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1、
課題1 DNA的粗提取與鑒定
基礎鞏固
1下列各項中不宜選作DNA提取材料的是( )
A.洋蔥表皮細胞 B.鮮豌豆種子
C.人的成熟紅細胞 D.雞血細胞液
解析:作為DNA提取材料的首要條件是DNA含量豐富,而哺乳動物成熟的紅細胞無細胞核,所以不宜選作實驗材料。
答案:C
2若選擇的實驗材料為植物細胞,破碎細胞時要加入一定量的洗滌劑和食鹽。加入洗滌劑的目的是( )
A.利于DNA的溶解 B.瓦解細胞膜
C.分離DNA和蛋白質 D.溶解蛋白質
解析:洗滌劑是一種離子去污劑,能瓦解細胞膜,有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl,有利于DNA
2、的溶解。
答案:B
3DNA粗提取的實驗中在破碎血細胞時,要加入 20 mL 的蒸餾水,其作用是( )
A.溶解DNA
B.使血細胞破裂,DNA釋放
C.稀釋血液,防止凝固
D.有利于攪拌
解析:一般用低滲溶液,如蒸餾水,使細胞過度吸水而破裂,從而使細胞中的DNA釋放出來。
答案:B
4在除去雜質時將濾液放在60~75 ℃的恒溫水浴箱中保溫10~15 min,這樣做的目的是( )
A.使DNA變性
B.使蛋白質變性
C.使DNA和蛋白質變性
D.分解蛋白質
解析:大多數(shù)蛋白質不能忍受60~80 ℃的高溫,而DNA在80 ℃以上才變性。在60~75 ℃的恒溫水浴
3、箱中保溫10~15 min,目的是使蛋白質變性,然后分離得到DNA。
答案:B
5某同學用洋蔥進行DNA粗提取和鑒定實驗,操作錯誤的是( )
A.加入洗滌劑后,進行充分的研磨
B.用蛋白酶純化過濾后的研磨液中的DNA
C.加入酒精后用玻璃棒輕緩攪拌
D.加二苯胺試劑搖勻后沸水浴加熱
解析:提取洋蔥的DNA時,加入一定量的洗滌劑和食鹽,進行充分的攪拌和研磨,A項錯誤;蛋白酶能夠分解研磨液中的蛋白質以純化DNA,B項正確;加入酒精后用玻璃棒輕緩攪拌以防止因DNA斷裂而不能形成絮狀沉淀,C項正確;加入二苯胺試劑搖勻后沸水浴加熱 5 min,以觀察顏色是否變藍,D項正確。
答案:A
4、
6在提取DNA的過程中,最好使用塑料試管和燒杯,目的是( )
A.不易破碎 B.減少DNA的損失
C.增加DNA的含量 D.容易刷洗
解析:DNA易吸附在玻璃管上,造成DNA量的損失。
答案:B
7在DNA的粗提取過程中,初步析出DNA和提取較純凈的DNA所用的藥品的濃度及其名稱分別是( )
①物質的量濃度為0.1 g/mL的檸檬酸鈉溶液?、谖镔|的量濃度為2 mol/L的NaCl溶液?、畚镔|的量濃度為0.14 mol/L的NaCl溶液?、荏w積分數(shù)為95%的酒精溶液?、菸镔|的量濃度為0.015 mol/L的NaCl溶液
A.①③⑤ B.③④
C.②④ D.②③④
解析:
5、初步析出DNA和提取純凈的DNA所用的藥品的濃度及其名稱分別是物質的量濃度為0.14 mol/L 的NaCl溶液和體積分數(shù)為95%的酒精溶液。
答案:B
8“DNA的粗提取與鑒定”實驗中,A、B、C、D、E五個小組除下表中所列處理方法不同外,其他操作步驟均相同且正確,但實驗結果卻不同。
組別
實驗
材料
提取核物質時加入的溶液
去除雜質時加入的溶液
DNA鑒
定時加
入的試劑
A
雞血
蒸餾水
體積分數(shù)為95%的酒精(25 ℃)
二苯胺
B
菜花
蒸餾水
體積分數(shù)為95%的酒精(冷卻)
雙縮脲
C
人血漿
蒸餾水
體積分數(shù)為95%的酒精(冷卻)
6、
二苯胺
D
人血
細胞
2 mol/L的
氯化鈉
0.14 mol/L的氯化鈉
雙縮脲
E
雞血
蒸餾水
體積分數(shù)為95%的酒精溶液(冷卻)
二苯胺
(1)實驗材料選擇錯誤的組別是 ,其原因是 ?
