2019-2020年高三生物一輪復(fù)習(xí) 第四十二講 細(xì)胞工程學(xué)案.doc
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2019-2020年高三生物一輪復(fù)習(xí) 第四十二講 細(xì)胞工程學(xué)案 考綱要求 1.植物的組織培養(yǎng)(Ⅱ)。2.動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克隆(Ⅰ)。3.細(xì)胞融合與單克隆抗體(Ⅱ)。 知識(shí)梳理 一.植物細(xì)胞工程 1.細(xì)胞工程 (1)操作水平:細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平。 (2)目的:按照人的意愿來(lái)改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品。 2.植物細(xì)胞的全能性 (1)概念:具有某種生物全部遺傳信息的任何一個(gè)細(xì)胞,都具有發(fā)育成完整生物體的潛能。 (2)原理:細(xì)胞內(nèi)含有本物種的全部遺傳信息。 (3)全能性表達(dá)條件:具有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu),處于離體狀態(tài),提供一定的營(yíng)養(yǎng)、激素和其他適宜外界條件。 3.植物組織培養(yǎng)技術(shù) (1)概念理解 ①培養(yǎng)對(duì)象:離體的植物組織、器官或細(xì)胞。 ②培養(yǎng)條件:無(wú)菌、人工配制的培養(yǎng)基、相關(guān)激素等人工控制條件。 ③培養(yǎng)結(jié)果:產(chǎn)生愈傷組織、叢芽,最終形成完整的植株。 (2)操作流程 4.植物體細(xì)胞雜交技術(shù) (1)概念:將不同種的植物體細(xì)胞,在一定條件下融合成雜種細(xì)胞,并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。 (2)操作流程 (3)流程分析 ①過(guò)程a為去除細(xì)胞壁獲得具有活力的原生質(zhì)體,用到的酶是纖維素酶和果膠酶。 ②過(guò)程b是原生質(zhì)體的融合,其原理是細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性。 ③誘導(dǎo)b融合的兩種方法:物理法包括離心、振動(dòng)、電激等;化學(xué)法一般用聚乙二醇(PEG)作為誘導(dǎo)劑。 ④過(guò)程c是原生質(zhì)體融合后再生出細(xì)胞壁。 ⑤過(guò)程d是植物組織培養(yǎng)技術(shù),其原理是細(xì)胞的全能性。 (4)意義:克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。 5.植物細(xì)胞工程的應(yīng)用 (1)植物繁殖的新途徑 微型繁殖:保持優(yōu)良品種的遺傳特性,高效快速地實(shí)現(xiàn)大量繁殖 作物脫毒:利用分生區(qū)附近如莖尖組織培養(yǎng)獲得脫毒苗 人工種子:胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等包上人工種皮制成 (2)作物新品種的培育:?jiǎn)伪扼w育種、突變體的利用。 (3)細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn):培養(yǎng)到愈傷組織階段。 深度思考 研究人員研究了馬鈴薯莖尖外植體大小對(duì)幼苗的成苗率和脫毒率的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖,請(qǐng)思考。 (1)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,莖尖大小與脫毒率、成苗率關(guān)系如何? (2)馬鈴薯脫毒培養(yǎng)中莖尖外植體的適宜大小為多少mm? 提示?。?)據(jù)圖可知,莖尖越小脫毒率越高,成苗率越低。 (2)當(dāng)莖尖大小為0.27 mm時(shí)脫毒率和成苗率相對(duì)都較高。 二.動(dòng)物細(xì)胞工程 1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)——?jiǎng)游锛?xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ) (1)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程 (2)培養(yǎng)條件 ①無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境:對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理,添加抗生素,定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物。 ②營(yíng)養(yǎng):除正常的有機(jī)和無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)外,加入血清、血漿等一些天然成分。 ③適宜的溫度和pH:溫度為36.50.5_℃(哺乳動(dòng)物),pH為7.2~7.4。 ④氣體環(huán)境:含95%空氣加5%CO2的混合氣體,其中后者的作用是維持培養(yǎng)液的pH。 (3)應(yīng)用:生物制品的生產(chǎn)、檢測(cè)有毒物質(zhì)、醫(yī)學(xué)研究。 2.