液基薄層細胞制片技術(shù)培訓PPT演示課件
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液基細胞學技術(shù),.,,◆液基細胞學制片技術(shù)的發(fā)展 ◆液基細胞學制片技術(shù)的應用優(yōu)勢 ◆TBS報告系統(tǒng)的解讀 ◆影響制片效果的因素及操作要點,.,液基細胞學制片技術(shù)的發(fā)展,細胞病理學: 根據(jù)細胞內(nèi)異常狀況,研究疾病發(fā)生的原因,發(fā)病原理,以及疾病發(fā)生過程中,細胞的生理功能發(fā)生改變的規(guī)律,從而提出診斷和防治疾病的依據(jù)。主要涵蓋脫落細胞學和細針吸取細胞學 。 脫落細胞學: 采集人體各部位,特別是管腔器官表面的脫落細胞,經(jīng)染色后用顯微鏡觀察這些細胞的形態(tài),并作出診斷的一門臨床檢驗學科,又名診斷細胞學或臨床細胞學 。主要包括宮頸脫落細胞學、痰液脫落細胞學等。,.,液基細胞學制片技術(shù)的發(fā)展,宮頸脫落細胞學的檢查意義: 宮頸癌是婦女最常見的惡性腫瘤。據(jù)統(tǒng)計,宮頸癌的發(fā)病率與死亡率居女性惡性腫瘤的第二位。在我國,每年約有15萬新發(fā)病例,約占世界的1/4,每年約有8萬患者死于宮頸癌。 在發(fā)達國家,宮頸癌的發(fā)病率已明顯下降,這在很大程度上歸因于對癌前病變的早期診斷和治療。在發(fā)展中國家,由于宮頸篩查工作尚不完善,因此宮頸癌發(fā)生率是發(fā)達國家的6倍。特別應引起警惕的是,由于環(huán)境污染和不良的生活衛(wèi)生習慣,使原本在婦女50歲左右才比較多發(fā)的宮頸癌,如今已盯上了年輕女性。據(jù)北京友誼醫(yī)院有關(guān)專家對上萬例宮頸病變患者的篩查結(jié)果顯示,發(fā)現(xiàn)異常607例,最后確診宮頸癌前病變345例,宮頸癌9例。宮頸癌前病變最年輕者23歲,宮頸癌患者年齡分布在34—48歲,其中40歲以下者占33.3%,40—48歲者占66.6%,宮頸癌已嚴重威脅到中青年女性的健康和生命。,.,液基細胞學制片技術(shù)的發(fā)展,宮頸癌防治的關(guān)鍵在于定期進行婦科檢查,及時發(fā)現(xiàn)和治療宮頸癌前病變,終止其向?qū)m頸癌的方向發(fā)展。由于宮頸癌有一系列的前驅(qū)病變,它的發(fā)生、發(fā)展是由量變到質(zhì)變,漸變到突變的過程。通常由子宮頸鱗狀上皮不典型增生(癌前病變)發(fā)展到原位癌再到早期浸潤癌,最后發(fā)展到浸潤癌的連續(xù)發(fā)展過程有6-8年的時間。在這期間如果對宮頸病變及時的診斷和正確的治療,就能預防及早期治愈宮頸癌。,.,液基細胞學制片技術(shù)的發(fā)展,宮頸脫落細胞學的傳統(tǒng)診查手段—巴氏涂片,希臘醫(yī)生Papanicolaou?GN(巴氏)通過對陰道細胞的長期觀察,發(fā)現(xiàn)了源于子宮頸癌的細胞,巴氏理論和技術(shù)對惡性腫瘤和癌前病變診斷起了重要的作用,自1943年巴氏涂片應用以來,宮頸癌的發(fā)生率和死亡率在50年間降低了70%.,.,液基細胞學制片技術(shù)的發(fā)展,1943年發(fā)明的巴氏宮頸涂片法應用半個多世紀以來,為早期診斷子宮癌及降低死亡率發(fā)揮了重要作用。直到80年代中后期,美國報道了大量巴氏宮頸涂片診斷為假陰性(2%-50%)的病例,使人們認識到對制片技術(shù)進行進一步改進的必要性。 