2017-2018年高中生物 第4部分 淺嘗現(xiàn)代生物技術 實驗11 植物的組織培養(yǎng)學案 浙科版選修1

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1、 實驗11 植物的組織培養(yǎng) 課　標　解　讀 重　點　難　點 1.進行菊花的組織培養(yǎng)。 2.嘗試植物激素的應用。 1.植物組織培養(yǎng)中生長素和細胞分裂素的調控。 2.植物組織培養(yǎng)中的無菌操作。 一、植物的組織培養(yǎng) 1．扦插、嫁接、組織培養(yǎng)都是植物無性繁殖的方法。 2．植物組織培養(yǎng)的概念 取一部分植物組織，如葉、芽、莖、根、花瓣或花粉等，在無菌的條件下接種在三角瓶中的瓊脂培養(yǎng)基上，給予一定的溫度和光照，使之產生愈傷組織，或進而生根發(fā)芽。 用花粉經植物組織培養(yǎng)成的植株與由植物營養(yǎng)器官培養(yǎng)成的植株一樣嗎？為什么？ 【提示】　不一樣。前者屬于有性生殖，培養(yǎng)成的是單倍體植株

2、；后者是無性生殖，培養(yǎng)成的植株與原材料植株相同。 3 .激素在植物組織培養(yǎng)過程中的作用 (1)培養(yǎng)基中加入的植物激素是生長素和細胞分裂素。 (2)兩者的摩爾濃度比決定組織是生根還是生芽。 ①細胞分裂素與生長素的比例高時，誘導芽的生成。 ②細胞分裂素與生長素的比例大致相等時，愈傷組織繼續(xù)生長而不分化。 ③細胞分裂素與生長素的比例低時，會趨于長根。 4．實驗設計的思路 (1)材料：菊花。 (2)過程： ↓ ↓ ↓ ↓ 注意：實驗中使用的生長素是人工合成的萘乙酸(NAA)，細胞分裂素也是人工合成的芐基腺嘌呤(BA)。 二、菊花的組織培養(yǎng)實驗 1．實

3、驗材料 MS培養(yǎng)基、萘乙酸、發(fā)芽培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基。 2．實驗步驟 (1)組織培養(yǎng)材料的處理 在超凈臺中，取出一瓶已進行過無菌培養(yǎng)的菊花幼苗，在無菌培養(yǎng)皿上用無菌鑷子和無菌解剖刀切成幾段，每段上至少有1張葉片。 (2)培養(yǎng)成叢狀苗 在酒精燈旁，將每段放入1瓶生芽培養(yǎng)基中，使莖的一部分插入培養(yǎng)基內，蓋上封口膜。每瓶也可放入2～3段幼莖切段。在日光燈下保持18～25 ℃的溫度培養(yǎng)，每天的光照不少于14.5 h。2～3周后長成健壯的叢狀苗。 (3)生根培養(yǎng) 將健壯的叢狀苗在無菌條件下一個個轉入生根培養(yǎng)基中，在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)。 (4)瓶外培養(yǎng) 將生根的苗移至草炭土或蛭石中，用玻

4、璃罩或塑料布保持80%以上的濕度，2～3天后打開玻璃罩逐漸降低濕度進行鍛煉，直到將罩全部打開處于自然濕度下為止。 (5)移至土中培養(yǎng) 三、實驗補充部分 若材料為自然生長的莖，則與上述過程有以下不同：需要在實驗前對自然生長的莖進行處理如下：先在70%乙醇中浸泡10 min，再放入5%次氯酸鈉溶液中浸泡5 min，然后用另一5%次氯酸鈉溶液浸泡5 min，最后在超凈臺中用無菌水清洗，再將莖的切段培養(yǎng)在生芽培養(yǎng)基中。 為什么說無菌技術是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關鍵？ 【提示】　由于植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，所以對培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于