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物 (1)動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)的過(guò)程 (2)原理:動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性。 (3)結(jié)果:產(chǎn)生新個(gè)體。 3.動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備 (1)動(dòng)物細(xì)胞融合 ①原理:細(xì)胞膜的流動(dòng)性。 ②融合方法:聚乙二醇(PEG)、滅活的病毒、電激等。 ③意義:突破了有性雜交方法的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能,也為制造單克隆抗體開辟了新途徑。 (2)單克隆抗體 ①制備過(guò)程 ②優(yōu)點(diǎn):特異性強(qiáng)、靈敏度高,可大量制備。 ③用途:作為診斷試劑;用于治療疾病和運(yùn)載藥物。 要點(diǎn)精析 1.植物組織培養(yǎng)的過(guò)程 植物組織培養(yǎng)的條件 (1)離體:這是因?yàn)樵谏矬w內(nèi)基因的表達(dá)在空間和時(shí)間上具有選擇性。 (2)營(yíng)養(yǎng)條件:水、無(wú)機(jī)鹽、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),以及激素(生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素)。 (3)環(huán)境條件 ①適宜的溫度、pH——確保酶的活性。②無(wú)菌——這是因?yàn)榧?xì)菌等微生物繁殖快,消耗營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)多,同時(shí)產(chǎn)生有害的代謝產(chǎn)物,毒害植物細(xì)胞。③光照——這是因?yàn)楣庹沼欣诩?xì)胞內(nèi)葉綠素的形成和光合作用的進(jìn)行?! ? 2.植物組織培養(yǎng)與植物體細(xì)胞雜交的比較 名稱 植物組織培養(yǎng) 植物體細(xì)胞雜交 原理 細(xì)胞的全能性 細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性和細(xì)胞的全能性 過(guò)程 應(yīng)用 ①繁殖 ②培育新品種 ③生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)品 克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,培育作物新品種 易錯(cuò)警示! (1)植物體細(xì)胞雜交獲得的雜種細(xì)胞的類型有三種(以上圖為例):AA型、BB型、AB型,符合要求的只有AB型,需要進(jìn)行篩選。 (2)雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志:新的細(xì)胞壁的生成。 (3)雜種植株遺傳物質(zhì)的變化:雜種植株的變異類型屬于染色體變異,雜種植株的染色體數(shù)通常是兩親本細(xì)胞染色體數(shù)目之和,雜種植株屬于異源多倍體。 3.比較動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、核移植與動(dòng)物細(xì)胞融合 比較 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 核移植 動(dòng)物細(xì)胞融合 原理 細(xì)胞增殖 動(dòng)物細(xì)胞核的全能性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性 過(guò)程 結(jié)果 相同分化程度的細(xì)胞群 與供體基本相同的個(gè)體 雜交細(xì)胞 關(guān)鍵環(huán)節(jié) 細(xì)胞增殖(分裂)、細(xì)胞癌變 核融合、細(xì)胞分化 人工誘導(dǎo)細(xì)胞膜融合 應(yīng)用 ①生產(chǎn)生物制品 ②基因工程 ③檢測(cè)有毒物質(zhì) ①加速良種繁育 ②保護(hù)瀕危物種 ③生產(chǎn)醫(yī)用蛋白 ④提供克隆器官、組織等 獲得雜種細(xì)胞,制 備細(xì)胞產(chǎn)物如單克 隆抗體 特別提醒 細(xì)胞貼壁和接觸抑制 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上,稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞數(shù)目不斷增多,當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。 4.植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合(單克隆抗體的制備)的比較 植物體細(xì)胞雜交 動(dòng)物細(xì)胞融合(單克隆抗體的制備) 原理 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖 融合前處理 酶解法(纖維素酶、果膠酶)去除細(xì)胞壁 注射特定抗原,免疫處理正常小鼠 促融方法 (1)物理法:離心、振動(dòng)、電激等; (2)化學(xué)法:聚乙二醇(PEG) (1)物理法、化學(xué)法:與植物細(xì)胞融合相同; (2)生物法:滅活的病毒 意義和用途 克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,大大擴(kuò)展雜交的親本組合范圍 (1)制備單克隆抗體; (2)診斷、治療、預(yù)防疾病 5.