2019-2020年高三生物第一輪復(fù)習(xí) 專題1 基因工程練習(xí) 新人教版選修3.doc
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2019-2020年高三生物第一輪復(fù)習(xí) 專題1 基因工程練習(xí) 新人教版選修3 1.(16分)質(zhì)粒是基因工程中最常用的載體,質(zhì)粒上有標(biāo)記基因,如圖所示,通過(guò)標(biāo)記基因可推知外源基因插入的位置,插入位置不同,細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況也不同。如圖表示外源基因的插入位置(插入點(diǎn)有a、b、c)。 Ⅰ.(1)質(zhì)粒的基本組成單位是 。 (2)將細(xì)菌放在含有四環(huán)素、氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng),屬于基因工程操作中的 步驟。 Ⅱ.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探究外源基因插入的位置。 (3)步驟: ①將導(dǎo)入外源基因的細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)產(chǎn)生大量細(xì)菌。 ②分組:將細(xì)菌平均分成兩組并標(biāo)號(hào)為1、2。 ③培養(yǎng):將第1組細(xì)菌放入 中培養(yǎng),將第2組細(xì)菌放入 中培養(yǎng)。 ④觀察并記錄結(jié)果。 (4)預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論: ①若1組、2組均能正常生長(zhǎng),則外源基因插入點(diǎn)是 。 ②若1組能正常生長(zhǎng),2組不能生長(zhǎng),則外源基因插入點(diǎn)是 。 ③若1組不能生長(zhǎng),2組能正常生長(zhǎng),則外源基因插入點(diǎn)是 。 【解析】(1)質(zhì)粒是小型環(huán)狀DNA分子,其基本組成單位是脫氧核苷酸。 (2)抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因都屬于標(biāo)記基因,其目的是便于目的基因的檢測(cè)與鑒定。 (3)分別將導(dǎo)入外源基因的細(xì)菌放在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),觀察能否生長(zhǎng)。 (4)若目的基因插入a點(diǎn),則受體細(xì)胞既具有抗四環(huán)素的能力,又具有抗氨芐青霉素的能力;若目的基因插入b點(diǎn),則受體細(xì)胞只具有抗四環(huán)素的能力;若目的基因插入c點(diǎn),則受體細(xì)胞只具有抗氨芐青霉素的能力。以此可判斷目的基因插入的位置。 答案:(1)脫氧核苷酸 (2)目的基因的檢測(cè)與鑒定 (3)③含氨芐青霉素的培養(yǎng)基 含四環(huán)素的培養(yǎng)基 (4)①a?、赾?、踒 2.(20分)(xx天津高考)嗜熱土壤芽孢桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶,為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用,開展了以下試驗(yàn): Ⅰ.利用大腸桿菌表達(dá)BglB酶 (1)PCR擴(kuò)增bglB基因時(shí),選用 基因組DNA作模板。 (2)下圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識(shí)別序列。為使PCR擴(kuò)增的bglB基因重組進(jìn)該質(zhì)粒,擴(kuò)增的bglB基因兩端需分別引入 和 不同限制酶的識(shí)別序列。 (3)大腸桿菌不能降解纖維素,但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力,這是因?yàn)椤 ? 。 Ⅱ.溫度對(duì)BglB酶活性的影響 (4)據(jù)圖1、2可知,80℃保溫30分鐘后,BglB酶會(huì) ;為高效利用BglB酶降解纖維素,反應(yīng)溫度最好控制在 (單選)。 A.50℃ B.60℃ C.70℃ D.80℃ Ⅲ.利用分子育種技術(shù)提高BglB酶的熱穩(wěn)定性 在PCR擴(kuò)增bglB基因的過(guò)程中,加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。經(jīng)過(guò)篩選,可獲得能表達(dá)出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。 (5)與用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽孢桿菌相比,上述育種技術(shù)獲取熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高,其原因是在PCR過(guò)程中 (多選)。 A.僅針對(duì)bglB基因進(jìn)行誘變 B.bglB基因產(chǎn)生了定向突變 C.bglB基因可快速累積突變 D.bglB基因突變不會(huì)導(dǎo)致酶的氨基酸數(shù)目改變 【解題指南】(1)圖示信息:Ⅰ.