了確保順利脫模，玻璃幻燈片在 17％W / V 鈰（IV）二銨硝酸溶液中去除暴露鍍鉻層。漂洗后在 2 M HNO：“一個(gè)有大約 20 FTM 通道高度掌握被蝕刻在 1 M NH4F/IM HF 25 分鐘在 25℃下獲得解決方案的玻璃，在 PDMS 芯片成型對(duì)主。 （四）PDMS 預(yù)聚物溶液（Sylgard ? 184：道康寧東麗有限公司，東京，日本）澆到主用持有的解決方案框架。 （5）它是固化在烤箱在 65℃1 h 后在 100 秒 1 發(fā)彗星治愈之后。 （6）固化后的 PDMS 芯片去皮 O ：玻璃的主人，并用直徑 1.6 主席訪問孔分別到芯片打了個(gè)使用金屬管。 （7）PDMS 芯片是不可逆的鍵合 1.2 毫米等離子氧治療兩個(gè)表面厚玻璃板，然后才接觸到[9]提出。隨后硅管插入孔的訪問和 PDMS 粘。圖 2 顯示了制造測(cè)試設(shè)備。mmJL圖 2 外觀的制造測(cè)試設(shè)備。2.2．光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)現(xiàn)在，我們?cè)敿?xì)解釋了光學(xué)檢測(cè)部分。對(duì)我們 LIF 系統(tǒng)原理圖描述如圖 3所示。為熒光激發(fā)光源是連續(xù) Nd：YAG 倍頻帶的 532 NRN（= AI） ，一個(gè)光束直徑為 1.2 毫米，9.75 毫瓦的輸出功率為 1％，保證功率穩(wěn)定波長的激光。在帶寬峰峰值噪聲從 DE 到 50 兆赫不超過 0.1％（MSL - 532，長春新產(chǎn)業(yè)。中國） 。激發(fā)光束穿過 25％的中性密度（ND）濾鏡（輸出功率為 2.43 毫瓦） ，并通過微型電磁機(jī)械切碎活塞行程為 5 mm（PI 105A，TDK 公司，日本東京） ，其中弧要避免熒光光漂白的樣品?；钊畲蟮臄夭l率為 60 赫茲。光束經(jīng)過束分離器和一個(gè) 1 / 4 波長板。它是那么反射前被轉(zhuǎn)移了 0.45 數(shù)值孔徑 NA（傳出）和焦距為 3.17 毫米/一個(gè)光頭物鏡二色鏡。梁，然后集中到一個(gè)小點(diǎn)，并預(yù)計(jì)到樣品。梁力之三值自動(dòng)對(duì)焦鏡頭，通過客觀的逝世是 1.87 兆瓦，光斑大小為0.97 /。英里。一個(gè)樣品架，這是作為一個(gè)為測(cè)試設(shè)備定位指南中使用，是擺在上面的光學(xué)檢測(cè)部分物鏡。步進(jìn)電機(jī)是安裝在持有人方和測(cè)試設(shè)備，它是在持有人設(shè)定，定位精度為 40 ?，在水平（X）的方向和 20 ° IM 在垂直（Z）IM 方向穿過通道。對(duì)于多通道測(cè)量，渠道之間的測(cè)試設(shè)備和物鏡驅(qū)動(dòng)器中的無梁運(yùn)動(dòng)的立場(chǎng)是大約 1.51 毫米。聚焦光吸收和排放，從在一個(gè)較長的波長（= ^ 2）根據(jù)斯托克斯位移樣品熒光光了。這種熒光收集的一個(gè)有 0.60（遷入）NA 皮卡物鏡。在光錐可以用此物鏡收集 10.0 的總 4tt 立體角％，在假設(shè)發(fā)射光子輻射四面八方。下面的兩色鏡子，反映了 550 萬（= ^ 3）波長的光并傳送超過這個(gè)波長的光，從而只傳輸一個(gè)熒光光譜。接下來，光線過濾再次使用的排放過濾器，即一個(gè)帶通濾波器，只傳輸?shù)臒晒獍l(fā)射波長，檢測(cè)使用光電倍增管（PMT R6355; Hamamat.su 光子學(xué)株式會(huì)社，日本靜岡縣） 。在輸出路徑，一個(gè)自制的圓錐型為 2 毫米 x 4 毫米口徑光學(xué)擋板組裝，以減少在沿 X - direetion 流浪檢測(cè)的反射和散射的結(jié)果是自動(dòng)控制步進(jìn)在 5 毫米間隔馬達(dá)，最大速度為 20 毫米的“1。地面之間的工作距離板底部的重復(fù)執(zhí)行，并為每個(gè)通道中的所有周期的最高值的平均值作為最后的考慮測(cè)得的該通道的熒光信號(hào)值，應(yīng)該指出的是，它有可能實(shí)現(xiàn)高通量的測(cè)量，因?yàn)閿?shù)據(jù)采集和數(shù)據(jù)分析在測(cè)量過程中的往復(fù)循環(huán)執(zhí)行，在下一節(jié)中，它是觀察到的振動(dòng)方法中起著重要的作用。圖 3 對(duì)我們 LIF 系統(tǒng)原理圖描述光學(xué)拾音圖 5。 開環(huán)的光學(xué)拾音物鏡致動(dòng)器的動(dòng)態(tài)響應(yīng)特性：（一）轉(zhuǎn)讓為特征的重點(diǎn)方向和（b）轉(zhuǎn)移軌道的方向特性。頻率[Hz]聚焦至于執(zhí)行測(cè)量準(zhǔn)備，第一，在物鏡致動(dòng)器掃描范圍應(yīng)設(shè)置檢測(cè)之間的通道要解決和玻璃板或 PDMS 蓋板的界限。之間的空白溶液和玻璃地面板或空白溶液和 PDMS 蓋板的重點(diǎn)方向邊界可以由 astigmatieally 檢測(cè)的重點(diǎn)錯(cuò)誤信號(hào) S 形曲線。之間的空白溶液和 PDMS 蓋板的軌道方向邊界可以由監(jiān)察沿地面之間的玻璃板塊與板塊邊界 PDMS 蓋反射信號(hào)的強(qiáng)度。因此，通過執(zhí)行此操作，可以設(shè)置在兩個(gè)軌道的重點(diǎn)和方向的 VCM 掃描范圍。雖然這一邊界檢測(cè)預(yù)掃描步驟是在情況下的深度和寬度的微不明有效的，它不一定需要我們的實(shí)驗(yàn)，因?yàn)樯疃群臀⑼ǖ缹挾仁且阎?，和?0 ?精度粗糙調(diào)整 IM 和 20 / X 和 Zdirections，分別和± 20 /雙向 IM 準(zhǔn)確性 IM）已經(jīng)完成用步進(jìn)電機(jī)的樣品架。因此，VCM運(yùn)動(dòng)范圍可以預(yù)先設(shè)定，以涵蓋所有具有足夠余量的 mierochannels 二維部分。我們采用以下方法進(jìn)行振動(dòng)。這種方法特別適合于微芯片為基礎(chǔ)的測(cè)量。