制備單克隆抗體過(guò)程中兩次篩選的方法及目的 項(xiàng)目 第一次篩選 第二次篩選 篩選原因 誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞,另外還有未融合的細(xì)胞 由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激,所以經(jīng)選擇性培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞 篩選方法 用特定的選擇培養(yǎng)基篩選:未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞(“BB”細(xì)胞、“瘤瘤”細(xì)胞)都會(huì)死亡,只有融合的雜交瘤細(xì)胞(“B瘤”細(xì)胞)才能生長(zhǎng) 用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng),在每個(gè)孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè),經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群 篩選目的 得到雜交瘤細(xì)胞 得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞 試題精粹 1.(xx湖北七市聯(lián)考,40)育種工作者利用不同的方法進(jìn)行了如下四組實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題。 (1)圖Ⅰ過(guò)程由番茄韌皮部細(xì)胞形成幼苗A的過(guò)程需要經(jīng)過(guò)________兩個(gè)關(guān)鍵步驟,該過(guò)程依據(jù)的原理是_________。 (2)植物組織培養(yǎng)除了需要提供一定的營(yíng)養(yǎng)、________、溫度和光照外,還必須在________的條件下進(jìn)行。 (3)已知番茄的紅果(Y)對(duì)黃果(y)為顯性,少室(M)對(duì)多室(m)為顯性,控制兩對(duì)相對(duì)性狀的基因分別位于兩對(duì)同源染色體上。用紅果多室(Yymm)番茄植株的花粉進(jìn)行Ⅱ、Ⅲ有關(guān)實(shí)驗(yàn),則Ⅱ過(guò)程中,從花粉形成幼苗B所進(jìn)行的細(xì)胞分裂方式是________。Ⅲ過(guò)程中植物體C的基因型為________(細(xì)胞A為兩兩融合細(xì)胞)。 (4)圖Ⅲ、Ⅳ過(guò)程中需要去除細(xì)胞壁,獲得具有活力的______。 (5)在圖中Ⅳ過(guò)程中,經(jīng)過(guò)鑒別和篩選后,通常植物體D能表現(xiàn)出兩個(gè)親本的遺傳性狀,根本原因是__________。 2.(xx河北衡水中學(xué)調(diào)研)如圖為利用人成纖維細(xì)胞(具分裂能力、能在HAT培養(yǎng)基上存活)和小鼠骨髓瘤細(xì)胞(具分裂能力、不能在HAT培養(yǎng)基上存活)進(jìn)行人類基因定位的操作示意圖,請(qǐng)回答: (1)圖示技術(shù)名稱為________,該技術(shù)的基礎(chǔ)是________技術(shù)。 (2)操作所用的成纖維細(xì)胞應(yīng)在________代以內(nèi);誘導(dǎo)融合運(yùn)用了________原理,該過(guò)程中區(qū)別于原生質(zhì)體融合的方法是用________處理。 (3)HAT培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基,其中需要加入________等天然物質(zhì)。 (4)培養(yǎng)時(shí)pH一般為________;操作中加入烏本苷的目的是______________。 (5)如表所示為雜交細(xì)胞A、B、C中存在的人類染色體及人類特有的4種酶(“+”表示存在,“-”表示不存在),這4種酶均為單基因編碼產(chǎn)生,據(jù)表判斷,編碼________酶的基因位于染色體2上。 雜交細(xì)胞 A B C 人類染色體 1 - + + 2 + - + 3 + + - 酶 m + - + n - + + p + - + q - + + 3.細(xì)胞工程根據(jù)操作對(duì)象的不同,可分為植物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞工程兩大領(lǐng)域。近年來(lái),細(xì)胞工程領(lǐng)域成果迭出,方興未艾。請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題。 (1)應(yīng)用植物組織培養(yǎng)技術(shù),可以高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖。植物組織培養(yǎng)技術(shù)所依據(jù)的生物學(xué)原理是________。欲利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育無(wú)病毒植株,選材時(shí)一般選取________。 (2)應(yīng)用植物體細(xì)胞雜交技術(shù),能創(chuàng)造出常規(guī)雜交育種無(wú)法得到的作物新品種。在進(jìn)行體細(xì)胞雜交之前,必須先利用________酶去除細(xì)胞壁,獲得具有活力的原生質(zhì)體。在進(jìn)行原生質(zhì)體間的融合時(shí),常使用的誘導(dǎo)劑是________。 (3)應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),可以大量地生產(chǎn)各種抗病疫苗。在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)之前,需先用________酶處理組織塊,使其分散成單個(gè)細(xì)胞。