細胞學專家通過研究發(fā)現(xiàn),傳統(tǒng)的巴氏涂片漏診或誤診的主要原因是取材時細胞丟失和涂片質(zhì)量差,涂片上存在著大量的紅細胞、白細胞、粘液及脫落壞死組織等 。 針對上述缺陷,美國新柏氏公司于1996年,率先推出了液基薄層細胞涂片技術(shù)(Thin-layer logy Test, TCT),并于1998年引入中國市場,通過近10年的市場推廣,得到了長遠發(fā)展。,.,液基細胞學制片技術(shù)的發(fā)展,液基薄層細胞涂片技術(shù): 通過特制采樣器,采集標本,將細胞100%保存于細胞保存液內(nèi),再通過技術(shù)手段,去除紅細胞、粘液等非診斷成分,通過不同原理的制片技術(shù)將細胞均勻、薄層的涂布于載玻片上。 1996年新柏氏推出了基于高精密過濾膜的制片技術(shù),簡稱TCT; 1998年超柏氏推出了基于密度梯度離心和自然沉降的制片技術(shù),簡稱LCT。 2001年推出了替代巴氏五級分類法的報告系統(tǒng),簡稱為TBS報告系統(tǒng)。,.,液基細胞學制片技術(shù)的應用優(yōu)勢,取材部位: 鱗狀上皮細胞與柱狀上皮細胞交接區(qū)---移形帶,.,液基細胞學制片技術(shù)的應用優(yōu)勢,取材優(yōu)勢: 傳統(tǒng)的取材器 取材方法:采用硬質(zhì)刮片,沿宮頸口,按一個方向,刮取一定圓周范圍,創(chuàng)傷較大;由于操作人員不同,可能造成病變部位未取到的情況,新型的取材器 取材方法:采用軟質(zhì)毛刷,沿宮頸口,按一個方向,旋轉(zhuǎn)3-5圈;確保整個宮頸口圓周區(qū)域內(nèi)各部位細胞均被取到,創(chuàng)傷較小。,.,液基細胞學制片技術(shù)的應用優(yōu)勢,細胞保存優(yōu)勢: 巴氏涂片:將刮片從載玻片一頭推至另一頭,丟棄刮片。 可能造成刮片未接觸玻片面的細胞不被取到,丟棄大量細胞。 液基細胞學制片:將刷頭上細胞充分洗入細胞保存液內(nèi),使得制片前細胞不發(fā)生丟失。,.,液基細胞學制片技術(shù)的應用優(yōu)勢,診斷優(yōu)勢: 傳統(tǒng)的巴氏涂片可能由于人員操作差異,導致部分涂片可觀察細胞少,粘液等大量聚集,覆蓋觀察成分,造成診斷失誤。,液基細胞制片技術(shù): 將細胞充分混勻,通過技術(shù)手段制成鏡下觀察細胞呈薄層分布,粘液等非診斷成分少的薄片,更有利于診斷。,.,TBS報告系統(tǒng)的解讀,巴氏五級分類法: Ⅰ級:正常:未見異常細胞. ?、蚣墸貉装Y:發(fā)現(xiàn)異常細胞,但均為良性. ?、蠹墸嚎梢桑喊l(fā)現(xiàn)可疑惡性細胞. ?。?)性質(zhì)不明細胞. ?。?)細胞形態(tài)明顯異常,難于肯定其良,惡性,需要近期復查核實. (3)未分化或退化的可疑惡性細胞與惡性裸核. ?、艏墸焊叨龋喊l(fā)現(xiàn)待證實的癌細胞(高度可疑的惡性細胞),具有惡性特征但不夠典型;或更典型但數(shù)目太少,需要復核,例如高度可疑的未分化或退化癌細胞,或少數(shù)低分化癌細胞. Ⅴ級:惡性:發(fā)現(xiàn)癌細胞,其惡性特征明顯或數(shù)目較多,可作互相比較以確定為惡性者,例如高分化的鱗癌或腺癌細胞;成群未分化或低分化癌細胞.,.,TBS報告系統(tǒng)的解讀,以級別來表示細胞學改變的程度易造成假象,每個級別之間有嚴格的區(qū)別,使臨床醫(yī)師僅根據(jù)分類級別的特定范圍處理患者,實際上Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級之間的區(qū)別并無嚴格的客觀標準,主觀因素較多;對癌前病變也無明確規(guī)定,可疑癌是指可疑浸潤癌還是CIN不明確;不典型細胞全部作為良性細胞學改變也欠妥,因為偶然也見到CINⅠ伴微小浸潤癌的病例;未能與組織病理學診斷名詞相對應,也未包括非癌的診斷。 