在這項(xiàng)研究中，我們使用高精度，同步掃描三角信號(hào)，從積極的 V \以適當(dāng)?shù)念l率，在焦點(diǎn)（Z）和跟蹤（X）方向負(fù) V2。該信號(hào)的頻率決定的基礎(chǔ)上，條件是為 Z 方向(=/])振動(dòng)頻率高于對(duì) X 方向(=/:).在我們的系統(tǒng)中，信號(hào)是由一個(gè) DA 轉(zhuǎn)換器，以 4 MHz 采樣率 16 位分辨率與來自控制單元的輸出數(shù)據(jù)進(jìn)行。因此，VCM 沿 X 方向移動(dòng)物鏡反復(fù)掃描，而它沿同步 Zdirection 振動(dòng)。作為一個(gè)結(jié)果，光斑掃描的mierochannels 整個(gè)二維高速移動(dòng)的光束的焦點(diǎn)部分。在此測(cè)量過程中，最大測(cè)量中的每個(gè) Z 方向往復(fù)運(yùn)動(dòng)值由實(shí)時(shí)采集使用控制單元的數(shù)據(jù)分析。同樣的程序執(zhí)行為 X 方向同時(shí)具有較低的振動(dòng)頻率。的往復(fù)循環(huán)，然后實(shí)現(xiàn)高通量的測(cè)量，因?yàn)閿?shù)據(jù)采集和數(shù)據(jù)分析在測(cè)量過程中的往復(fù)循環(huán)執(zhí)行。在下一節(jié)中，我們可以觀察到的振動(dòng)方法中起著重要的作用，改善測(cè)量靈敏度和重現(xiàn)性不執(zhí)行之間的 microchanncls 和我們 LIF 系統(tǒng)的檢測(cè)探頭的相對(duì)位置進(jìn)行微調(diào)。3 實(shí)驗(yàn)部分3.1。測(cè)量過程概要在測(cè)量過程中，我們應(yīng)用我們的大綱 LIF 系統(tǒng)的微流體測(cè)試裝置在 2.1 節(jié)中所述，從而評(píng)估了我們的系統(tǒng)性能。作為評(píng)價(jià)樣本，我們使用 Resorufin。它被廣泛使用，直接或間接地為與吸收和熒光發(fā)射最大值 563 nm 和 587 nm 的熒光蛋白質(zhì)標(biāo)記 DVE 分別。與 Resorufin 不同濃度樣品溶液制備稀釋用 0.1 M磷酸緩沖液，pH 7.4（1:1，V / V）混合，然后添加到系統(tǒng)的樣本庫。該試驗(yàn)裝置被放置在樣品架，這是放在高于 LIF 系統(tǒng)物鏡（圖 3 右）約 1.51 毫米。該設(shè)備被連接到由 PEEK 管注射泵和樣品溶液泵在 20 流量/ IL 分鐘“從 1 到每個(gè)通道的水庫，流速穩(wěn)定性為± 0.1％，然后在熒光信號(hào)綁定到流通渠道，測(cè)定樣品溶液的 LIF 使用振動(dòng)的方法在 2.3 節(jié)中描述的系統(tǒng)。在測(cè)量過程中，對(duì)流通渠道之間的連續(xù)梁的運(yùn)動(dòng)是由步進(jìn)電機(jī)進(jìn)行了 20 毫米的速度上線由控制單元，因此多渠道在測(cè)試設(shè)備的樣品進(jìn)行了測(cè)量命令的基礎(chǔ)上很快在我們的實(shí)驗(yàn)中，我們?cè)O(shè)定 V \ - 0.5 V，V2 = -0.5 V，/ J = 400 Hz 和/ 2 = 40 Hz 的考慮，測(cè)試設(shè)備是與 40 庵在 X 方向和 20 / . .在 Z 方向定位精度 IM 的檢測(cè)到的卷的最大數(shù)量，由物鏡的數(shù)值孔徑?jīng)Q定束腰的大小和通道距離計(jì)算約為 400 PL，這種小批量的檢測(cè)，是本系統(tǒng)的優(yōu)良特性之一。3.2 重復(fù)性的改善首先，我們?cè)u(píng)估在因之間的微芯片和光學(xué)檢測(cè)探頭的相對(duì)位置誤差熒光信號(hào)的測(cè)量值的變化。由于激光光斑尺寸很小，彼此之間的通道和物鏡的相對(duì)位置已經(jīng)對(duì)輸出信號(hào)的強(qiáng)度，因此對(duì)測(cè)量結(jié)果有相當(dāng)?shù)挠绊懥?。測(cè)量結(jié)果均用五種不同的芯片和一個(gè) 1.0 × 10“7 M Resorufin 的解決方案。為了比較的目的，勢(shì)必流道 1 Resorufin 熒光信號(hào)的解決方案都是為當(dāng)物鏡固定在測(cè)量的情況下初始位置和目標(biāo)時(shí)的鏡頭是在/ I = 400 Hz 和/ 2 = 40 赫茲（實(shí)驗(yàn) 1） 。頻率振動(dòng)情況，那么，綁定到所有五個(gè)渠道 Resorufin 解決方案的熒光信號(hào)進(jìn)行測(cè)量移動(dòng)沿 X 方向的芯片，以評(píng)估之間的通道（實(shí)驗(yàn) 2）的變化，在這些實(shí)驗(yàn)中，十進(jìn)行測(cè)量每個(gè)實(shí)驗(yàn)采取的芯片和每個(gè)芯片之間的通道束的運(yùn)動(dòng)了沿 X 方向是自動(dòng)控制在 5.0 毫米的步進(jìn)電機(jī)的間隔，應(yīng)該指出的是，每個(gè)芯片是由人的手在采樣安裝，結(jié)果如圖 6 所示（實(shí)驗(yàn) 1）8 網(wǎng)圖 7（實(shí)驗(yàn) 2）從圖 6（a）可以看出，在測(cè)量值的變化是大的物鏡時(shí)是固定的，即使是初步優(yōu)化，它有時(shí)會(huì)出現(xiàn)所觀察到的，通過把信號(hào)變得很弱微芯片和縮小，也就是說，重點(diǎn)不交 3。實(shí)驗(yàn)部分 3.1 測(cè)量過程我們采用的 LIF 系統(tǒng)的微流體測(cè)試裝置在 2.1 節(jié)中所述，從而評(píng)估了我們的系統(tǒng)性能大綱，作為一種評(píng)價(jià)樣本中，我們使用Resorufin，因而被廣泛使用，直接或間接地為與吸收和熒光發(fā)射最大值 563 nm 和 587 nm 的熒光蛋白質(zhì)標(biāo)記 DVE，分別與不同濃度的 Resorufin 樣品溶液是由串行準(zhǔn)備用 0.1 M 磷酸緩沖液，pH 值 7.4（1:1 ，V / V）混合，然后稀釋添加到樣品庫系統(tǒng)，測(cè)試設(shè)備是在樣品架，它被放在上面放置約 1.51 毫米物鏡的LIF 系統(tǒng)（圖 3 右） 。