進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),所需氣體主要有________;另外,所用的合成培養(yǎng)基中通常需加入________等一些天然成分。 (4)應(yīng)用雜交瘤技術(shù),能為人類提供診治腫瘤的單克隆抗體。制備單克隆抗體過(guò)程中,經(jīng)選擇培養(yǎng)得到的雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行________和________,經(jīng)多次篩選可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。與常規(guī)的抗體相比,單克隆抗體具有的顯著特點(diǎn)是________。 4.(xx安徽銅陵期末)人工種子是人們模仿天然種子的結(jié)構(gòu)制造出來(lái)的生命有機(jī)體,它能像天然種子一樣萌發(fā)生長(zhǎng)。人工種子的核心部分是胚狀體,其培育過(guò)程如圖所示。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題。 (1)制作人工種子依據(jù)的原理是________;制作過(guò)程的關(guān)鍵是確保無(wú)菌操作,其原因是________________。 (2)②表示脫分化的過(guò)程,其實(shí)質(zhì)是________;③表示再分化的過(guò)程,其實(shí)質(zhì)是________。培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的濃度、________、________影響②、③過(guò)程的進(jìn)行。 (3)從保證人工種子正常的生命力以及生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)上來(lái)看,人造種皮應(yīng)具有半透性(透水、透氣性)和________的特點(diǎn)。 (4)某二倍體植物的基因型為DdTt,利用花藥離體培養(yǎng)的方法,可培育成“花粉胚”,也可制成人工種子,這種種子萌發(fā)形成的個(gè)體稱為________,從生殖方式看屬于________生殖。 5.人的血清白蛋白在臨床上需求量很大,通常從人血中提取。由于艾滋病病毒(HIV)等人類感染性病原體造成的威脅與日俱增,使人們對(duì)血液制品顧慮重重。如果應(yīng)用一定的生物工程技術(shù),將人的血清白蛋白基因轉(zhuǎn)入奶牛細(xì)胞中,利用牛的乳腺細(xì)胞生產(chǎn)血清白蛋白就成為可能。其過(guò)程大致如下: a.將人體血清白蛋白基因?qū)搿澳膛E咛ァ钡募?xì)胞中,形成細(xì)胞①; b.取出細(xì)胞①的細(xì)胞核,注入去核牛卵細(xì)胞中,形成細(xì)胞②; c.電脈沖刺激細(xì)胞②促使其形成早期胚胎; d.將胚胎移植到母牛的子宮內(nèi),最終發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小牛。 (1)人體血清白蛋白基因通常可以從基因文庫(kù)中獲取,含有一種生物所有基因的文庫(kù)稱為________,獲得人體血清白蛋白基因后可以利用________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增,該技術(shù)要用到一種特殊的________酶。當(dāng)受精卵分裂到囊胚期時(shí),需要取囊胚的________細(xì)胞做DNA分析,進(jìn)行性別鑒定,以確保發(fā)育成熟的牛能分泌乳汁。 (2)實(shí)驗(yàn)過(guò)程b利用的技術(shù)是________,胚胎工程操作中終端的環(huán)節(jié)是________。 (3)該過(guò)程培養(yǎng)的牛被稱為克隆牛。與其相比,試管牛培育過(guò)程特有的生物技術(shù)是________。 (4)若將早期胚胎分離成若干個(gè)胚胎細(xì)胞,讓其分別發(fā)育成小牛,這些小牛的基因型________(填“相同”或“不同”),此項(xiàng)技術(shù)稱為________,在對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行操作時(shí),需要特別注意的問(wèn)題是________,否則會(huì)影響胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。 6.細(xì)胞融合技術(shù)有著廣泛應(yīng)用。下圖表示細(xì)胞融合的簡(jiǎn)略過(guò)程,據(jù)圖回答相關(guān)問(wèn)題。 (1)若a、b分別是基因型為yyRr和YYrr兩個(gè)玉米品種的花粉,且這兩對(duì)基因分別位于兩對(duì)同源染色體上。科學(xué)家分別將它們的花粉除去細(xì)胞壁,然后誘導(dǎo)其融合,再把這些融合細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),培育出了玉米新品種。 ①這兩個(gè)品種的花粉可用化學(xué)誘導(dǎo)劑________誘導(dǎo)融合,共可產(chǎn)生________種基因型的融合細(xì)胞(僅考慮兩兩融合),這些融合細(xì)胞經(jīng)過(guò)脫分化形成________,再經(jīng)培養(yǎng)可以得到________種不同于親本基因型的玉米新品種。 ②若想培育出基因型為yyRR的玉米植株,也可直接用yyRr植株的花粉培養(yǎng),再經(jīng)過(guò)________處理并篩選獲得,這種方法叫做________。 (2)若a、b表示番茄和馬鈴薯兩種植物的體細(xì)胞,請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題。 ①在“番茄—馬鈴薯”雜種植株的培育過(guò)程中,運(yùn)用了植物細(xì)胞工程中的________技術(shù),植物體細(xì)胞融合完成的標(biāo)志是________。 ②a、b細(xì)胞融合之前,要用到的酶是________,酶處理后得到________。 (3)若a、b分別為骨髓瘤細(xì)胞和已免疫的B淋巴細(xì)胞,請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題。 ①為了能充分發(fā)揮上述兩種細(xì)胞各自的特點(diǎn),經(jīng)特殊處理,在促細(xì)胞融合因子的作用下,兩種細(xì)胞發(fā)生融合,形成圖中的d細(xì)胞,d細(xì)胞的特點(diǎn)是____________________。 由d細(xì)胞產(chǎn)生的抗體與普通血清抗體相比較,具有_______________等特點(diǎn)。 ②下列各圖表示單克隆抗體制備過(guò)程的各階段圖解,請(qǐng)用箭頭把代表各圖解的字母按單克隆抗體制備過(guò)程的順序連接起來(lái):________。 高考真題 1.(xx廣東理綜,29)鐵皮石斛是我國(guó)名貴中藥,生物堿是其有效成分之一,應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)鐵皮石斛擬原球莖(簡(jiǎn)稱PLBs,類似愈傷組織)生產(chǎn)生物堿的實(shí)驗(yàn)流程如下。 在固體培養(yǎng)基上,PLBs的重量、生物堿含量隨增殖培養(yǎng)時(shí)間的變化如下圖所示,請(qǐng)回答下列問(wèn)題。 (1)選用新生營(yíng)養(yǎng)芽為外植體的原因是___________________,誘導(dǎo)外植體形成PLBs的過(guò)程稱________。 (2)與黑暗條件下相比,PLBs在光照條件下生長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在________________,________________,________________。 (3)脫落酸(ABA)能提高生物堿含量,但會(huì)抑制PLBs的生長(zhǎng)。若采用液體培養(yǎng),推測(cè)添加適量的ABA可提高生物堿產(chǎn)量。 同學(xué)們擬開展探究實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該推測(cè),在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案時(shí)探討了以下問(wèn)題: ①ABA的濃度梯度設(shè)置和添加方式:設(shè)4個(gè)ABA處理組,1個(gè)空白對(duì)照組,3次重復(fù)。因ABA受熱易分解,故一定濃度的無(wú)菌ABA母液應(yīng)在各組液體培養(yǎng)基________后按比例加入。 ②實(shí)驗(yàn)進(jìn)程和取樣:實(shí)驗(yàn)50 d完成,每10 d取樣,將樣品(PLBs)稱重(g/瓶)后再測(cè)定生物堿含量。如初始(第0天)數(shù)據(jù)已知,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還需測(cè)定的樣品數(shù)為________。 ③依所測(cè)定數(shù)據(jù)確定適宜的ABA濃度和培養(yǎng)時(shí)間:當(dāng)某3個(gè)樣品(重復(fù)樣)的________________________時(shí),其對(duì)應(yīng)的ABA濃度為適宜濃度,對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間是適宜培養(yǎng)時(shí)間。 2.(xx全國(guó)課標(biāo)Ⅰ,40)某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z),每只小鼠免疫5次,每次免疫一周后測(cè)定各小鼠血清抗體的效價(jià)(能檢測(cè)出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù)),結(jié)果如下圖所示。 若要制備雜交瘤細(xì)胞,需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞(染色體數(shù)目40條),并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞(染色體數(shù)目60條)按一定比例加入試管中,再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合,經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測(cè),得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞。 回答下列問(wèn)題。 (1)制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時(shí),所用免疫小鼠的血清抗體效價(jià)需達(dá)到16 000以上,則小鼠最少需要經(jīng)過(guò)______次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中,最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是________小鼠,理由是______________。 (2)細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后,融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外,可能還有________________,體系中出現(xiàn)多種類型細(xì)胞的原因是_________。 (3)雜交瘤細(xì)胞中有________個(gè)細(xì)胞核,染色體數(shù)目最多是________條。 (4)未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活,原因是________________。 3.(xx海南卷,31)單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV1)可引起水泡性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗HSV1的單克隆抗體可快速檢測(cè)HSV1。 回答下列問(wèn)題: (1)在制備抗HSV1的單克隆抗體的過(guò)程中,先給小鼠注射一種純化的HSV1蛋白,一段時(shí)間后,若小鼠血清中抗________的抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性,說(shuō)明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了________反應(yīng),再?gòu)男∈蟮腳_______中獲取B淋巴細(xì)胞。將該B淋巴細(xì)胞與小鼠的________細(xì)胞融合,再經(jīng)過(guò)篩選、檢測(cè),最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞,該細(xì)胞具有的特點(diǎn)是______________。 (2)若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體,可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的_______________中使其增殖,再?gòu)腳_____________中提取、純化獲得。 (3)通過(guò)上述方法得到的單克隆抗體可準(zhǔn)確地識(shí)別這種HSV1蛋白,其原因是該抗體具有________________和________________等特性。 4.(xx.重慶卷.7)(10分)xx年埃博拉病在非洲蔓延,我國(guó)派出醫(yī)療隊(duì)首次在境外組建醫(yī)院,幫助治療埃博拉疫情。 (1)研究表明,埃博拉病毒侵入機(jī)體后,通過(guò)靶向感染、破壞吞噬細(xì)胞等,使其不能暴露病毒的_____,以致感染信息不能呈遞給_____,阻止正常激活細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答過(guò)程,導(dǎo)致機(jī)體對(duì)該病毒的____免疫功能下降。因此,病毒在體內(nèi)快速增殖、致病。 (2)對(duì)志愿者接種埃博拉試驗(yàn)疫苗后,機(jī)體免疫系統(tǒng)能產(chǎn)生相應(yīng)抗體,還能產(chǎn)生的免疫細(xì)胞有__________。 (3)用埃博拉病毒的某種蛋白免疫小鼠,通過(guò)_______技術(shù)獲得雜交瘤細(xì)胞,用于生產(chǎn)單克隆抗體治療該病。 5.(xx.福建卷.33)【生物-現(xiàn)代生物科技專題】(10分) GDNF是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)作用。研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體(如圖1所示),并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中,用于干細(xì)胞基因治療的研究。請(qǐng)回答: (1)在分離和培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過(guò)程中,使用胰蛋白酶的目的是。 (2)構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體時(shí),需選擇圖1中的限制酶進(jìn)行酶切。 (3)經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接,連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有三種:?jiǎn)蝹€(gè)載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接(如圖1所示)。為鑒定這3種連接方式,選擇HpaI酶和BamHI酶對(duì)篩選的載體進(jìn)行雙酶切,并對(duì)酶切后的DNA片段進(jìn)行電泳分析,結(jié)果如圖2所示。圖中第 泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的。 (4)將正向連接的表達(dá)載體導(dǎo)入神經(jīng)干細(xì)胞后,為了檢測(cè)GDNF基因是否成功表達(dá),可用相應(yīng)的 與提取的蛋白質(zhì)雜交。當(dāng)培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞達(dá)到一定的密度時(shí),需進(jìn)行培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細(xì)胞,用于神經(jīng)干細(xì)胞移植治療實(shí)驗(yàn)。- 1.請(qǐng)仔細(xì)閱讀文檔,確保文檔完整性,對(duì)于不預(yù)覽、不比對(duì)內(nèi)容而直接下載帶來(lái)的問(wèn)題本站不予受理。
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