2001年推出的TBS報告系統(tǒng)已逐步取代傳統(tǒng)的巴氏五級分類法。,.,TBS報告系統(tǒng)的解讀,處理原則: (1)對涂片的滿意程度 分為滿意、基本滿意、不滿意。 (2)結(jié)果為正常,則每年定期進行TCT檢查。 (3)良性細胞改變 ①感染:滴蟲性陰道炎;霉菌性陰道炎;形態(tài)學似放線菌感染;形態(tài)學似乳頭瘤病毒感染;形態(tài)學似單純皰疹病毒感染。 ②反應性改變:炎癥(包括典型修復細胞的出現(xiàn));萎縮性改變及炎癥;放療后改變;放置宮內(nèi)節(jié)育器的改變及其它。,.,TBS報告系統(tǒng)的解讀,(4)上皮細胞的異常改變 ①鱗狀上皮細胞異常 結(jié)果為ASC-US(不能明確診斷意義的非典型鱗狀上皮細胞),建議3-6個月后重復 TCT檢查。 結(jié)果為ASC-H(非典型鱗狀上皮細胞不排除高度鱗狀上皮內(nèi)病變),應在陰道鏡下行組織活檢以及HPV檢測。 結(jié)果為LSIL(低度鱗狀上皮內(nèi)病變,包括CINⅠ),建議3-6個月后重復TCT檢查。復查陽性者,尤其對HPV陽性者,應在陰道鏡下行組織活檢,以及HPV檢測。復查結(jié)果陰性者,則每年定期進行TCT復查。 結(jié)果為HSIL(高度磷狀上皮內(nèi)病變, 包括CINⅡ、CINⅢ、原位癌、鱗癌),應在陰道鏡下行組織活 檢以及HPV檢測。 注:宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasias,CIN)是一組與宮頸浸潤癌密切相關(guān)的癌前期病變的統(tǒng)稱包括宮頸不典型增生和宮頸原位癌,反映了宮頸癌發(fā)生中連續(xù)發(fā)展的過程,即由宮頸不典型增生(輕→中→重, CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ)→原位癌→早期浸潤癌→浸潤癌的一系列病理變化。CIN已被國內(nèi)外病理學者和婦科腫瘤學者所接受。,.,TBS報告系統(tǒng)的解讀,②腺上皮細胞異常 結(jié)果為AGC-US(不能明確診斷意義的非典型腺上皮細胞),建議3-6個月后重復TCT檢查。 結(jié)果為非典型腺細胞傾向原位腺癌,應在陰道鏡下行組織活檢以及HPV檢測。 結(jié)果為AGC(非典型腺上皮細胞),應在陰道鏡下行組織活檢以及HPV檢測。 結(jié)果為可疑腺癌、腺癌(包括宮頸腺癌、子宮內(nèi)膜腺癌、子宮外的腺癌及來源不明的腺癌等),應在陰道鏡下行組織活檢以及HPV檢測。 下面主要介紹2006ASCCP循證醫(yī)學指南介紹具體處理流程。 最新臨床處理指南,請參照2011NCCP宮頸癌篩查指南。,.,影響制片效果的因素及操作要點,符合TBS系統(tǒng)的滿意的制片其評價標準為: ★ 玻片有標識; ★ 涂片上有足夠量的形態(tài)保持良好的鱗狀上皮細胞(50000個以上),細胞覆蓋面積不得少于30%; ★ 包含有移行區(qū)成分(5個以上的宮頸內(nèi)膜腺上皮細胞或鱗狀上皮化生細胞至少有兩團); ★ 涂片上至少有75%以上的細胞能觀察清楚。 