5、某些微生物的生長，如一些細菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會導致實驗前功盡棄，因此要進行嚴格的無菌操作。 植物組織培養(yǎng)的理論基礎和基本過程 1．植物組織培養(yǎng)的原理——植物細胞全能性 (1)植物細胞全能性的概念：高度分化的植物細胞，仍然具有發(fā)育成完整植株的潛能。 (2)細胞全能性的物質基礎：生物體的每一個細胞都含有本物種所特有的全套遺傳物質，都有發(fā)育成完整個體所必需的全套基因。 (3)高度分化的植物細胞全能性表達的條件： ①離體條件； ②無菌操作(防止雜菌污染)； ③適宜物質的誘導和調節(jié)(激素主要是生長素、細胞分裂素等)； ④種類齊全、比例適合的營養(yǎng)物

6、質； ⑤溫度、酸堿度、光照等條件的控制。 2．植物組織培養(yǎng)的基本過程 愈傷組織叢狀芽生根―→ (1)植物細胞的脫分化：由高度分化的植物組織或細胞產生愈傷組織的過程，稱為植物細胞的脫分化，或者叫做去分化。 (2)愈傷組織：原指植物在受傷之后在傷口表面形成的一團薄壁細胞。在組織培養(yǎng)中，則是指在人工培養(yǎng)基上由外植體通過細胞分裂產生的一團排列疏松而無規(guī)則，高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞。 (3)再分化：脫分化產生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)，可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做再分化。 (4)植物組織培養(yǎng)中兩種關鍵“激素杠桿”——生長素和細胞分裂素的調節(jié)作用 植物激素中生長素和細胞分

7、裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素，兩種激素號稱植物組織培養(yǎng)的“激素杠桿”，兩者的摩爾濃度比決定組織是生根，還是生芽。 兩者的摩爾濃度比 相關結果 比例適中 促進愈傷組織的生長 生長素＞細胞分裂素 有利于根的形成 生長素＜細胞分裂素 有利于芽的形成 　回答下列有關植物組織培養(yǎng)的問題： (1)用于植物組織培養(yǎng)的植物材料稱為___________________________。 (2)組織培養(yǎng)中的細胞，從分化狀態(tài)轉變?yōu)槲捶只癄顟B(tài)的過程稱為________。 (3)在再分化階段所用培養(yǎng)基中，含有植物激素X和植物激素Y。逐漸改變培養(yǎng)基中這兩種植物激素的濃度比，未分

8、化細胞群的變化情況如下圖所示。據(jù)圖指出兩種激素的不同濃度比與形成芽、根、愈傷組織的關系： ①當植物激素X與植物激素Y的濃度比等于1時， ______________________________________________________________； ②______________________________________________________________ ______________________________________________________________； ③_______________________________

9、_______________________________ ____________________________________________________________。 (4)若植物激素Y是生長素，在植物組織培養(yǎng)中其主要作用是________________；則植物激素X的名稱是________。 (5)生產上用試管苗保留植物的優(yōu)良性狀，其原因是 ___________________________________________。 【思路點撥】　(1)植物組織培養(yǎng)時所取材料稱為外植體。(2)讓已經分化的細胞，經過誘導后，失去其特有的結構和功能而轉變成未分化細胞的

10、過程，稱為脫分化。(3)據(jù)圖可得當激素X與激素Y的濃度比為1時，未分化的細胞群形成愈傷組織；當激素X與激素Y的濃度比大于1時，未分化的細胞群分化形成芽；當激素X與激素Y的濃度比小于1時，未分化的細胞群分化形成根。(4)生長素的作用是促進細胞生長、分裂和分化；激素X能促進細胞分裂，是細胞分裂素。(5)試管苗為無性繁殖，能夠保持親本的一切性狀，不發(fā)生性狀分離。 【答案】　(1)外植體 (2)去分化(脫分化) (3)①未分化細胞群經分裂形成愈傷組織?、诋斨参锛に豖與植物激素Y的濃度比大于1時，未分化細胞群分化形成芽?、郛斨参锛に豖與植物激素Y的濃度比小于1時，未分化細胞群分化形成根 (4)促