設(shè)備被連接到由 PEEK 管注射泵和樣品溶液泵在 20 流量/ IL 分鐘“，從水庫到每個(gè)通道 1。流速穩(wěn)定性為± 0.1％。然后，必將對(duì)流通渠道的樣品溶液的熒光信號(hào)進(jìn)行測(cè)量振動(dòng)的 LIF 使用方法在 2.3 節(jié)中描述的系統(tǒng)。在測(cè)量過程中，對(duì)流通渠道之間的連續(xù)梁的運(yùn)動(dòng)是由步進(jìn)電機(jī)進(jìn)行了有關(guān)命令，由控制單元的基礎(chǔ)上速度為 20 毫米 s 和因此多通道測(cè)量在測(cè)試設(shè)備的樣本表現(xiàn)非常迅速。在我們的實(shí)驗(yàn)中，我們?cè)O(shè)定 V \ - 0.5 V，V2 = -0.5 V，/ J = 400 Hz 和/ 2 = 40 Hz 的考慮，測(cè)試設(shè)備是與 40 庵在 X 方向和 20 /精密定位，IM 在 Z 方向。對(duì)檢測(cè)到的卷的最大數(shù)量，由物鏡束腰尺寸和數(shù)值孔徑的通道距離確定計(jì)算約為 400 PL。這種小批量的檢測(cè)，是本系統(tǒng)的優(yōu)良特性之一。3.3.測(cè)量結(jié)果接下來，我們顯示了我們的 LIF 檢測(cè)系統(tǒng)特性的測(cè)量結(jié)果。該測(cè)量均對(duì)不同濃度的 Resorufin 解決方案。該 LIF 系統(tǒng)響應(yīng) Resorufin 不同濃度見圖 8。我們可以觀察到的 Resorufin 響應(yīng)曲線覆蓋超過四個(gè)數(shù)量級(jí)，并在測(cè)量線性范圍 0.1 - 100 納米。而測(cè)量精度為 0.99 K2 超過了便攜式測(cè)量?jī)x器的標(biāo)準(zhǔn)值0.95。測(cè)量時(shí)間，不計(jì)時(shí)間收拾在 PDMS microehannel 樣品溶液，只需不到 10秒。檢測(cè)限約為 800 分在 3 信號(hào)的信噪比。絕對(duì)的樣品檢出量為約 320 zmol，從樣本估計(jì)雖然在 Resorufin 響應(yīng)曲線的測(cè)量，得到來自五個(gè)不同的渠道和五個(gè)不同的芯片，在這個(gè)范圍內(nèi) RSD 值表示的重復(fù)性非常好：1.4 不同渠道和芯片至芯片測(cè)量，在測(cè)量進(jìn)行十次（N - 10）2.1％的單芯片測(cè)量％。結(jié)果更令人印象深刻的考慮，每個(gè)芯片為 F abricated 單獨(dú)和每個(gè)芯片是手工安裝在實(shí)驗(yàn)裝置。因此，我們的系統(tǒng)可以分析具有高靈敏度和振動(dòng)不定位 microehannel 恰恰是一個(gè)光頭物鏡高重復(fù)性的樣品溶液。因此，我們開發(fā)了一個(gè)相對(duì)較小的高性能和廉價(jià)的分析系統(tǒng)。我們的系統(tǒng)可以方便地實(shí)現(xiàn)實(shí)際，特別是在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室等，其中的測(cè)試芯片必須是一次性使用的芯片，即免疫分析技術(shù)，該系統(tǒng)包括一個(gè)一次性芯片和光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)。在這些“分離式”系統(tǒng)，它是難以執(zhí)行高重復(fù)性由于在芯片之間和不同的測(cè)量檢測(cè)探頭位置誤差高度敏感的測(cè)量。這意味著我們的 LIF 系統(tǒng)非常適合的“分離式”系統(tǒng)，因?yàn)樗梢蕴峁┏杀荆瑫r(shí)間和空間，有效的測(cè)量和高性能由于簡(jiǎn)化測(cè)量過程與激光頭的使用。這也是必要的。考慮的 effect.of.，色分散在我們的光學(xué)系統(tǒng)。我們的光學(xué)拾音鏡頭是專為 650 nm/780 波長。因此，讀寫頭造成軸向激發(fā)和熒光的波長，這是（縮短焦距）重點(diǎn)轉(zhuǎn)移的結(jié)果色差。然而，這種轉(zhuǎn)變并不影響我們的掃描結(jié)果的方法和我們?cè)?jīng)是物鏡掃描范圍是為激發(fā)波長決定的。因此，色散不會(huì)導(dǎo)致在出LIF 系統(tǒng)性能嚴(yán)重退化和。我們能獲得高靈敏度和重復(fù)性的結(jié)果。我們現(xiàn)在考慮所取得的成果時(shí)，LED 作為光源的采用。在我們的研究中，我們使用的最大排放 myjdengtfa 為 525 納米，40 納米半帶寬，15 個(gè)方向性的角度和一個(gè) 3.10毫瓦的輸出功率 LED 綠色（NSPG500S; Niehia 公司，日本德島） 。后通過物鏡近光功率為 0.15 兆瓦，約為總功率的 4.8％。圖 9 顯示了在這種情況下，為Resorufin 校準(zhǔn)曲線。人們可以看到，檢測(cè)限為在 3 信號(hào)與噪聲的比例，這是約 20 分貝外，在圖 8 所示的情況下少約 11 海里。雖然靈敏度相對(duì)較低的情況相比，使用激光作為光源，它必須考慮到，這個(gè)替換提供了一個(gè)優(yōu)勢(shì)，該系統(tǒng)的規(guī)模變得非常緊湊，因此它的價(jià)格大幅降低。這可能是有益的，比較單位的激光功率的靈敏度和 LED.結(jié)論LIF 一種新型系統(tǒng)，用來作為測(cè)量探頭市售的激光頭的開發(fā)。該系統(tǒng)的性能進(jìn)行了評(píng)價(jià) LIF 通過使用 20 / IM 渠道深度 Resorufin 解決方案和測(cè)試芯片：芯片是由粘接 PDMS 和玻璃制造。據(jù)證實(shí)，通過使用一個(gè)光頭和一個(gè)簡(jiǎn)單的振動(dòng)的方法，測(cè)量系統(tǒng)的重復(fù)性，可以大幅度提高，而且足以彌補(bǔ)從安裝位置和運(yùn)動(dòng)而產(chǎn)生錯(cuò)誤的芯片。