?
。?
(2)實驗步驟(不包括實驗材料)均正確,但得不到DNA的組別是 。?
(3)沸水浴中試管顏色變藍的組別是 ;藍色較淡的是 ,其原因是 ?
?
。?
(4)B組實驗不成功的最主要原因是?
。?
解析:(1)人的血漿中沒有細胞結構,人成熟的紅細胞沒有細胞核,在這些材料中不能得到DNA或得到的DNA很少。
7、
(2)血細胞中有少量的白細胞,其中有DNA,所以只有C組人血漿中沒有DNA。
(3)冷卻的酒精溶液對DNA有較好的凝集效果,而A組中為25 ℃的酒精溶液。
(4)菜花細胞外有細胞壁起保護作用,在蒸餾水中不會破裂,所以不能得到DNA。
答案:(1)C、D 人的血漿中沒有細胞結構,人成熟的紅細胞中沒有細胞核,選用這些材料得不到DNA或得到的DNA很少 (2)C (3)A、E A 冷卻的酒精溶液對DNA的凝集效果較佳,該組使用的是25 ℃的酒精溶液 (4)菜花細胞在蒸餾水中不能被破壞,得不到DNA(應采用研磨的方法)
能力提升
1在利用雞血進行“DNA的粗提取與鑒定”的實驗中,下列相關
8、敘述正確的是( )
A.用蒸餾水將NaCl溶液的物質的量濃度調至0.14 mol/L,濾去析出物
B.調節(jié)NaCl溶液濃度或加入木瓜蛋白酶,都可以去除部分雜質
C.將絲狀物溶解在物質的量濃度為2 mol/L的NaCl溶液中,加入二苯胺試劑即呈藍色
D.用菜花替代雞血作為實驗材料,其實驗操作步驟相同
解析:當NaCl溶液的物質的量濃度為0.14 mol/L時,DNA溶解度最小,析出物中含有大量的DNA。將絲狀DNA溶解在物質的量濃度為2 mol/L 的NaCl溶液中,加入二苯胺試劑沸水浴加熱后呈藍色。用菜花替代雞血作實驗材料,實驗操作步驟不完全相同,處理菜花時,先加入洗滌劑和食鹽,進
9、行充分的攪拌和研磨。
答案:B
2玻璃棒攪拌出的較純凈的DNA的顏色以及DNA遇二苯胺(沸水浴)顯現(xiàn)的顏色分別是( )
A.黃色、紫色 B.白色、磚紅色
C.白色、藍色 D.藍色、磚紅色
解析:DNA在體積分數(shù)為95%的冷酒精中析出時的顏色為白色,DNA遇二苯胺(沸水浴)顯現(xiàn)的顏色為藍色。
答案:C
3下列有關“DNA的粗提取與鑒定”實驗的敘述,正確的是( )
A.利用DNA能溶于酒精溶液,而蛋白質不溶于酒精溶液,可將DNA與蛋白質分離
B.利用高溫能使DNA變性,卻對蛋白質沒有任何影響的特性,可將DNA與蛋白質分離
C.利用DNA在物質的量濃度為0.14 mol/L的
10、NaCl溶液中溶解度最大的特點,可將DNA與蛋白質分離
D.在DNA濾液中加入嫩肉粉,通過木瓜蛋白酶的作用,可將DNA與蛋白質分離
解析:DNA不溶于酒精,而蛋白質等雜質溶于酒精,A項不正確。蛋白質比DNA對溫度的耐受性更差,因此更容易變性,B項不正確。DNA在物質的量濃度為0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最小,而蛋白質在該濃度的NaCl溶液中溶解度較大,因此可將DNA與蛋白質分離,C項不正確。嫩肉粉中的木瓜蛋白酶只能催化蛋白質水解,而對DNA沒有影響,因此,可將DNA與蛋白質分離,D項正確。