注意:鏡下視覺美觀的細胞涂片不等于是對臨床診斷有意義的細胞涂片。有成堆存在,但結(jié)構(gòu)清晰、可觀察的細胞涂片往往對臨床診斷有重要的診斷價值,因為病變細胞往往成堆出現(xiàn),且伴隨陽性背景。,.,影響制片效果的因素及操作要點,使用LT-YJ2000型自動液基薄層細胞涂片機,制出有利于臨床診斷的片子,主要影響因素為標本取材、標本預處理、儀器制片、后續(xù)染色。 1 取材: 儀器只能基于所取到的樣本進行制片,取得的細胞量過少或者全部為粘液成分,會造成所制得的片子上診斷成分不足。,.,影響制片效果的因素及操作要點,取樣前: 應先用棉簽將宮頸口表面的粘液盡可能的擦拭干凈 取樣: 施加一定的力度,朝一個方向旋轉(zhuǎn)3-5圈。應特別注意,施加力度不夠或者表面粘液過多時,刷頭會在粘液表面打滑,取到的成分全是粘液(非診斷成分),細胞成分少。 取樣后: 將刷頭在細胞保存液內(nèi)反復刷洗5-8次,將細胞洗入保存液內(nèi),丟棄刷頭,蓋緊瓶蓋。 注:若將刷頭丟至保存液瓶內(nèi),蓋緊瓶蓋后,應立即搖動,將刷頭上細胞洗脫,避免細胞粘附在刷頭表面,后續(xù)震蕩不能從刷頭上脫落并且易成塊。,.,影響制片效果的因素,2 標本預處理 適當?shù)念A處理能提高制片成功率。 預處理前首先觀察標本性狀,針對不同性狀標本進行不同的預處理,常見標本性狀如下圖所示:,.,影響制片效果的因素及操作要點,如圖所示,從左數(shù)起,第1瓶和第2瓶為血性標本,含中量粘液,粘度較大;第3瓶為黃色,原因為使用了藥物,第四瓶淺黃色,為粘液偏多,第5瓶本色透明,粘液少。 1 取樣后隔夜后制片更好,不得少于20min。 2 在粘液偏多的標本瓶內(nèi)加入1ml清洗液1,血性標本不需要針對紅細胞作任何處理,所有標本在振蕩器上強烈震蕩10min,或者渦旋振蕩器上震蕩(但應注意有效震蕩,觀察瓶內(nèi)溶液,應呈高速漩渦狀態(tài))20s。標本量較少時,可直接用手強力振搖數(shù)次即可。 3 上機前剔除不能被打散的蛋清樣粘液團和未被打散的大塊固態(tài)粘液團,.,影響制片效果的因素及操作要點,3 制片模式選擇 首先要避免細胞越多越好的誤區(qū),利于診斷的片子上細胞量合適即可,關(guān)鍵是可被觀察的細胞足夠,若細胞量過多,亦會造成細胞重疊量大,影響診斷的結(jié)果。 外觀為透明本色,懸浮有白色顆粒的標本:一般選擇模式1. 外觀為紅色或黃綠色,但粘液量少的標本,用模式2制片。 外觀為紅色或者黃綠色、粘度較大的標本:應確認無蛋清樣粘液,選擇模式3,制片后稍微陰干,再泡入95%乙醇固定。 注意:制片過程中,定量吸管、載玻片應安裝到位,盛放制片后載玻片的瓶子,可不加入95%乙醇,但底部應放入薄層棉花,防止玻片掉入時彈開。,.,影響制片效果的因素及操作要點,4 染色 良好的染色效果能使得鏡下觀察輕松、診斷準確。 用戶應根據(jù)科室使用的染色液特性,進行染色。若采用巴氏染色必須進行封片閱片,最好為濕法封片。,.,Thank you!,.,- 1.請仔細閱讀文檔,確保文檔完整性,對于不預覽、不比對內(nèi)容而直接下載帶來的問題本站不予受理。
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