質(zhì)粒作為載體,應(yīng)具備的結(jié)構(gòu)有限制酶切割位點(diǎn)、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。Ⅱ.圖1表示溫度對(duì)酶活性的影響,圖2表示不同溫度下酶的熱穩(wěn)定性的大小。 (2)關(guān)鍵知識(shí):獲取目的基因、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、酶的活性和熱穩(wěn)定性、誘變育種的原理。 【解析】本題考查基因工程、酶的活性和變異的相關(guān)知識(shí)。 (1)bglB基因存在于嗜熱土壤芽孢桿菌基因組中,故應(yīng)以該菌的基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。 (2)目的基因與質(zhì)粒進(jìn)行重組時(shí),需將目的基因插入啟動(dòng)子和終止子之間,且應(yīng)靠近啟動(dòng)子和終止子,結(jié)合示意圖可知,應(yīng)在擴(kuò)增的bglB基因兩端分別引入NdeⅠ和BamHⅠ兩種限制酶的識(shí)別序列。 (3)該基因表達(dá)載體中含有bglB基因,其可表達(dá)產(chǎn)生β-葡萄糖苷酶,可分解纖維素,這樣大腸桿菌就獲得了分解纖維素的能力。 (4)由圖2可知,BglB酶在80℃保溫30分鐘后,就會(huì)失活;由圖1可知,當(dāng)溫度為60~70℃時(shí),酶活性較高,而由圖2可知,70℃保溫30分鐘,酶活性會(huì)減弱,而60℃保溫30分鐘后酶活性基本不發(fā)生變化,由此可知為高效利用BglB酶降解纖維素,反應(yīng)溫度最好控制在60℃。 (5)在bglB基因擴(kuò)增過(guò)程中加入誘變劑進(jìn)行誘變處理,相比于誘變劑直接處理嗜熱土壤芽孢桿菌,針對(duì)性更強(qiáng);基因突變是不定向的;由于PCR過(guò)程中基因擴(kuò)增即DNA復(fù)制快速進(jìn)行,發(fā)生突變后可進(jìn)行快速累積,進(jìn)而便于篩選;基因突變可能導(dǎo)致氨基酸數(shù)目的改變,如突變后的密碼子變?yōu)榻K止密碼子,可導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成提前終止,進(jìn)而導(dǎo)致氨基酸數(shù)目變少。 答案:(1)嗜熱土壤芽孢桿菌 (2)NdeⅠ BamHⅠ (3)轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶 (4)失活 B (5)A、C 【易錯(cuò)提醒】限制酶的使用及作用特點(diǎn)的三點(diǎn)提醒 (1)獲取目的基因和切割載體時(shí)不能選用識(shí)別兩種序列的限制酶,否則產(chǎn)生的堿基末端不相同。 (2)當(dāng)限制酶剪切目的基因一次時(shí),獲得的黏性末端或平末端有2個(gè),而不是1個(gè),若剪切目的基因兩次,共產(chǎn)生4個(gè)黏性末端或平末端。 (3)限制酶切割載體的切割位點(diǎn)并不是任意的,必須保證至少有1個(gè)標(biāo)記基因的完整性,以便于檢測(cè)。 3.(12分)(xx海南高考)下圖是將某細(xì)菌的基因A導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi),制備“工程菌”的示意圖。 據(jù)圖回答: (1)獲得A有兩條途徑:一是以A的mRNA為模板,在 酶的催化下,合成互補(bǔ)的單鏈DNA,然后在 的作用下合成雙鏈DNA,從而獲得所需基因;二是根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的 序列,推測(cè)出相應(yīng)的mRNA序列,然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,推測(cè)其DNA的 序列,再通過(guò)化學(xué)方法合成所需基因。 (2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí),需要在反應(yīng)體系中添加的有機(jī)物質(zhì)有 、 、4種脫氧核糖核苷酸和耐熱性的DNA聚合酶,擴(kuò)增過(guò)程可以在PCR擴(kuò)增儀中完成。 (3)由A和載體B拼接形成的C通常稱為 。 (4)在基因工程中,常用Ca2+處理D,其目的是 。 【解題指南】(1)題干關(guān)鍵詞:“將某細(xì)菌的基因A導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)”。 (2)關(guān)鍵知識(shí):基因工程的原理和技術(shù)、蛋白質(zhì)工程和PCR技術(shù)的應(yīng)用。 【解析】本題主要考查基因工程及PCR技術(shù)應(yīng)用的相關(guān)知識(shí)。 (1)利用逆(反)轉(zhuǎn)錄法合成目的基因的過(guò)程是:以mRNA為模板,在逆(反)轉(zhuǎn)錄酶的催化作用下合成單鏈DNA,然后在DNA聚合酶的作用下,合成雙鏈DNA分子;根據(jù)蛋白質(zhì)工程合成目的基因的過(guò)程是:根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的氨基酸序列,推測(cè)相應(yīng)的mRNA序列,然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,推測(cè)DNA中脫氧核苷酸的排列順序,通過(guò)化學(xué)方法合成。 (2)PCR過(guò)程中需要酶、底物、模板、引物等條件。 (3)目的基因和載體結(jié)合,形成基因表達(dá)載體。 (4)在利用大腸桿菌做受體細(xì)胞時(shí),需要先用Ca2+處理,使之成為感受態(tài)細(xì)胞,有利于其吸收重組DNA分子。 答案:(1)逆轉(zhuǎn)錄 DNA聚合酶 氨基酸 脫氧核苷酸 (2)引物 模板(A基因) (3)基因表達(dá)載體 (4)使其成為感受態(tài)細(xì)胞,有利于吸收重組DNA分子 4.(15分)(xx吉林模擬)轉(zhuǎn)基因草莓中有能表達(dá)乙肝病毒表面抗原的基因,由此可獲得用來(lái)預(yù)防乙肝的一種新型疫苗,其培育過(guò)程如下圖所示(①至④代表過(guò)程,A至C代表結(jié)構(gòu)或細(xì)胞): (1)在圖中①基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程中,為了使目的基因正常表達(dá),目的基因的首端必須有 識(shí)別和結(jié)合的部位。若選擇的限制酶切出的DNA片段是平末端,應(yīng)選擇 進(jìn)行連接。 (2)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法很多,在該題中涉及的方法是 ,之所以要把目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中,這是利用T-DNA 的特點(diǎn)。 (3)過(guò)程②的具體操作是:先用 處理農(nóng)桿菌,使其處于感受態(tài);再將含乙肝病毒表面抗原基因的重組Ti質(zhì)粒溶于緩沖液中與經(jīng)處理的農(nóng)桿菌混合,完成轉(zhuǎn)化過(guò)程。 (4)圖中③和④過(guò)程分別叫做 ,將葉盤培養(yǎng)成草莓幼苗所依據(jù)的原理是 。 (5)乙肝病毒表面抗原的基因能否在草莓植株體內(nèi)維持穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是 ,通常采用 的方法進(jìn)行檢測(cè)。 【解析】本題考查基因工程及轉(zhuǎn)基因生物的安全性的相關(guān)知識(shí),意在考查對(duì)基因工程的理解及運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決實(shí)際問(wèn)題和識(shí)圖的能力。(1)基因表達(dá)載體由啟動(dòng)子、目的基因、終止子和標(biāo)記基因等組成,其中啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn);根據(jù)酶的來(lái)源不同,DNA連接酶分為兩類:EcoliDNA連接酶和T4DNA連接酶,這二者都能連接黏性末端,但是T4DNA連接酶還可以連接平末端。(2)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法很多,在該題中涉及的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞,并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。(3)圖中②過(guò)程是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌,由于受體細(xì)胞是細(xì)菌,常用Ca2+處理使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),稱為感受態(tài)細(xì)胞,以完成轉(zhuǎn)化過(guò)程。(4)圖中③過(guò)程是讓葉盤細(xì)胞脫分化形成愈傷組織,進(jìn)而再經(jīng)④再分化形成幼苗,此過(guò)程叫做植物組織培養(yǎng);原理是植物細(xì)胞的全能性。(5)乙肝病毒表面抗原的基因能否在草莓植株體內(nèi)維持穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是目的基因是否插入了受體細(xì)胞的染色體DNA上,通常采用DNA分子雜交的方法進(jìn)行檢測(cè)。在分子水平上,還可采用抗原-抗體雜交的方法來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因草莓果實(shí)提取液中有無(wú)相應(yīng)的抗原。 答案:(1)RNA聚合酶 T4DNA連接酶 (2)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上 (3)Ca2+ (4)脫分化和再分化 植物細(xì)胞的全能性 (5)目的基因是否插入了受體細(xì)胞的染色體DNA上 DNA分子雜交 5.(12分)(xx唐山模擬)生物分子間特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于生命科學(xué)研究。