我們研究了不同濃度的微芯片使用相同的方法對(duì)Resorufin 振動(dòng)系統(tǒng)的響應(yīng)。所獲得的響應(yīng)曲線是在測(cè)量范圍 0.1-100 nM 的線性，檢測(cè)限被發(fā)現(xiàn)為 3 信號(hào)與噪聲的比例約為 800 分（320 zmol） 。這相當(dāng)于常規(guī)系統(tǒng)。在重復(fù)測(cè)量的 RSD 值（N - 10）表示的重復(fù)性為 1.4％的單芯片測(cè)量和 2.1 芯片到芯片的測(cè)量％。這些結(jié)果是非常令人印象深刻的考慮，每個(gè)芯片單獨(dú)制作，每個(gè)芯片是手工安裝在實(shí)驗(yàn)裝置。它表明，LIF 系統(tǒng)特別適合于在其靈敏度和重復(fù)性查看微流體器件測(cè)量的理想選擇。因此，該系統(tǒng)可以有效地用于微芯片化學(xué)，這就需要對(duì)極少量樣品的準(zhǔn)確檢測(cè)分析。我們的系統(tǒng)是有用的，不僅對(duì)研究和發(fā)展的目的，而且，如環(huán)境監(jiān)測(cè)，生命科學(xué)和醫(yī)療的實(shí)際應(yīng)用可取的，因?yàn)樗容^便宜，結(jié)構(gòu)緊湊，執(zhí)行快速測(cè)量。目前，我們正在開展一項(xiàng)關(guān)于一種利用熒光蛋白質(zhì)類型的診斷分析研究。我們應(yīng)用我們的系統(tǒng)的免疫化學(xué)檢測(cè)分析的定性測(cè)定。在我們的下一個(gè)文件，我們將報(bào)告對(duì)我們的 LIF系統(tǒng)應(yīng)用到這樣的例子詳細(xì)的分析。References[1] Kr?mer P M 1996 Biosensors for measuring pesticide residuesin the environment: past, present, and future AOAC Int. 79 1245-54[2] Morgan C L, Newman D J and Price C P 1996Immunosensors: technology and opportunities in laboratory medicine Clin. 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Sci. 91 5740-7一個(gè)高度敏感,高度可再生的激光熒光檢測(cè)系統(tǒng)1.介紹最近,生化分析的表現(xiàn)吸引了使用小的芯片人士的相當(dāng)關(guān)注,因?yàn)樗脑S多優(yōu)勢(shì)于傳統(tǒng)的系統(tǒng)。最吸引人的特征是它的微芯片體積小。它的使用保證分離反應(yīng)快速、高效和降低了相當(dāng)數(shù)量的樣品和試劑要求進(jìn)行分析。由于這個(gè)優(yōu)秀的特征,這種芯片也吸引了越來越多的環(huán)境監(jiān)測(cè)、生命科學(xué)和醫(yī)療保健等領(lǐng)域的重視水平,因?yàn)榇笈鷺悠酚糜诜治鲈谶@些領(lǐng)域里是非常小的。然而,這些微晶片非常小的尺寸,同時(shí)要求非常高的檢測(cè)靈敏度。在不同種類的檢測(cè)方案用于測(cè)量激光熒光微流控設(shè)備的方法被認(rèn)為是最敏感的方法之一。目前,有各種各樣的生活系統(tǒng)可用,包括一個(gè)單分子生活顯微鏡——敏感的液體。然而,很難快速發(fā)展,小和廉價(jià)的生活沒有減少系統(tǒng)的檢測(cè)靈敏度。為切實(shí)實(shí)施,特別是在分析技術(shù),如免疫檢測(cè)法在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室,測(cè)試芯片是需要一個(gè)一次性芯片?？梢杂袃煞N類型的生活系統(tǒng),由一個(gè)微芯片裝置和一個(gè)完整的熒光檢測(cè)系統(tǒng)。后者有技術(shù)上的優(yōu)勢(shì),比如系統(tǒng)簡(jiǎn)易一次性通過自動(dòng)化測(cè)試帶和實(shí)施,以保證減輕實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的分析。然而,在“separation-type 的系統(tǒng),很難保持之間的相對(duì)位置相同的檢測(cè)系統(tǒng)芯片和測(cè)量的結(jié)果與不同的芯片,這導(dǎo)致實(shí)際實(shí)驗(yàn)誤差。用常規(guī)的方法是高精度掃描。為了調(diào)整芯片和探測(cè)器之間的相對(duì)位置得體。這個(gè)要求導(dǎo)致必須使用很貴,又大又重的設(shè)備。這種情況也很難把這個(gè)系統(tǒng)在實(shí)際中應(yīng)用。因此有必要開發(fā)一個(gè)廉價(jià)、緊湊的系統(tǒng),有一個(gè)簡(jiǎn)單的機(jī)制和高靈敏度和高的重現(xiàn)性。為了實(shí)現(xiàn)這一目的,我們開發(fā)了一個(gè)相對(duì)廉價(jià)而緊湊的生活系統(tǒng),具有靈敏度高、重現(xiàn)性高。我們的系統(tǒng)利用商用貨車與一個(gè)高數(shù)字化光學(xué)鏡頭 1 -aperture 測(cè)量探針。此外,鏡頭致動(dòng)器的使用,這是振動(dòng)在水平和垂直兩個(gè)方向沿軸向推光致動(dòng)器在合適的頻率在兩個(gè)方向上使用了一個(gè)簡(jiǎn)單的方法。例如,如果我們運(yùn)用系統(tǒng)測(cè)量微流體裝置,光束的焦斑將在水平和垂直兩個(gè)方向,然后掃描整個(gè)二維截面通道的設(shè)備在高速度。作為結(jié)果,你可以看到,測(cè)量可以獲得高靈敏度和重現(xiàn)性高,沒有微調(diào)的樣品間的地位,微處理器和檢測(cè)的頭。所以,我們的微型分析系統(tǒng)具有較高的性能和成本和空間都是有效的。2．系統(tǒng)描述2.1 流試驗(yàn)裝置在這一節(jié)中,我們描述了微流控裝置,用來評(píng)估我們的系統(tǒng)的性能。