11、進細胞的生長(伸長)、分裂和分化　細胞分裂素 (5)組織培養(yǎng)形成試管苗的過程屬于無性生殖，后代不發(fā)生性狀分離 1．植物組織培養(yǎng)的過程如下圖所示。請分析并回答： 愈傷組織胚狀體植株 (1)愈傷組織是由離體的組織或器官通過A________過程獲得的，B、C過程是通過細胞的________實現(xiàn)的。 (2)胚狀體根據(jù)其來源不同，可以分為“體細胞胚”和“花粉胚”。 ①用花藥離體培養(yǎng)可獲得“花粉胚”，同種植物的花粉胚與體細胞胚在染色體數(shù)目上的主要區(qū)別是_________________________________________ __________________________

12、____________________________________ ____________________________________________________________。 ②如果用____________處理二倍體植物的花粉胚，能獲得可育的植株，該過程是________育種中不可缺少的步驟。 ③在一定條件下培養(yǎng)離體細胞可以形成體細胞胚進而發(fā)育成完整的植株，其根本原因是每個細胞都含有____________，這一過程體現(xiàn)了____________________________________________________________。 【解析】　此題考查

13、植物組織培養(yǎng)的過程。離體的組織或器官首先脫分化形成愈傷組織。胚狀體經過細胞分裂和分化形成植株?；ǚ叟呤腔ㄋ幗浗M織培養(yǎng)形成的，體細胞胚是體細胞經組織培養(yǎng)形成的?；ㄋ幗M織培養(yǎng)得到的花粉胚發(fā)育成的是單倍體，是不育的，用秋水仙素處理染色體加倍后成為可育植株。植物組織培養(yǎng)的原理是植物細胞的全能性。 【答案】　(1)脫分化　分裂(或“增殖”)和分化 (2)①花粉胚細胞中的染色體數(shù)目是體細胞胚的一半?、谇锼伤亍伪扼w　③本物種的全套基因(或“全套遺傳信息”)　植物細胞的全能性 影響植物組織培養(yǎng)的因素 1.培養(yǎng)材料自身因素的影響——內因 (1)不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差別很大。例如，煙草

14、和胡蘿卜的組織培養(yǎng)較為容易，而枸杞愈傷組織的芽誘導就比較難。因此，植物材料的選擇直接關系到實驗的成敗。 (2)對于同一種植物材料，材料的年齡、保存時間的長短等也會影響實驗結果，如：生長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導脫分化和再分化。 2．營養(yǎng)條件的影響 離體的植物組織和細胞，對營養(yǎng)條件的要求相對特殊，需要配制適宜的培養(yǎng)基——常用的一種培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其主要成分包括：大量元素，如N、P、K、Ca、Mg、S；微量元素，如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；有機物，如甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、以及蔗糖等。在配制好的MS培養(yǎng)基中，常常需要添加植物激素，特別是生長素與細胞分裂素，且兩種

15、植物激素的使用順序與濃度配比均可直接影響細胞脫分化與再分化狀況。 3．環(huán)境條件的影響 (1)溫度 溫度是植物組織培養(yǎng)中成功的重要條件。 ①最適溫度：在植物組織培養(yǎng)中大多采用最適溫度，并保持恒溫培養(yǎng)，以加速生長。通常采用25±2 ℃的溫度，對大多數(shù)植物來講是合適的，但也因種類而異，例如進行菊花組織培養(yǎng)，一般將溫度控制在18 ℃～25 ℃。 ②溫度預處理的影響：在植物組織培養(yǎng)以前先對培養(yǎng)材料進行低溫或高溫處理，往往有促進生長的作用，因此，常在培養(yǎng)實踐中采用低溫預處理。胡蘿卜切片在4 ℃下處理16～32 min，比未處理的生長得快。天竺葵莖尖在10 ℃低溫下處理1～4周，可大大提高莖尖繁殖