以下實(shí)例為體外處理“蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合體”獲得DNA片段信息的過(guò)程圖。 據(jù)圖回答: (1)過(guò)程①酶作用的部位是 ,此過(guò)程只發(fā)生在非結(jié)合區(qū)DNA,過(guò)程②酶作用的部位是 。 (2)①②兩過(guò)程利用了酶的 特性。 (3)若將得到的DNA片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒,需要將過(guò)程③的測(cè)序結(jié)果與 酶的識(shí)別序列進(jìn)行比對(duì),以確定選用何種酶。 (4)如果復(fù)合體中的蛋白質(zhì)為RNA聚合酶,則其識(shí)別、結(jié)合的DNA序列區(qū)為基因的 。 (5)以下研究利用了生物分子間特異性結(jié)合性質(zhì)的有 (多選)。 A.分離得到核糖體,用蛋白酶酶解后提取rRNA B.用無(wú)水乙醇處理菠菜葉片,提取葉綠體基粒膜上的光合色素 C.通過(guò)分子雜交手段,用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進(jìn)行染色體基因定位 D.將抑制成熟基因?qū)敕?,其mRNA與催化成熟酶基因的mRNA互補(bǔ)結(jié)合,終止后者翻譯,延遲果實(shí)成熟 【解析】(1)DNA酶作用于DNA分子后,若將DNA分子切割成片段,應(yīng)作用于磷酸二酯鍵,蛋白酶作用于蛋白質(zhì)中的肽鍵。 (2)酶的作用特點(diǎn)是具有專一性。 (3)若用DNA片段構(gòu)建重組質(zhì)粒,需要與限制性核酸內(nèi)切酶切割的識(shí)別序列進(jìn)行比對(duì),選用切割后獲得的相同片段所對(duì)應(yīng)的限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行切割。 (4)RNA聚合酶特定結(jié)合啟動(dòng)子中RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。 (5)蛋白酶特定處理蛋白質(zhì),DNA分子雜交和mRNA與基因的互補(bǔ)都體現(xiàn)了堿基互補(bǔ)配對(duì)原則。 答案:(1)磷酸二酯鍵 肽鍵 (2)專一性 (3)限制性核酸內(nèi)切 (4)啟動(dòng)子(或轉(zhuǎn)錄起始區(qū)) (5)A、C、D 6.(15分)圖1表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度(bp即堿基對(duì))和部分堿基序列,圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶,它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請(qǐng)回答下列問(wèn)題: (1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由 連接。 (2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段,產(chǎn)生的末端是 末端,其產(chǎn)物長(zhǎng)度為 。 (3)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換,那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,產(chǎn)物中共有 種不同長(zhǎng)度的DNA片段。 (4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行連接,形成重組質(zhì)粒,那么應(yīng)選用的限制酶是 。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后,為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌,一般需要用添加 的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測(cè),部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá),其最可能的原因是 。 【解題指南】解答本題特別關(guān)注以下三點(diǎn): (1)明確堿基、磷酸和脫氧核糖之間的連接關(guān)系。 (2)準(zhǔn)確識(shí)別各種限制酶的切割位點(diǎn)。 (3)知道重組質(zhì)粒中最少含有一種抗性基因。 【解析】(1)兩條脫氧核苷酸鏈之間的堿基通過(guò)氫鍵相連,一條脫氧核苷酸鏈中相鄰的堿基通過(guò)脫氧核糖-磷酸-脫氧核糖連接。 (2)根據(jù)限制酶SmaⅠ識(shí)別的堿基序列可知,限制酶SmaⅠ切割產(chǎn)生的末端為平末端。在圖1序列中共有2個(gè)SmaⅠ的切割位點(diǎn),切割后形成3種不同長(zhǎng)度的產(chǎn)物,分別為537 bp、790 bp、661 bp。 (3)圖1中有SmaⅠ的兩個(gè)識(shí)別序列,完全切割后產(chǎn)生3個(gè)不同長(zhǎng)度的DNA片段,若虛線方框中的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換,再經(jīng)SmaⅠ識(shí)別并完全切割后會(huì)產(chǎn)生2個(gè)DNA片段,其中1個(gè)DNA片段與未替換前完全切割的相同,因此經(jīng)完全切割后共產(chǎn)生4種不同長(zhǎng)度的DNA片段。 (4)切割目的基因可選用限制酶BamHⅠ和限制酶MboⅠ,但限制酶MboⅠ可將質(zhì)粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因都破壞,而限制酶BamHⅠ只破壞抗生素A抗性基因,因此只能選用限制酶BamHⅠ;重組質(zhì)粒中含有抗生素B抗性基因,因此可在含抗生素B的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 答案:(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖 (2)平 537 bp、790 bp、661 bp (3)4 (4)BamHⅠ 抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同,部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接 【延伸探究】 (1)若本題(1)中“一條”換為“兩條”,則依靠什么結(jié)構(gòu)連接? 提示:DNA兩條鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)形成氫鍵的方式連接在一起。 (2)對(duì)圖2所示的質(zhì)粒用MboⅠ限制酶切割后,放在含有抗生素A的培養(yǎng)基中培養(yǎng),能否生長(zhǎng)?為什么? 提示:不能生長(zhǎng)。因?yàn)榭股谹抗性基因中含有GATC序列,一旦用MboⅠ限制酶切割該質(zhì)粒后,會(huì)破壞該基因,從而無(wú)法抵抗抗生素A。 7.(10分)家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因的能力。將人干擾素基因?qū)爰倚Q細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng),可提取干擾素用于制藥。 (1)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前,需用 酶短時(shí)處理幼蠶組織,以便獲得單個(gè)細(xì)胞。 (2)為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá),需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的 和 之間。 (3)PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含:擴(kuò)增緩沖液(含Mg2+)、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、 和 。 (4)利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí),貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生接觸抑制。通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中,這樣可以 ,增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量,也有利于空氣交換。 【解析】(1)利用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理動(dòng)物組織可獲得單個(gè)細(xì)胞。(2)來(lái)自cDNA文庫(kù)中的目的基因不含復(fù)制原點(diǎn)、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子和終止子等,故需將該目的基因插入啟動(dòng)子和終止子之間。(3)PCR技術(shù)是在體外高溫條件下進(jìn)行的,需利用熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)。由于DNA聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸連接在一個(gè)片段上,所以在PCR反應(yīng)體系中還需加入引物。(4)據(jù)題意可知,反應(yīng)器中放入多孔中空薄壁小玻璃珠可擴(kuò)大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積,有利于細(xì)胞增殖。 答案:(1)胰蛋白(或膠原蛋白) (2)啟動(dòng)子 終止子 (3)對(duì)干擾素基因特異的DNA引物 TaqDNA聚合酶 (4)擴(kuò)大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積- 1.請(qǐng)仔細(xì)閱讀文檔,確保文檔完整性,對(duì)于不預(yù)覽、不比對(duì)內(nèi)容而直接下載帶來(lái)的問(wèn)題本站不予受理。
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