大多數(shù)微流控設(shè)備的制造,在玻璃或硅。然而,許多當(dāng)前的研究是基于聚合物微流控裝置正把注意力集中在 vdimethyl silox。由于其成本低,易于處理。此外,幾項(xiàng)研究已經(jīng)報(bào)道了 PDMS-based 微流控裝置,是在光學(xué)透明 PDMS 波長范圍從 235跑到附近的范圍,因此紅外光學(xué)檢測(cè)在整個(gè)可見區(qū)域是可能的。這也是相當(dāng)?shù)偷腜DMS 比起其他聚合物。我們制造一個(gè)測(cè)試裝置,包括使用 PDMS 微通道。圖 1 顯示一個(gè)方案設(shè)計(jì)的測(cè)試裝置。芯片由地面板和蓋板(30×60×2.0 毫米,)和五種要素的流動(dòng)通道十訪問端口相連在一起的渠道彈性矽管(1.6 毫米外徑:內(nèi)徑:300 / xm),它是用來介紹/去除樣品測(cè)量、緩沖區(qū)和廢物。這兩個(gè)基質(zhì)是由熱相互聯(lián)接空氣等離子體。首先,主人為微流控裝置的開發(fā)利用標(biāo)準(zhǔn)光刻和濕化學(xué)腐蝕方法:(1)渠道設(shè)計(jì)是由用土坯插畫家 10.0.3 然后打印出來到一個(gè)透明膜用作面膜。一層薄薄的積極 P-RZ300 光刻膠是自旋涂的表面一個(gè)空白的面具板暴露在一個(gè)具有長度燈光大約 2 分鐘通過透明玻璃幻燈片相一致。(2)為了獲得一個(gè)20 / xm 厚結(jié)構(gòu)微通道,光刻膠被允許在一個(gè)開發(fā)者開發(fā)解決方案(PMER P-1S 東京 Ohka Kogyo);另一個(gè) 2 分鐘。模板與渠道設(shè)計(jì)作了進(jìn)一步的 85 C / f 的烤箱烘焙 15 分鐘在熱板加強(qiáng)的粘著力和當(dāng)時(shí)的逐漸冷卻到室溫 1 - 2 小時(shí)。在這個(gè)過程中,所有的光阻除了抵抗被定義在該地區(qū)的渠道。(3)以確保順利脫模,玻璃滑被放進(jìn)一個(gè)(w / v(IV)鈰磷酸氫二銨溶液去除鉻層暴露。在 HNO 沖洗后 2 米大師:?的高度與渠道獲得了大約 20 個(gè) ftm 蝕刻玻璃的1 米/我 NH4F 25 分鐘高頻解 25 度。(3)(Sylgard PDMS 溶液的制備以及東麗道康寧?:有限公司、日本東京,倒到主人)與一個(gè)框架舉辦的解決方案。(5)這是治愈入預(yù)熱 65 C / f 烤箱中 1 小時(shí),其次是第二次治療 1 足總?cè)腩A(yù)熱 100 C / f。(6)PDMS 固化芯片剝:阿玻璃主人、檢修口直徑 1.6 磁共振沖壓進(jìn)薄片使用金屬管道。(7)芯片的 PDMS 不可逆轉(zhuǎn)的粘結(jié)在 1.2 毫米厚的玻璃盤子,它把兩個(gè)表面與氧氣等離子體才把他們帶進(jìn)接觸[9]。硅管然后被插入2.2 光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)現(xiàn)在我們解釋光學(xué)檢測(cè)部分進(jìn)行了詳細(xì)的介紹。我們的生活中用的描述系統(tǒng)如圖 3。對(duì)熒光激發(fā)光源是一個(gè) CW 型銣雅鉻激光與第二口吃者自助組織的波長、箱梁直徑 1.2 毫米,一個(gè)輸出功率的 9.75 mW 及保證 1%的電力穩(wěn)定。peak-to-peak 帶寬的噪音從德 50 兆赫不超過 0.1%。通過激勵(lì)梁 25%的中性密度(第二濾波(輸出功率為 2.43 mW)和機(jī)械由微型電磁活塞與切碎 5 毫米中風(fēng)(PI,開公司,東京,日本),必要的,可以避免熒光物弧的樣品。最大的斬波頻率的活塞是 60 赫茲。光束通過分光鏡和波長盤。然后從兩色鏡子反射之前被傳送到目標(biāo)透鏡光學(xué)貨車與一個(gè)數(shù)值孔徑為 0.45(外向鈉)和焦距/ 3.17 毫米。梁是那么集中到一個(gè)小的區(qū)域并投射樣品。梁權(quán)力的價(jià)值目標(biāo),通過“房顫的鏡頭是 1.87 mW 及現(xiàn)場(chǎng).mi 大小是 0.97。一個(gè)樣品持有人,它作為一種定位試驗(yàn)裝置的向?qū)?是擺在上面在目標(biāo)透鏡的光學(xué)檢測(cè)部分。步進(jìn)電機(jī)安裝在一邊的持有者和測(cè)試裝置,設(shè)置在持有者,定位和精密 40 項(xiàng).im 在水平(X)的方向和 20 項(xiàng)在腸垂直(Z)方向英吉利海峽。對(duì)于多通道的測(cè)量,梁的運(yùn)動(dòng)之間的通道測(cè)試設(shè)備和客觀 drive-free 鏡頭的位置是大約 1.51 毫米。被吸收的光聚焦和發(fā)射熒光光再次在長波長(樣品= ^ 2)根據(jù)斯托克斯轉(zhuǎn)變。這是一輛熒光收集目標(biāo)透鏡和一個(gè)鈉為 0.60(遷入)。光錐可以收集這個(gè)目標(biāo)透鏡是 10.0%的總固體角度下,4 tt 假設(shè)發(fā)射光子輻射的四面八方。兩色的鏡子反射光波長為 550以下和傳輸光的波長,上面這只傳送熒光光譜。定位引導(dǎo)圖 3。我們的生活中用的描述系統(tǒng)與光學(xué)皮卡(左)。生活的外部視圖系統(tǒng)和一個(gè)測(cè)試裝置設(shè)置在樣品持有人(右)。其次,光是過濾后再舉一個(gè)過濾器,即發(fā)射帶通濾波器,玻璃只發(fā)射波長的熒光和檢測(cè)的光電倍增管(PMT 使用 R6355;Hamamat.su 光子 K.K.、日本),家庭。在輸出路徑,自制 conic-type 光學(xué)擋板的孔徑與一個(gè) 2 毫米×4 毫米為了減少裝配的反射和散射導(dǎo)致檢測(cè)的流浪光在并聯(lián)機(jī)床。當(dāng)前所產(chǎn)生的光敏表面然后并聯(lián)放大大約 106 次乘數(shù)管內(nèi)部一個(gè)電壓 700 V,然后輸入放大器電路。該電流轉(zhuǎn)換成電壓信號(hào),又要放大大約有10 次放大電路。因此,價(jià)值的電壓信號(hào)量成正比的熒光發(fā)射抽樣綁定到流-通道。