16、數(shù)量。 (2)光照 組織培養(yǎng)中光照也是重要條件，它對生長和分化有很大影響。培養(yǎng)菊花的光照強度為1 000～4 000 Lux，每天光照不少于14.5 h。 (3)pH 培養(yǎng)基中的pH也是制約組織培養(yǎng)是否成功的重要因素，不同外植體對pH要求不盡相同，進行菊花的組織培養(yǎng)pH宜控制在5.8左右。 4．能源和滲透壓 通常植物本身進行光合作用產生糖類，不需要從外部供給糖，但在植物組織培養(yǎng)進行異養(yǎng)的狀況下，大多不能進行光合作用來合成糖類，因此必須在培養(yǎng)基中添加糖，作為碳素來源和能量物質，同時糖對保持培養(yǎng)基的滲透壓(一般需維持在1.5×105～4.1×105Pa)也有重要作用。 5．無菌技術是

17、植物組織培養(yǎng)成功的關鍵 無菌技術是植物組織培養(yǎng)成功的關鍵。原因是：植物組織培養(yǎng)不同于扦插、分根、葉插等常規(guī)無性繁殖。由于植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，所以對培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長，如一些細菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會導致實驗前功盡棄，因此要進行嚴格的無菌操作。 無菌技術包括培養(yǎng)基滅菌和植物材料(外植體)的消毒。對培養(yǎng)材料進行表面消毒時，一方面要考慮藥劑的消毒效果；另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料，甚至不同器官要區(qū)別對待。 　影響植物組織培養(yǎng)的因素包括(　　) ①培養(yǎng)基的配

18、制　②外植體的選取?、奂に氐倪\用　④消毒?、轀囟?、pH、光照 A．①②③④⑤ B．①②③ C．①②③④ D．①②③⑤ 【思路點撥】　進行植物組織培養(yǎng)，對培養(yǎng)條件要求相當嚴格需要配制適宜培養(yǎng)基。外植體的脫分化因植物種類、器官來源及其生理狀態(tài)的不同而有很大差別。另外在培養(yǎng)過程中需要無菌操作及適宜的溫度、pH、光照等條件。 【答案】　A 2．無菌技術是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關鍵，以下說法正確的是(　　) ①由于植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對無菌操作的要求非常嚴格?、趯ε囵B(yǎng)基及器械用高壓蒸汽滅菌?、蹖ε囵B(yǎng)材料進行表面消毒時，一方面要考慮藥劑的消毒效果，另一方面還要考

19、慮植物材料的耐受能力?、芘囵B(yǎng)中不同藥劑、不同植物材料，甚至不同器官要區(qū)別對待?、輰ε囵B(yǎng)材料可用高壓蒸汽滅菌?、奕绻恍⌒囊鹞廴?，將可能造成培養(yǎng)工作前功盡棄 A．①②③④⑤ B．①②③④ C．①②③④⑥ D．①②③④⑤⑥ 【解析】　對培養(yǎng)材料用高壓蒸汽滅菌會殺死細胞。 【答案】　C 嘗試菊花的組織培養(yǎng) 1.配制三種培養(yǎng)基 (1)MS培養(yǎng)基 MS培養(yǎng)基由大量元素、微量元素和有機成分組成，也可將大量元素、微量元素和有機成分分別配成濃度為配方的5～10倍的母液，用時稀釋。 (2)發(fā)芽培養(yǎng)基 3 000 mL MS培養(yǎng)基＋含1.5 mg BA的溶液＋含0.02 mg NAA

20、的溶液＋30 g蔗糖＋40 g瓊脂，再加蒸餾水至4 000 mL，混合均勻、加熱、分裝、加封口膜后，1 kg壓力下滅菌20 min。 (3)生根培養(yǎng)基 1 000 mL MS培養(yǎng)基＋含0.38 mg NAA的溶液＋30 g蔗糖＋20 g 瓊脂，再加蒸餾水至2 000 mL，混合均勻，加熱、分裝，1 kg壓力下滅菌20 min。 2．溶解兩種植物激素 (1)用少量0.1 mol/L NaOH溶解萘乙酸(人工合成的生長素類似物NAA)。 (2)用少量0.1 mol/L HCl溶解芐基腺嘌呤(人工合成的細胞分裂素BA)(以上兩種植物激素也可制成母液于冰箱中保存)。 3．進行菊花莖段組織培