答案:D
4在DNA的粗提取實驗過程中,有兩次DNA沉淀析出,其依據的原理是(
11、)
①DNA在物質的量濃度為0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低?、贒NA在冷卻的體積分數(shù)為95%的酒精中能沉淀析出
A.兩次都是①
B.兩次都是②
C.第一次是①,第二次是②
D.第一次是②,第二次是①
解析:第一次沉淀析出是用濃NaCl溶液溶解核內DNA之后,加蒸餾水稀釋NaCl溶液的物質的量濃度至0.14 mol/L,使DNA溶解度最低而析出;第二次沉淀析出是用冷酒精溶液使DNA凝集并溶解非DNA物質,達到提純DNA的目的。
答案:C
5從植物中提取DNA,發(fā)現(xiàn)實驗效果不好,如果看不到絲狀物沉淀、用二苯胺鑒定時不顯示顏色等,其可能原因是( )
①植物細胞
12、中DNA含量低?、谘心ゲ怀浞帧、圻^濾不充分?、荏w積分數(shù)為95%的冷酒精溶液的量過大
A.①② B.③④
C.①④ D.②③
解析:若實驗中看不到絲狀物沉淀、用二苯胺鑒定時不顯示顏色等,說明DNA提取量少。不同植物,其細胞中DNA含量不同,但不一定都低。酒精溶液的作用是溶解雜質而不是溶解DNA,因此酒精溶液用量過大,不會導致DNA含量減少。研磨不充分和過濾不充分,會導致DNA提取量減少。
答案:D
★6將粗提取的DNA絲狀物分別加入到物質的量濃度為0.14 mol/L的NaCl溶液、物質的量濃度為 2 mol/L 的NaCl溶液、冷卻的體積分數(shù)為95%的酒精溶液中,然后用放有紗布的漏斗
13、過濾,分別得到濾液P、Q、R以及存留在紗布上的黏稠物p、q、r,其中由于含DNA少可以丟棄的是( )
A.P、Q、R B.p、q、r
C.P、q、R D.p、Q、r
解析:將粗提取的DNA絲狀物加入物質的量濃度為0.14 mol/L 的NaCl溶液中,DNA析出,過濾后DNA存在于紗布上(p),雜質存在于濾液(P)中;加入物質的量濃度為2 mol/L的NaCl溶液中,DNA溶解,過濾后DNA存在于濾液(Q)中,雜質(q)存在于紗布上;加入冷卻的體積分數(shù)為95%的酒精溶液中,DNA析出,過濾后DNA存在于紗布上(r),雜質存在于濾液(R)中。
答案:C
7回答下列有關“DNA的粗提取
14、與鑒定”實驗的問題。下圖為該實驗過程中的一些重要操作示意圖。
(1)正確的操作順序是 。(請用字母和箭頭表示)?
(2)上圖C、E步驟都加入蒸餾水,但其目的不同,分別是 和 。?
(3)上圖A步驟中所用酒精必須是經過 的,該步驟的目的是 ?
。?
(4)為鑒定A步驟中所得到的絲狀物的主要成分為DNA,可滴加 試劑后沸水浴,如果出現(xiàn) 則證明該絲狀物的主要成分為DNA。?