最大的輸出電壓信號(hào)范圍局限于 1.25 V 的在放大器終止登記,然后一個(gè)廣告轉(zhuǎn)換器采樣與 16 位分辨率在采樣率為 1.25 赫茲。然后通過信號(hào)是一個(gè)低通濾波器在采樣時(shí)間窗口,開出約 250 ms 在每個(gè)測(cè)量的基礎(chǔ)上請(qǐng)跟隨焊槍同步控制斬波頻率硒。然后分析了輸出數(shù)據(jù)是由一個(gè)數(shù)據(jù)處理單元。另一方面,光線的反射邊界是聚集在皮卡車鏡和反射的鏡子是兩色分光鏡和部分。光束通過柱透鏡和兩個(gè)焦點(diǎn) points-one 前面和后面許多探測(cè)器探測(cè)到four-quadrant 則是一個(gè)二極管。檢測(cè)信號(hào)用于設(shè)置掃描范圍的目標(biāo)透鏡致動(dòng)器的基礎(chǔ)上,結(jié)合邊界的通道。我們的生活的關(guān)鍵特征系統(tǒng)是光學(xué)傳感器時(shí),即客觀的鏡頭被安裝在音圈電機(jī)(VCM)。這是用來反復(fù)氯乙烯驅(qū)動(dòng)物鏡處沿垂直方向和水平方向的渠道在掃描過程中,在這個(gè)系統(tǒng)中,我們采用了 dual-axis 目標(biāo)透鏡(Funai 電子公司執(zhí)行。有限公司。日本的大阪),如圖 4.所示,其中有一個(gè)數(shù)值孔徑(南)0.45/0.60 / 3.17 的焦距 mm.震源深度 h 的一項(xiàng) 0.74±xm 和焦斑直徑 0.97 / cp,因?yàn)樯鲜鏊位輪碳す馀c X \ 532 海里。自從鈉是可以選擇的根據(jù)光束半徑,我們使用了鈉對(duì)梁投影值為 0.45 到樣品和鈉值為 0.60 的熒光團(tuán)有效。對(duì)冷凝利用控制信號(hào)和電壓幅值 1 V、執(zhí)行機(jī)構(gòu)可以振動(dòng)頻率的 640 赫茲以掃描范圍的±10 / xm 的重點(diǎn)發(fā)展方向和在 140 赫茲的頻率以掃描范圍的±150 / xm 在軌道方向。作為目標(biāo)透鏡可以在高頻振動(dòng),我們的系統(tǒng)具有如下優(yōu)點(diǎn)在常規(guī)的生活體系。(1)高通量測(cè)量可以達(dá)到很高的速度掃描?在目標(biāo)透鏡的焦點(diǎn)和跟蹤的方向。(2)一個(gè)小樣本的分布可以用高靈敏度高,因?yàn)槟繕?biāo)透鏡鈉和一小束斑大小。也有可能,有效地提高了測(cè)量重現(xiàn)樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行平均。(3)一個(gè)適當(dāng)?shù)某绦蚩梢詮浹a(bǔ)振動(dòng)差異之間的縫隙對(duì)不同芯片和探測(cè)器測(cè)量并能減少努力參與微調(diào)為每個(gè)測(cè)量。上述特征暗示我們的系統(tǒng)可適用于檢測(cè),特別是在小卷過程,如微流控芯片毛細(xì)管電泳與交流——在 microreaetors 基礎(chǔ)。應(yīng)該指出的是,我們已經(jīng)適應(yīng)的 epi -類型的照明系統(tǒng),在并聯(lián)機(jī)床位于側(cè)面的入射光垂直放置之上,以避免退化的設(shè)備檢測(cè)信號(hào)完整性因串?dāng)_而導(dǎo)致鄰近頻道之間,在測(cè)量在多通道的設(shè)備。我們估計(jì)端到端的效率的熒光檢測(cè)由考慮光路的損失:收藏?zé)晒?10%)x 光透鏡皮卡率(88%)x 兩色鏡子(95%)x 發(fā)射濾波(90%)= 7.5%。這個(gè)結(jié)果相比一個(gè)商業(yè)生活系統(tǒng)或生活顯微鏡的 iHumiliation epi -類型的,通常用鈉為 0.2 - -0.5(= 2.5 - -6.0%)。在這個(gè)系統(tǒng)中,我們也可以采取一種發(fā)光二極管(LED)作為光源透鏡準(zhǔn)直器和激勵(lì)設(shè)置過濾器在兩色的光通過鏡子。使用一個(gè) LED 的優(yōu)點(diǎn)是系統(tǒng)的大小及其價(jià)格變得非常緊湊減少較多。然而,的敏感性也可能降低系統(tǒng)相比,這樣的情形,一個(gè)激光作為光源。2.3 方法論證我們現(xiàn)在說明操作的執(zhí)行機(jī)構(gòu)和目標(biāo)透鏡實(shí)驗(yàn)中所用的測(cè)量方法。開環(huán)的動(dòng)態(tài)響應(yīng)特性的目標(biāo)透鏡光學(xué)拾驅(qū)動(dòng)器:(一)傳輸特性的重點(diǎn)發(fā)展方向的傳輸特性和(b)為軌道方向。作為準(zhǔn)備,首先討論了執(zhí)行測(cè)量對(duì)象的掃描范圍應(yīng)將鏡頭檢測(cè)驅(qū)動(dòng)器之間的界線要解決渠道和玻璃鋼板或 PDMS 蓋板。重點(diǎn)發(fā)展方向的邊界之間的空白溶液和玻璃地面板或空白溶液和 PDMS 蓋板可由 S-curve astigmatieally 檢測(cè)誤差信號(hào)的關(guān)注。軌道方向的邊界之間的空白溶液和 PDMS 蓋板可以確定監(jiān)測(cè)信號(hào)的強(qiáng)度沿邊界反射的玻璃地面板和 PDMS 蓋板。因此,由執(zhí)行該操作,你可以把掃描范圍的焦點(diǎn)和氯乙烯兩軌跡的方向。雖然這 prescanning 邊界檢測(cè)的第一步是行之有效的情形的深度和廣度,微通道是未知的,它都不一定需要實(shí)驗(yàn),因?yàn)槲覀兊纳疃群蛷V度,是眾所周知的,和粗糙的模擬精度調(diào)整(40 項(xiàng)腸和 20 /我在 X 和 Zdirections,早、晚稻的精度±20 /腸)已經(jīng)在兩個(gè)方向上進(jìn)行人用樣本的步進(jìn)電機(jī)。因此,氯乙烯的范圍可以設(shè)定在推進(jìn)運(yùn)動(dòng),能夠覆蓋整個(gè)二維區(qū)域的 mierochannels 具有足夠的利潤。我們采用了以下方法為振動(dòng)。該方法尤其適合用于 microchip-based 測(cè)量。在本研究中,我們使用高精度、同步信號(hào),由正三角形橫掃 V \負(fù)面 V2 與適當(dāng)?shù)念l率,在集中(Z)和跟蹤(X)的方向。