21、養(yǎng) ①胚狀體是離體的細胞經組織培養(yǎng)形成的與胚非常相似的結構。例如：花藥中花粉胚狀體叢芽生根移栽。 ②在植物培養(yǎng)過程中，一般情況脫分化不需要光，再分化需要光；特殊情況，整個過程都需要光，例如：菊花的組織培養(yǎng)。 　請回答下列有關植物組織培養(yǎng)的幾個問題： (1)離體植物組織和細胞培養(yǎng)常用的一種培養(yǎng)基是________，其主要成分中的大量元素有________，培養(yǎng)中常用的兩種植物激素是________和________，兩者使用時的________、________、________等，都會影響實驗的結果。 (2)利用無菌苗植物組織培養(yǎng)的一般步驟為________

22、_________________ ____________________________________________________________。 若所使用的外植體來自自然生長的植株，則可將材料先置于________中浸泡10 min再放入________溶液中浸泡5 min，然后再次放于另一該濃度溶液中浸泡5 min，最后用________沖洗，將切段培養(yǎng)在________培養(yǎng)基中。 (3)下圖表示植物組織培養(yǎng)的部分過程： ①過程是________，②過程是________，A是________。 (4)組織培養(yǎng)過程中還需要維持一定的外界條件，一是要有適宜的____

23、____；二是________。 【思路點撥】　進行植物組織培養(yǎng)常使用MS培養(yǎng)基，其主要成分包括植物生長所必需的大量元素、微量元素，有機成分等，進行植物組織培養(yǎng)順序包括配制MS培養(yǎng)基及生根、生芽培養(yǎng)基，接種外植體、轉接培養(yǎng)、移栽鍛煉及栽培等。 【答案】　(1)MS培養(yǎng)基　N、P、K、Ca、Mg、S　生長素 細胞分裂素　濃度　使用的先后順序　用量的比例 (2)制備MS固體培養(yǎng)基和生芽培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基；接種外植體；培養(yǎng)；移栽鍛煉；栽培　70%乙醇　5%次氯酸鈉　無菌水　生芽 (3)脫分化　再分化　愈傷組織 (4)溫度　無菌(環(huán)境) 3．菊花的組織培養(yǎng)的大致過程如下圖所示。請回答

24、下列問題： (1)外植體的消毒：選取生長旺盛的嫩枝，沖洗干凈。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數(shù)為70%的________中浸泡10 min，再放入5%的________中浸泡5 min兩次，最后在________中用________清洗。 (2)菊花組織培養(yǎng)過程中，啟動細胞分裂、B____________(填名稱)、再分化的關鍵激素是____________。通過B過程產生的愈傷組織細胞與枝條韌皮部細胞形態(tài)結構________(填“相同”或“不同”)，其根本原因是___________ __________________________________________

25、____________________。 (3)該實驗操作成功的關鍵是____________，所以要對外植體、超凈工作臺等消毒，對________等滅菌，實驗操作過程都要在______________旁進行。試管幼苗的獲得證明菊花體細胞具有________性。 【解析】　本題主要考查選修1生物技術實踐中關于菊花的組織培養(yǎng)。菊花的組織培養(yǎng)過程中外植體的消毒過程是選取生長旺盛的嫩枝，沖洗干凈。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數(shù)為70%的酒精中浸泡消毒，再用5%的次氯酸鈉溶解浸泡消毒，最后在超凈臺中用無菌水清洗掉消毒液。菊花組織培養(yǎng)過程中，啟動細胞分裂、B脫分化、再分化的關鍵激素

26、是細胞分裂素、生長素。通過B過程產生的愈傷組織細胞與枝條韌皮部細胞形態(tài)結構不同，其根本原因是基因選擇性表達。該實驗操作成功的關鍵是無菌技術，所以要對外植體、超凈工作臺等消毒，對培養(yǎng)基或培養(yǎng)器具等滅菌，實驗操作過程都要在酒精燈的火焰旁進行。試管幼苗的獲得證明菊花體細胞具有全能性。 【答案】　(1)酒精　次氯酸鈉溶液　超凈臺　無菌水 (2)脫分化　細胞分裂素、生長素　不同　基因選擇性表達 (3)無菌操作或無菌技術　培養(yǎng)基或培養(yǎng)器具　酒精燈的火焰　全能 1．進行植物組織培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中加入生長素與細胞分裂素，兩者的摩爾濃度比決定組織是生根還是生芽，則生長素/細胞分裂素比例高、比例低及摩爾