解析:(1)圖中A步驟為往含DNA的濃NaCl溶液中加入體積分數(shù)為95%的酒精溶液,目的是提取
15、較純凈的DNA。B步驟為單層紗布過濾,目的是獲得含DNA的濾液。C步驟為往雞血細胞液中添加蒸餾水,目的是破碎細胞,釋放核物質。D步驟為往物質的量濃度為2 mol/L NaCl溶液中加入DNA絲狀物,目的是溶解DNA。E步驟為往DNA濃NaCl溶液中加入蒸餾水,目的是降低NaCl溶液的濃度,析出DNA。根據DNA粗提取的實驗流程:破碎細胞(釋放DNA)→過濾→溶解核內DNA→過濾→析出DNA→過濾→DNA再溶解→提取含雜質較少的DNA。可以判斷正確的操作順序為C→B→E→D→A。
(2)C步驟為往雞血細胞液中添加蒸餾水,目的是破碎細胞,釋放核物質。E步驟為往含DNA的濃NaCl溶液中加入蒸餾水
16、,目的是降低NaCl溶液的濃度,析出DNA。
(3)A步驟為往含DNA的濃NaCl溶液中加入體積分數(shù)為95%的酒精溶液,目的是提取較純凈的DNA。因為DNA在冷卻的酒精溶液中溶解度更低,因此需要將酒精溶液充分預冷后使用。
(4)鑒定DNA可以利用二苯胺試劑,DNA與該試劑在沸水浴的條件下變藍色。
答案:(1)C→B→E→D→A (2)加速細胞的破裂 降低NaCl溶液的濃度,使DNA析出 (3)充分預冷 提取含雜質較少(或較純凈)的DNA (4)二苯胺 藍色
★8某生物興趣小組開展DNA粗提取的相關探究活動,具體步驟如下。
材料處理:稱取新鮮的菜花、辣椒和蒜黃各2份,每份10 g。剪碎
17、后分成兩組,一組置于20 ℃、另一組置于-20 ℃條件下保存24 h。
DNA粗提取:
第一步,將上述材料分別放入研缽中,各加入15 mL 研磨液,充分研磨,用兩層紗布過濾,取濾液備用;
第二步,先向6只小燒杯中分別注入10 mL濾液,再加入20 mL體積分數(shù)為95%的冷酒精溶液,然后用玻璃棒緩緩地向一個方向攪拌,使絮狀物纏繞在玻璃棒上;
第三步,取6支試管,分別加入等量的物質的量濃度為2 mol/L 的NaCl溶液溶解上述絮狀物。
DNA檢測:在上述試管中各加入4 mL二苯胺試劑,混合均勻后,置于沸水中加熱5 min,待試管冷卻后比較溶液的顏色深淺,結果如下表:
材料保存溫度/℃
18、
菜花
辣椒
蒜黃
20
++
+
+++
-20
+++
++
++++
(注:“+”越多表示藍色越深)
分析上述實驗過程,回答下列問題。
(1)該探究性實驗課題名稱是? 。?
(2)第二步中“緩緩地”攪拌,這是為了防止? 。?
(3)根據實驗結果,得出結論并分析。
①結論1:與20 ℃相比,相同實驗材料在-20 ℃條件下保存,DNA的提取量較多。
結論2:? 。?
②針對結論1,請?zhí)岢龊侠淼慕忉?? 。?
(4)氯仿密度大于水,能使蛋白質變性沉淀,與水和DNA均不相溶,且對DNA影響極小。為了進一步提高DNA純度,依據氯仿
19、的特性,在DNA粗提取第三步的基礎上繼續(xù)操作的步驟是?? ,?
然后用體積分數(shù)為95%的冷酒精溶液使DNA析出。
解析:(1)分析表格可知,實驗目的在于探究材料和保存溫度對DNA提取量的影響。
(2)DNA分子為鏈狀,很容易斷裂,所以應緩緩地向一個方向攪拌。
(3)分析表格可看出,同種材料在-20 ℃時DNA提取量較多,不同材料在同種溫度下保存時,蒜黃的DNA提取量最多。低溫下酶活性較低,DNA降解慢。
(4)根據題意,可用氯仿將DNA溶液中的蛋白質析出,進一步提高DNA的純度。
答案:(1)探究不同材料和不同保存溫度對DNA提取量的影響 (2)DNA斷裂 (3)①等質量的不同實驗材料,在相同的保存溫度下,從蒜黃中提取的DNA量最多?、诘蜏匾种屏讼嚓P酶的活性,DNA降解速度慢 (4)將第三步獲得的溶液與等量的氯仿充分混合,靜置一段時間,吸取上清液