信號(hào)頻率的基礎(chǔ)上,確定結(jié)構(gòu)的振動(dòng)頻率的情況下,為 Z 方向是高于 X 方向)。在我們的系統(tǒng)中,由一個(gè)輸入信號(hào)產(chǎn)生一個(gè) 16 位分辨率與達(dá)變頻器在采樣率 4 兆赫,依照的輸出數(shù)據(jù)控制單元。因此,移動(dòng)目標(biāo)透鏡氯乙烯沿 X 軸方向多次掃描,而振動(dòng)沿 Zdirection 同步。作為一個(gè)結(jié)果,束斑掃描整個(gè) 2 -維的部分通過移動(dòng) mierochannels 梁的焦點(diǎn)在高速度。在這個(gè)測(cè)量過程中,最大的測(cè)量值為每個(gè)往復(fù)運(yùn)動(dòng)在 Z 方向是由實(shí)時(shí)采集數(shù)據(jù)的分析使用控制單元。同樣的程序被執(zhí)行的 X 方向同時(shí)用較低的振動(dòng)頻率。然后執(zhí)行的互惠周期是反復(fù)的平均周期為最高值都在每條通道被視為最終衡量?jī)r(jià)值的熒光信號(hào)的渠道。值得注意的在這里,可以實(shí)現(xiàn)高通量測(cè)量數(shù)據(jù)采集和分析因?yàn)閿?shù)據(jù)進(jìn)行互惠的循環(huán)中測(cè)量。在下一節(jié)里,研究表明,該振動(dòng)方法提高上扮演相當(dāng)重要的角色測(cè)量靈敏度高、重現(xiàn)性好,沒有進(jìn)行微調(diào) microchanncls 之間的相對(duì)位置,對(duì)檢測(cè)探頭在我們的生活體系。3．實(shí)驗(yàn)部分3.1 輪廓測(cè)量過程的我們運(yùn)用我們的生活流試驗(yàn)裝置系統(tǒng)在第 2.1 節(jié)介紹的性能進(jìn)行了評(píng)價(jià),從而我們的體系。作為一種評(píng)價(jià)樣本,我們使用它被廣泛應(yīng)用 Resorufin.,直接或間接地作為熒光標(biāo)記 dve 為蛋白質(zhì)的吸收和熒光光譜極大值 563 海里,587 海里,分別。以不同濃度的樣品的解決方案 Resorufin 高聚碘的制備方法為 0.1 M 系列稀釋磷酸鹽緩沖,pH 值 7.4(1:1,v / v)混合,然后加入樣品系統(tǒng)。水庫測(cè)試裝置是放置在試樣夾,大約 1.51 毫米以上被放置在目標(biāo)透鏡的生活系統(tǒng)(圖 3,右)。設(shè)備被連接到微泵靜脈推注法的樣品聚醚醚酮管和解決方案,在流量泵 20 / iL 旻”從水庫 1 到每一個(gè)頻道。流量穩(wěn)定性±0.1%。然后,熒光信號(hào)的樣品的解決方案會(huì)流動(dòng)通道主要通過測(cè)量系統(tǒng)使用振動(dòng)方法求醫(yī),在第 2.3節(jié)介紹。在測(cè)量、運(yùn)動(dòng)梁之間的信道,連續(xù)流由步進(jìn)電機(jī)的速度 20 毫米年代的基礎(chǔ)上,通過控制單元的命令,因此在多通道的觀測(cè)樣本進(jìn)行了試驗(yàn)裝置非常迅速。在我們的試驗(yàn)中,我們將 V \ - 0.5 V,V2 = -0.5 V / m = 400 赫茲和/ 2 = 40 赫茲被考慮到試驗(yàn)裝置和精密定位的 40 微米在 X 方向和 20 / .im 在 Z 方向移動(dòng)。檢測(cè)到的最大體積的體積,由數(shù)值孔徑的物鏡處腰圍和梁的距離計(jì)算出頻道約有400 的質(zhì)量。這是一個(gè)小的量檢測(cè)的優(yōu)越特性本系統(tǒng)。3.2 再現(xiàn)性改進(jìn)首先,我們?cè)u(píng)估了變化的熒光信號(hào)的測(cè)量數(shù)據(jù)由于錯(cuò)誤的微通道之間的相對(duì)位置和光學(xué)檢測(cè)芯片探針。從現(xiàn)場(chǎng)尺寸的激光很小,相對(duì)位置在每個(gè)通道和目標(biāo)透鏡有影響的力量,從而輸出信號(hào)的測(cè)量結(jié)果。進(jìn)行了測(cè)量和五種不同的芯片和 1.0×10“7 米 Resorufin 的解決方案。為了比較,Resorufin 溶液的熒光信號(hào)的約束來測(cè)量這兩個(gè)流道第一的目標(biāo)透鏡情況就固定在初始位置和情況是在目標(biāo)透鏡的振動(dòng)頻率/ i = 400 赫茲和/ 2 = 40 赫茲(實(shí)驗(yàn) 1)。然后,Resorufin 溶液的熒光信號(hào)的所有五頻道會(huì)用移動(dòng)芯片沿 X 軸方向?yàn)榱嗽u(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)渠道之間的變化(2)。在這些實(shí)驗(yàn)中,十個(gè)測(cè)量每個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了以芯片和芯片和運(yùn)動(dòng)每束渠道之間的沿X 軸方向是自動(dòng)控制每隔 5.0 毫米的步進(jìn)電機(jī)。應(yīng)該指出的是,每一片安裝按手在采樣持有人。因此,很明顯,利用光學(xué)貨車與振動(dòng)方法,我們可以彌補(bǔ)錯(cuò)誤而產(chǎn)生的安裝和運(yùn)動(dòng)的薯片,能有效地提高測(cè)量系統(tǒng)的結(jié)果的重現(xiàn)性相對(duì)位置沒有微調(diào)。這就提供了一個(gè)相當(dāng)?shù)膬?yōu)勢(shì)在實(shí)際使用,因?yàn)樗恍枰l(fā)展復(fù)雜和昂貴的儀器對(duì)高精度定位。3.3。測(cè)量結(jié)果接下來,我們顯示測(cè)量的結(jié)果檢測(cè)特點(diǎn)的生活體系。測(cè)量不同濃度進(jìn)行了Resorufin 的解決方案。生活的反應(yīng)系統(tǒng),不同濃度的 Resorufin 如圖 8。我們可以看到,為Resorufin 響應(yīng)曲線面積超過四個(gè)數(shù)量級(jí),線性的測(cè)量范圍為 100 ~ 0.1 奈米。