27、濃度相等時分別有利于(　　) A．生根、生芽、愈傷組織繼續(xù)生長不分化 B．生芽、生根、愈傷組織繼續(xù)生長不分化 C．愈傷組織繼續(xù)生長不分化、生根、生芽 D．愈傷組織繼續(xù)生長不分化、生芽、生根 【解析】　兩種激素的摩爾濃度比相等時，愈傷組織生長不分化。生長素＞細胞分裂素時，有利于生根。 生長素＜細胞分裂素時，有利于生芽。 【答案】　A 2．植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)都需要無菌操作，下列不適宜用高壓蒸汽滅菌的是(　　) A．接種環(huán)和鑷子 B．三角瓶和廣口瓶 C．發(fā)芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基 D．用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽 【解析】　適宜用高壓蒸汽滅菌的是培養(yǎng)基和培養(yǎng)器具。培養(yǎng)的幼莖和幼芽

28、應用70%的酒精和5%的次氯酸鈉進行消毒。 【答案】　D 3．在菊花的組織培養(yǎng)操作完成了3～4天后，觀察同一溫室中的外植體，發(fā)現(xiàn)有的瓶內外植體正常生長，有的瓶內外植體死亡，你認為外植體死亡的原因不可能是(　　) A．培養(yǎng)條件，比如pH、溫度等不適宜 B．接種時外植體未滅菌 C．接種工具灼燒后未待冷卻就接種外植體 D．將外植體倒插入培養(yǎng)基中 【解析】　同一溫室中的外植體有正常生長的，因此排除pH和溫度條件不適宜的可能。 【答案】　A 4．下列與菊花莖段組織培養(yǎng)相關的敘述正確的是(　　) A．培養(yǎng)過程中涉及三種培養(yǎng)基，MS培養(yǎng)基適于形成愈傷組織，然后依次轉入生根及生芽培養(yǎng)基中培

29、養(yǎng) B．可在一種培養(yǎng)基中完成全部培養(yǎng)過程 C．外植體只可來自通過無菌培養(yǎng)的菊花幼苗，不能取自天然生長的菊花植株 D．外植體可選自天然生長的菊花植株，但須對其進行消毒處理 【解析】　在組織培養(yǎng)過程中愈傷組織應先轉入生芽培養(yǎng)基再轉入生根培養(yǎng)基。組織培養(yǎng)過程中用到三種培養(yǎng)基，不能在一種培養(yǎng)基上完成培養(yǎng)的全部過程。外植體既可來自通過無菌培養(yǎng)的菊花幼苗，也可取自天然生長的菊花植株。 【答案】　D 5．下面是有關植物組織培養(yǎng)的問題，請回答： (1)MS培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基，其母液由大量元素、微量元素和________組成。培養(yǎng)基中芐基腺嘌呤/萘乙酸的摩爾濃度比決定了組織的分化方向

30、，比值低時促進________的生長，比值高時促進________的生長。 (2)植物組織培養(yǎng)的主要理論依據(jù)是________。 A．單細胞可進行繁殖 B．植物細胞具全能性 C．植物可在試管中培養(yǎng) D．能快速培育花卉 (3)污染是組織培養(yǎng)過程中常見問題，用自然生長的菊花莖進行組織培養(yǎng)，需用70%的________和5%的次氯酸鈉溶液對菊花莖浸泡，最后在________中用無菌水清洗。操作中鑷子要用____________處理，防止帶菌。為確定污染來自培養(yǎng)基滅菌不徹底還是接種污染，可設置__________________________對照。 【解析】　芐基腺嘌呤是人工合成的細胞分裂素類似物，萘乙酸是人工合成的生長素類似物。 【答案】　(1)有機物　根　芽 (2)B　(3)乙醇　超凈臺　酒精燈灼燒　經過滅菌但未接種的培養(yǎng)基 12