K2 的測(cè)量精度為 0.99 超過 0.95 標(biāo)準(zhǔn)的價(jià)值的便攜式測(cè)量?jī)x器。測(cè)量時(shí)間,不包括時(shí)間包裝樣品溶液的 PDMS microehannel,需時(shí)不到十元的鈔票。檢測(cè)極限是大約 800 點(diǎn)在信噪比 3 種。絕對(duì)數(shù)量的樣品檢出率,估計(jì)大約有 320 zmol 抽樣注入體積大約 400 的質(zhì)量。背景信號(hào),即缺乏空白的程度上,是認(rèn)定為22.23。檢測(cè)極限 800 點(diǎn)是與以前報(bào)道的結(jié)果,為大型 high-NA 熒光顯微鏡系統(tǒng)目標(biāo)透鏡和激光熒光。因此,我們的系統(tǒng)能夠分析示例解決方案,具有靈敏度高、重現(xiàn)性高的振動(dòng)目標(biāo)透鏡光學(xué)拾定位準(zhǔn)確。microehannel 沒有因此,我們已經(jīng)發(fā)展了一種相對(duì)較小的廉價(jià)的分析系統(tǒng)具有優(yōu)良的性能。我們的系統(tǒng)可以容易實(shí)現(xiàn)的實(shí)踐,特別是分析技術(shù)在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室免疫測(cè)定法等測(cè)試片,須芯片的單次,即系統(tǒng)包括一個(gè)一次性的微芯片以及光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)。在這些很難執(zhí)行高度敏感的測(cè)量由于具有較高的重現(xiàn)性誤差間的地位和探測(cè)器芯片的不同測(cè)量。這意味著我們的生活體制符合“分離式的系統(tǒng),因?yàn)樗芴峁┏杀?、時(shí)間和空間——高效測(cè)量和高性能因使用一個(gè)簡(jiǎn)化的測(cè)量方法與光學(xué)的獵物。把色散考慮在我們的光學(xué)系統(tǒng)中也是有必要的。我們的光學(xué)透鏡皮卡是專為 650 海里/ 780 海里波長的光。因此,小貨車頭軸彩色畸變引起的興奮和熒光波長,結(jié)果轉(zhuǎn)移重點(diǎn)(簡(jiǎn)稱焦距)。然而,這種轉(zhuǎn)變并不影響我們的掃描的方法和結(jié)果一旦掃描范圍確定目標(biāo)透鏡激發(fā)波長。因此,色散不引起嚴(yán)重的退化的生活體系和績(jī)效結(jié)果。我們可以獲得高靈敏度和重現(xiàn)性。我們現(xiàn)在考慮的結(jié)果被采納為當(dāng)一個(gè) LED 光源。在我們的研究中,我們使用一個(gè)綠色 LED 最大排放的myjdengtfa 525 納米,半帶寬的 40 海里,一個(gè)指向性的角度和輸出功率的 15 Niehia 3.10 mW(NSPG500S;公司,Tokushima。日本)。光束功率經(jīng)過目標(biāo)透鏡是0.15 mW,大約 4.8%的總功率。雖然靈敏度較低比情況下使用激光作為光源,它必須考慮更換提供了一個(gè)優(yōu)勢(shì),這在該尺寸的系統(tǒng)變得非常緊湊的,因此其價(jià)格降低大幅度降低。它可能是有意義的比較敏感的單位功率激光和 LED。檢測(cè)極限時(shí)使用了 800 點(diǎn)激光在信噪比 3 種。因此,檢測(cè)靈敏度的 LED 系統(tǒng)幾乎是與生活。它們的區(qū)別在于光功率的有效性集中在通道。有效功率 LED 的通道僅為 4.8%,而總功率的激光輸出功率 77.0%(計(jì)算 2.43 mW 濾波,用一個(gè)日后過濾)。如果一個(gè)領(lǐng)導(dǎo)提供了較大的輸出功率和更有效的完成了橫向光的靈敏度 LED 系統(tǒng)可以進(jìn)一步改進(jìn)。4。結(jié)論生活系統(tǒng),使用一種商用光學(xué)測(cè)量探頭控制方法。這個(gè)系統(tǒng)的性能并利用求醫(yī),一個(gè) Resorufin 溶液和芯片測(cè)試與一個(gè)通道,深度:20 /我是虛構(gòu)的 PDMS 芯片由粘接和玻璃。實(shí)例證明,利用光學(xué)貨車和一個(gè)簡(jiǎn)單的方法、結(jié)果的重現(xiàn)性與振動(dòng)測(cè)量系統(tǒng)的劇烈,可以提高這足以補(bǔ)償位置誤差引起的安裝和運(yùn)動(dòng)的籌碼。研究了不同濃度的系統(tǒng)響應(yīng) Resorufin 在通道芯片使用相同的振動(dòng)的方法。所得到的響應(yīng)曲線的線性測(cè)量范圍 0.1 -100 海里和檢出限被發(fā)現(xiàn)大約 800 點(diǎn)(320 zmol)為 3.,信噪比與傳統(tǒng)的系統(tǒng)。結(jié)果的重現(xiàn)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值表示為重復(fù)測(cè)量(n - 10)是 1.4%,2.1%,chip-to-chip 單片機(jī)測(cè)量尺寸。這些結(jié)果是非常令人印象深刻的考慮,每個(gè)芯片是虛構(gòu)的,每個(gè)單獨(dú)芯片安裝按手在實(shí)驗(yàn)的建立。這表明生活系統(tǒng)也特別適合微流控裝置測(cè)量針對(duì)其靈敏度和重現(xiàn)性。因此,該系統(tǒng)可有效地用于分析化學(xué)在芯片的檢測(cè),這就需要非常少量的樣品準(zhǔn)確。我們的系統(tǒng)是有用的,也是理想的不僅為研究和發(fā)展的宗旨也為實(shí)際使用如環(huán)境監(jiān)測(cè)、生命科學(xué)和醫(yī)療保健的水平,因?yàn)樗窍鄬?duì)低廉,結(jié)構(gòu)緊湊,能夠執(zhí)行快速測(cè)量。我們正在從事一項(xiàng)研究分析一種蛋白應(yīng)用熒光診斷。我們已申請(qǐng)了我們對(duì)系統(tǒng)的定性的分析檢測(cè)。免疫在我們的下一篇論文中,我們將報(bào)告在詳細(xì)分析應(yīng)用我們的生活系統(tǒng),這樣的例子。